细胞周期蛋白E在白血病中的表达与临床检验学研究

马吉芳 赫俊雅 王镱达 杨晓樨

（辽宁省辽阳市中心医院检验科，辽宁 辽阳 111000）

由于肿瘤的发生与细胞周期的调控异常密切相关，因此目前对它的研究正成为肿瘤生物学研究的一个重要课题。细胞各个周期中以G1期最为重要，许多细胞外及细胞内增殖的调控物质主要作用于此。细胞周期蛋白E（CyclinE）为G1期的周期蛋白，也是周期过程的基本的和广泛的调节因子。有关CyclinE在白血病中的作用，目前国内外研究的不多，国内仅有个别报道，而慢性粒细胞白血病（CML）CyclinE表达国内外均未见研究报道。本院应用免疫组化方法检测了152例急、慢性白血患者CyclinE表达，并探讨其临床检验学意义[1-2]。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：①本组白血病患者152例，男72例，女性80例，年龄4～75岁，平均年龄41.6岁。急性淋巴细胞白血病（ALL）48例，初治32例，复发4例，治疗后缓解12例。急性非淋巴细胞白血病（ANLL）30例，M 2型4例，M 3型4例，M 4型8例，M 5型12例，M 6型2例，初治20例，治疗后缓解10例。非霍奇金淋巴瘤/慢淋白血病（NHL/CLL）3例。慢性粒细胞白血病（CML）68例，慢性期28例，缓解期20例，急变/加速期20例。②正常对照组40例，男、女各20例，年龄20～45岁，平均年龄36.2岁。

1.2 检测方法：①标本制备：取患者新鲜骨髓直接涂于防脱胶玻片上，干燥后，丙酮固定10 m in，置-20 ℃保存备检，对照组用相同方法。②试剂：抗CyclinE单克隆抗体，DAB显色剂，柠檬酸型抗原修复缓冲液均购于福建迈新生物技术公司。③CyclinE基因蛋白免疫组化检测方法：采用免疫组化SP法，涂片经高温高压进行抗原修复后，用3% H2O2阻断内源性过氧化物酶，10%非免疫羊血清阻断非特异性抗原，一抗孵育2 h，二抗，三抗分别孵育20 min，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。以上操作均在室温15～20 ℃下进行。

1.3 图象分析：免疫组化图象利用OIYNIPS BX51高清晰度彩色图文分析系统，在光镜下分析和采集数据图象。

1.4 免疫组化结果判断：CyclinE阳性反应均为胞核中出现棕色颗粒，在普通的生物显微镜下，每片计数200个细胞，计算阳性细胞百分率。“一”（0分）即阴性反应，“+”l分）为胞核1/2以下区域出现棕黄色颗粒，“＋+”（2分）为胞核1/2-2/3区域出现棕黄色颗粒，“＋+＋”（3分）为胞核中全部出现棕黄色颗粒，可呈片状分布。

1.5 统计学处理：采用SPSS10.0统计软件进行χ2检验，P＜0.05具有统计学差异。

2 结 果

2.1 本组152例白血病患者CyclinE表达结果见表1，结果显示各组CyclinE阳性表达与对照组比较，均有显著差异（P＜0.001），以ANLL表达最高，NHL/CLL6例全部强表达，因例数少，未行统计学处理。

表1 白血病患者CyclinE表达

2.2 CML不同病期CyclinE表达结果见表2，结果显示慢性期、急变/加速期CyclinE阳性表达与正常对照组有显著差异（P＜0.001），慢性期、急变/加速期CyclinE阳性表达明显高于缓解期（P＜0.05）。

表2 CML不同病期CyclinE表达

表3 急性白血病治疗前后CyclinE表达

2.3 急性白血病治疗前后CyclinE表达结果见表3，结果显示，初治（包括4例复发）患者CyclinE阳性表达与治疗后缓解患者CyclinE表达有显著差异（P＜0.05）。

3 讨 论

白血病发生是由于正常骨髓造血细胞染色体多重损伤引起的复杂过程，其最终表现为细胞周期调控机制紊乱，造血细胞增殖分化异常。CyclinE属G1期细胞周期的正调节因子，是CDK2调节亚基，参与G1/S转换点功能调控，CyclinE高表达可促使细胞通过G1期，过度增殖形成肿瘤。CyclinE作为一种细胞周期调控因子参与白血病细胞周期调控，在肿瘤细胞的形成和发展中起了重要作用。CyclinE在多种肿瘤中有基因扩增和过表达，被证实是一种癌基因[3-4]。目前认为CyclinE在白血病中也可能为癌基因[5]。

临床检验研究表明：检测152例白血病患者，包括急性白血病（ALL、ANLL）、慢性白血病（CML，NHL/CLL），各组CyclinE阳性表达与对照组比较均有显著差异（P＜0.001），以ANLL表达最高，分析可能这组病例中M 4（8/30）、M 5（12/30）所占比例大有关，与Lida[6]报道结果一致。他的研究还报道CyclinE表达阳性的AML患者缓解率（CR）为67%，M 4，M 5的CR为50%，但CyclinE表达阴性的AML患者CR率为83%，M 4，M 5的CR率为88%，提示CyclinE蛋白水平对判断预后有一定的意义。本院初步研究病例数较少，但临床上ANLL中M 4，M 5型的疗效差是否与CyclinE高表达有关，有待进一步探讨。Wolow iec[7]用Westen blot方法分析25例CLL患者外周血淋巴细胞发现15/25CyclinE表达阳性，且表达模式与健康人不同，本院检测了6例NHL/CLL患者骨髓CyclinE表达为100%强阳性，因例数少需进一步观察[8]。

此外，本院观察了急性白血病初治与缓解后CyclinE的表达，提示经治疗缓解后CyclinE阳性表达下降。观察了CML不同病期CyclinE表达，结果显示慢性期、急变/加速期CyclinE表达增高，缓解期表达下降。提示CyclinE表达对白血病在监测病情进展、指导预后方面有重要的临床意义。造血细胞的周期调控异常是白血病发生过程中的关键事件，CyclinE在白血病的发生、发展中起了重要作用。但细胞周期调控极其复杂，全面揭示白血病细胞周期调控机制，需进一步深入研究。

[1]龙洋,边彤,师帅.细胞周期蛋白E在白血病中的表达与前瞻性研究[J].中华医学检验杂志,2015,38(3):163-166.

[2]周新.检验医学考核指南[M].武汉:湖北科学技术出版社,2008:301-309.

[3]江山,阳光,苏宁.细胞周期蛋白E与白血病的关系与临床检验学研究[J].中国实验诊断学,2015,38(3):168-169.

[4]Haas K.Malignant transformation by cyclinE and Ha-Ras corrdates with lower sensitivity towards induction of ce11 death but requires functional Myc and CDK4[J].Oncogene,2013,15(21):2615-2623.

[5]王颖,徐世荣.细胞周期E与白血病[J].中华血液学杂志,2015,36(4):219-221.

[6]Lida H.Overexpression of cyclin E in acute myelogenous leukemia[J].Blood,2013,106(9): 3707-3713.

[7]Wolowiec D.ExPresslon of cell cycle regulatory proteins in chronic lymphocytic leukemias,comparison with non-Hodgkin's lympomas and non-neoplastic lympboid tissue[J].Leukemia,2015,29(9):1382 -1388.

[8]白继文,王长印.检验医学问答[M].北京:人民卫生出版社,2008:201-209.