维生素D及其受体水平与结直肠腺瘤的相关性研究

祝行琴

（浙江大学医学院附属第二医院 浙江 杭州 310008）

结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤，其在我国的发病率正逐年攀升，尤其在东南沿海等发达地区[1]。而结直肠腺癌是由结直肠腺瘤逐步发展而来，因此，通过研究结直肠腺瘤的发病机制能够进一步揭示结直肠腺癌的起源。维生素D广为人知的功能是其调节小肠、骨骼和肾脏对钙离子的吸收及代谢。近年来，有研究者认为维生素D与结直肠癌有着密不可分的联系[2]。基于以上研究现状，本研究旨在探讨维生素D及其受体与结直肠癌癌前病变——结直肠腺瘤的相关性。

1.资料与方法

1.1 一般资料

2016—2017年期间收集本院被确诊为结直肠腺瘤患者病例45例，其中男性22例，女性23例，年龄36～72岁，获取其全血标本及组织标本。纳入标准：经病理学确诊的结直肠腺瘤患者，具有完整临床和病理资料；无免疫相关疾病或其他原发肿瘤病史。以同时期本院健康查体人群30例作为正常对照组，排除自身免疫相关疾病及长期服用激素者。

1.2 ELISA技术测定血浆维生素D浓度

收集全血标本，离心并取上清，于-80℃长期保存。采用25羟基总维生素D定量测定试剂盒(LIAISON 25-OH Vitamin D TOTAL Assay，DiaSorin Inc.USA)，利用LIAISON化学发光分析仪检测，试剂盒检测范围为4.0～150ng/mL。

1.3 RNA的提取

收集组织用液氮冷冻后于存-80℃长期保存。组织加入Trizol试剂后进行匀浆处理，将组织充分裂解。随后加入氯仿200μL，剧烈震荡15s，12000g离心15min，将上清液移至另一离心管中，加入等体积异丙醇冰上沉淀，75%乙醇洗涤、空气干燥后，以适量DEPC水溶解并检测RNA的纯度及浓度。

1.4 荧光实时定量PCR技术

取上述提取的RNA为模板，首先进行逆转录PCR将RNA转录成cDNA，再以cDNA为模板进行实时定量PCR。VDR引物上游：CTGACCCTGGAGACTTTGAC，下游：TTCCTCTGCACTTCCTCATC。反应条件：变性95℃ 5s、退火55℃ 15s、延伸72℃ 20s，40个循环。以2-△△Ct法分析目的基因相对表达量。

1.5 统计学处理

采用SPSS20.0进行数据分析。正态分布资料以均数±方差描述，两组比较采用两独立样本t检验；非正态资料以中位数(IQR)表示，两组比较采用Mann-whitney U检验分析。

2.结果

2.1 维生素D在结直肠腺瘤患者中低表达

经检测，正常组血浆中25-OH-D的浓度（41.35ng/ml±4.570ng/ml）明显高于结直肠腺瘤组（22.28ng/ml±2.445ng/ml，P＜0.01）；同时，我们将腺瘤组的血浆维生素D浓度与患者的年龄、性别、吸烟、饮酒、肿瘤的部位、大小、病理类型等进行相关性分析，发现均无相关性。而将维生素D缺乏作为独立危险因素进行分析，其腺瘤组表现为（OR：4.875；95%CI：2.144～11.084）。

2.2 维生素D受体在结直肠腺瘤患者中低表达

以正常组的组织作为参照，正常组织VDRmRNA的表达水平（1.00±0.22）明显高于腺瘤组织（0.52±0.08，P＜0.01），但结直肠腺瘤组织中VDRmRNA的表达与患者的年龄、性别、吸烟、饮酒、肿瘤大小、病理类型等的关系，我们未发现其相关性。

3.讨论

有文献报道称维生素D缺乏是结直肠癌的危险因素，研究发现循环血中25-(OH)D的水平与大肠癌的患病风险呈负相关[3]。而本研究中两组血浆维生素D比较来看，正常组明显高于腺瘤组（P＜0.01），将维生素D缺乏作为危险因素计算出腺瘤组（OR：4.875；95%CI：2.144～11.084），研究结果进一步说明维生素D在腺瘤形成的时期便开始减少，并贯穿从腺瘤到腺癌的过程，可以作为结直肠腺瘤的独立危险因素。而维生素D发挥生物学效应的重要条件之一便是与维生素D受体相结合。有研究证实，维生素D能在结肠腺癌细胞中与维生素D受体结合，从而通过调节下游靶基因如MYC、EGFR等，促进肿瘤细胞的凋亡，从而抑制细胞增殖[4]。因此，若缺乏维生素D受体，则即使补充维生素D也无法发挥抗肿瘤的作用。结合本研究中的发现，腺瘤组织中的维生素D受体表达显著降低（P＜0.01），这说明维生素D受体表达水平的降低从结直肠腺瘤阶段已经发生了，并贯穿结直肠癌癌变的过程。在结直肠腺瘤患者中维生素D受体表达的底下以及血浆维生素D水平的降低共同影响促进了腺瘤的发生发展并进一步促进腺瘤向腺癌发展的进程。

综上所述，血浆维生素D可作为结直肠腺瘤的危险因素，维生素D或可作为预防结直肠腺瘤的药物，但由于服用高剂量的维生素D存在高钙血症的风险，因此在注重提高维生素D摄入量的同时再提高维生素D受体的水平使之能更好地结合共同发挥抗肿瘤作用，同时也能不引起高钙血症。另一方面，由于维生素D缺乏在正常人群中也普遍存在[5]，将维生素D作为结直肠腺瘤的诊断标志物并不合适。

[1]代珍,郑荣寿,邹小农，等.中国结直肠癌发病趋势分析和预测[J].中华预防医学杂志, 2012, 46(7): 598-603.

[2] Ranji P,Akbarzadeh A,Rahmati-Yamchi M.Associations of Probiotics with Vitamin D and Leptin Receptors and their Effects on Colon Cancer[J].Asian Pac J Cancer Prev.2015;16(9):3621-7.

[3] Jenab M,Bueno-de-Mesquita HB,Ferrari P,et al.Association between pre-diagnostic circulating vitamin Dconcentration and risk of colorectal cancer in European populations:a nested case-control study[J]. BMJ. 2010,340:b5500.

[4]方莹,宋皓军,丁小云. 维生素D抗结直肠癌的研究进展[J].肿瘤, 2014; 11:1064.

[5] Khadilkar VV,Khadilkar AV.Use of Vitamin D in Various Disorders[J]. Indian J Pediatr.2013;80(3):215-8.