GLP在全组分分析中的应用

兆 奇，赵欣昕

(沈阳化工研究院有限公司，辽宁 沈阳 110021)

农药是实行登记管理的，在向各个国家的政府提供登记资料时，对于原药还需要提供原药全组分分析报告。目前大多数国家需要提供的是五批次原药的全组分分析报告。虽然各个国家对登记资料的要求不尽相同，但是目前美国、日本、欧盟众多国家都需要提供全组分分析的GLP报告。我国自2017年2月《农药管理规范》的实施，以及《农药登记试验单位管理规范》的实施，也明确了我国原药登记中需要提供全组分分析报告也要符合GLP要求。本文将就全组分分析的要求、GLP全分析项目的关键点以及GLP项目中的角色关系进行介绍。

1 全组分分析的要求

1.1 设备要求 对于全组分分析来说，因为登记要求中，需要提供紫外、红外、核磁、气质、液质的定性谱图，所以对应的这些仪器也是必不可少的。对于定量而言，通常采用的手段为液相色谱法、气相色谱法、化学分析法等，所以最基本的要求试验机构应该拥有液相色谱仪、气相色谱仪等分析仪器；对于有些原药，可能还会用到离子色谱仪。以上这些是最基本的仪器要求，由于全组分分析中需要对相关杂质和0.1%以上的杂质进行定性定量分析，所以仪器本身的精密度、检出限也要满足以上的试验要求。

除此之外，GLP要求用于试验的仪器应按照SOP的要求定期进行检查、清洗、保养和校准，校准应尽量溯源到国家或国际测量标准。由于全分析试验中涉及到的仪器一般均配备工作站计算机系统，所以在启用前，应该对整套的仪器设备进行验证，包括各个组件、模快、工作站系统。

1.2 人员要求 在进行原药的定性定量分析时，除了需要以上设备外，最主要的还是需要有能力的项目负责人(SD)。项目负责人的要求分为两个方面：首先是技术能力要求，如：扎实的有机化学基础、丰富的化学分析经验、对原药杂质的结构要有精准的判断等；应熟悉国际上对相关杂质的登记要求、熟悉各个国家对全分析报告的要求、以及各国的法律规范。其次GLP中还要求SD要对试验全过程和最终报告负责。包括批准试验计划；确保试验全过程的完整性和真实性；确保试验按照试验计划和SOP实施；确保完整记载试验产生的全部原始数据；与QA人员、委托方、试验人员保持畅通的沟通；在最终报告中签署遵循GLP程度的声明等。

1.3 质量体系要求 要完成一个全分析项目，还需要一套质量体系作为其支撑。这个质量体系要有程序控制，才能保证结果的可靠性；试验阶段程序化运作才能保证试验结果可溯源，可重复。质量体系有很多种，目前国际上大多数国家，如美国、日本、欧洲国家等OECD成员国通常对农药登记认可的质量体系为GLP体系。这些国家也相继出台了整套的GLP法律法规规范，我国自2017年《农药管理条例》实施以来，农业农村部也相继出台了《农药登记试验管理办法》、《农药登记试验质量管理规范》、《农药登记试验单位评审规则》等新规，这也表明我国的农药登记正式进入了GLP法规时代。

2 GLP全组分分析项目的关键点

2.1 全组分分析的试验流程 全组分分析的试验流程简单来说主要有三步。

2.1.1 要有一份经项目负责人批准的试验计划书 在计划书中主要的技术内容就是除了要确定原药中有效成分的分析方法以外，还必须确定>0.1%的杂质以及登记要求的相关杂质的结构，并且获得这些杂质参照物。计划书中还要阐述这些杂质检测的分析方法。

2.1.2 接下来就是按照试验计划书进行正式试验 试验过程首先是针对有效成分和杂质进行定性分析，比照参照物，通过紫外、红外、核磁、质谱等方法来证明有效成分和杂质的结构；其次就是对这些确认的组分进行定量分析。在定量分析之前，还要将选定的分析方法进行验证，通过特异性、精密度、回收率、线性范围来验证此方法可靠；对于杂质，分析方法验证通常还要求进行检出限(LOD)和定量限(LOQ)试验。最后才能采用验证过的方法，对这些组分进行定量分析。

2.1.3 以上试验结束后，就是根据原始数据撰写最终报告 该报告要总结所有的试验数据、描述试验过程、给出试验结论。形成报告初稿后，要经过质量保证部门的审核、委托方的审核，最后经项目负责人批准。

2.2 GLP的要点 所谓GLP项目，无非就是需要满足GLP准则的基本要求。而GLP项目的基本要点如下：

2.2.1 资源 是指需要有固定的组织机构、足够的人员、满足试验条件的设施和设备；

2.2.2 规则 是指要有书面的规程来指导试验全流程，健全的文件来支撑项目，合理的试验计划书指导试验；

2.2.3 表征 是指被试物和整个试验体系，全组分分析涉及的就是物理-化学体系；

2.2.4 记录 是指所有的原始数据、形成的最终报告和所有数据和样品档案；

2.2.5 质量保证 QA要贯穿于整个项目，从试验计划审查、试验阶段审查到最终报告和原始记录审查。

2.3 GLP全分析项目的关键点 综合以上全组分分析和GLP的要点，可以汇总出GLP全分析项目的关键点如下：

2.3.1 仪器设备及计算机化系统的验证 对于GLP项目中用到的仪器设备，目前使用的大多数都具有计算机化系统，而对于这类仪器设备最主要的就是验证活动。除了需要对仪器本身进行4Q确认之外，还要对其使用的计算机化系统以及相关的设施进行验证。而验证活动必须从设定验证计划开始，按照验证计划实施验证活动之后，形成验证报告来评估整个系统的可靠性。

2.3.2 全组分分析项目的试验计划 一份成功的试验计划书，要有科学性、通过QA和委托方审核、便于试验人员使用、符合GLP准则要求、信息完整、具有唯一性、受控分发。而全组分分析的试验计划成败在于预实验。预实验可以分为两步：一是基本预实验，是指项目负责人对主成分和杂质进行剖析，初步确定杂质的可能结构。结合生产工艺路线，确定杂质来源，对杂质结构进行进一步判断。二是深入预实验，这时需要获得杂质参照物，与被试物进行比对，判断其是否为同一物质。待预实验完成之后，就可以进行试验设计，确定可靠的分析方法，当然这包括主成分和杂质的分析方法都需要确定下来。这些都完成之后就可以起草试验计划书了。

2.3.3 原始数据 原始数据是所有结论的依据，其包括试验现象、溶液配制过程、原始称样量、试验过程记录、谱图、选用的色谱方法、仪器的序列表、Excel计算、工作站中的电子数据、仪器使用记录、仪器维护记录等在试验过程中产生的所有数据。在GLP中要求试验需要按照试验计划和SOP进行；产生的数据均要直接、迅速、准确、字迹清楚地记录下来。这些记录均需要有签名并标注日期。变更任何原始数据，不得涂改掩盖先前的记录。应说明数据变更的理由，并有变更人员的签字和日期。另外，在全组分分析中的数据处理通常会使用到Excel表格，如果提前将这些Excel模板进行验证，就可以大大提高工作效率，并且保证数据可靠。

2.3.4 分析方法 通常进行全组分分析时采用的多是非通用方法，所以就要求对该方法进行验证。对于主成分通常需要进行特异性或专属性、线性范围、精密度和回收率的方法验证；对于杂质还需要给出定量限和检出限的验证过程。

2.3.5 最终报告 从试验计划开始描述要做的，试验过程就是通过原始数据反映如何按照试验计划进行的，而最终报告则是将已经做过的试验全部报告出来。最终报告的格式要符合登记国家的要求，涵盖试验计划书中要求的所有内容，被试物信息、委托方信息、实验室的基本信息，报告所有试验过程，给出试验结果，资料的保存期限和保存地点。还有不可缺少的就是项目负责人对整个项目的GLP符合性声明以及QA声明。

2.3.6 归档 这里需要归档的资料包括：被试物(参照物)记录、委托方信息记录、原始记录、所有谱图、仪器使用记录、试验计划书及其分发记录、计算过程、产生的电子数据等以及试验计划书中明确需要归档的资料。档案不仅仅是指纸质资料，还包括样品档案和电子档案。所有这些的保存期限、放置地点都需要在最终报告中明示。

3 GLP项目中的角色关系

委托方：GLP项目是由委托方发起的，所以在GLP准则中也明确了委托方的责任，要求委托方也要遵守准则的要求。目前我们国内的好多委托方还没有建立起GLP概念，在委托项目时不了解自己的义务，在跟试验单位合作时就缺乏GLP意识，不知道应该关注哪些环节，应该提供什么样的被试物，自己在试验计划审核时倾注的注意力不够，批准的很随意，在项目进行时没有跟试验单位进行有效的沟通，只在拿到报告时才开始提各种各样的要求。这样可能会导致整个项目的不顺利。所以，作为委托方是有义务了解GLP准则的，试验单位也要在与委托方的沟通合作中不断灌输GLP观念给委托方，这样大家的合作才会愉快而长久。

对于试验单位而言，委托方是外部关系，而内部中，在GLP项目中担当主要角色的有三个：机构负责人(TFM)、项目负责人(SD)和质量保证人员(QA)。这三方的关系应该是个坚固的“铁三角”。机构负责人的作用应该是提供资源，包括软件和硬件；任命SD；以及支持QA。项目负责人是整个GLP项目的责任人，应该具有全组分分析中的科学家身份，也具有项目的管理者身份。他应该是整个项目的灵魂人物，要关注和掌控整个项目。同时要与委托方、试验人员和QA进行广泛的沟通。QA的作用则主要是进行项目审查，从试验计划、试验的关键阶段到最终报告和原始记录的审查。除此之外，QA还要按照计划对整个机构进行设施核查。质量保证部就是外部审查部门设立在机构内部的审查部门，时刻关注整个机构，每个GLP项目的动向。因此，QA应该是非常熟悉GLP准则的，同时在大多数机构，QA还会承担起GLP准则的培训工作。

综上所述，GLP良好运行的标志如下：GLP体系文件健全完整；设备精良，验证充分；人员配制合理，培训到位；各岗位职责明确；团队沟通顺畅有效。具备了以上几个关键点，就会制造出一个又一个完美的GLP全组分分析项目。