骨肉瘤中EGFR、HER-2的表达及其临床意义

秦晓飞，张勇勇，陈文吉，韩 志

骨肉瘤是全球青少年最常见的骨原发恶性肿瘤，由于转移和化疗抵抗，骨肉瘤患者预后较差。广泛的肿瘤切除，新辅助放、化疗使骨肉瘤患者存活率有显著改善，但5年生存率仍保持15%～30%[1]。寻找判断肿瘤的预后或对临床治疗具有指导意义的分子标记并进行选择性靶向治疗，对提高骨肉瘤治疗的效果有重要意义。两者作为肺癌、乳腺癌、胃癌等靶向治疗的靶点及化疗耐药相关的基因得到广泛深入的研究，并已应用于临床。本文检测骨肉瘤中EGFR、HER-2的表达，分析EGFR、HER-2在骨肉瘤中的作用及其与临床病理特征的关系，旨在为骨肉瘤的治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1临床资料收集2009年1月～2016年12月河南省洛阳正骨医院收治的骨肉瘤45例，其中男性27例，女性18例，年龄10～64岁，平均28岁，中位年龄20.5岁，病程15天～18个月；组织学类型：低级别骨肉瘤8例(髓内高分化骨肉瘤5例、皮质旁骨肉瘤3例)，普通型骨肉瘤37例。入组标准：(1)经术前病理穿刺确诊为骨肉瘤；(2)穿刺前未经放、化疗及药物治疗；(3)在我院拟采取新辅助化疗后手术治疗。排除标准：(1)合并有除骨肉瘤以外的其他恶性肿瘤；(2)合并严重的心肝肾等系统性疾病。本实验获医院伦理委员会审核，患者均知情同意。另收集37例骨肉瘤患者肿瘤周围正常骨组织作为对照。

1.2试剂兔抗人单克隆抗体EGFR、HER-2及EnVision法检测试剂盒均购自福州迈新公司。

1.3方法活检的肿瘤组织均经10%中性福尔马林固定，包埋石蜡，4 μm厚连续切片，脱蜡水化；磷酸盐缓冲液冲洗，滴加EGFR、HER-2一抗，4 ℃过夜；磷酸缓冲液冲洗，滴加二抗，37 ℃孵育20 min；磷酸缓冲液冲洗，DAB显色；自来水充分冲洗，复染，脱水透明，封固。

1.4结果判断EGFR阳性表达于胞膜或胞质，HER-2阳性表达于胞膜，阳性信号均为淡黄色至棕褐色。结果判读采用半定量计分法，即染色强度结合阳性肿瘤细胞百分比综合评分。按染色强度标准计分：细胞弱着色，即阳性信号在400倍视野下可见但在低倍视野下不清晰为1分；细胞中度着色，即阳性信号在40倍视野下清晰可见为2分；细胞强着色，即阳性信号在40倍视野下清晰可见为3分。按阳性细胞百分比标准计分：≤5%为0分；6%～25%为1分；26%～50%为2分；>50%为3分。将两项得分结果相乘：0分为不表达；1～2分为弱表达；3～6分为中度表达；7～9分为强表达。将不表达和弱表达定义为阴性，中度表达和强表达定义为阳性。

1.5统计学分析采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。阳性率比较采用χ2检验，应用Spearman相关分析。

2 结果

2.1EGFR在骨肉瘤中的表达45例患者骨肉瘤组织中EGFR阳性34例(75.6%)，其中24例强阳性(图1)，11例阴性(24.4%)。肿瘤周围正常骨组织中未见EGFR表达。骨肉瘤组织中EGFR蛋白阳性率高于肿瘤周围正常骨组织(P均<0.05)。

2.2HER-2在骨肉瘤中的表达45例患者骨肉瘤组织HER-2阳性9例(20%)(图2)，阴性36例(80%)，未见有强阳性。肿瘤周围正常骨组织中未见HER-2表达。骨肉瘤组织中HER-2蛋白阳性率高于肿瘤周围正常骨组织(P均<0.05)。

①②

图1EGFR在骨肉瘤组织中的表达，EnVision法图2HER-2在骨肉瘤组织中的表达，EnVision法

2.3EGFR、HER-2表达与骨肉瘤临床病理特征的关系EGFR、HER-2表达与骨肉瘤患者性别、年龄、肿瘤大小无关(P均>0.05)；EGFR在普通型骨肉瘤中的阳性率显著高于高分化型骨肉瘤，HER-2在普通型骨肉瘤中的阳性率与高分化型骨肉瘤无明显差异；有肺部或其它部位转移的骨肉瘤患者EGFR阳性率显著高于无转移组，HER-2在有骨肉瘤转移组和无转移组中的表达无明显差异；TNM分期Ⅰ期骨肉瘤组织EGFR阳性率与Ⅱ+Ⅲ、Ⅳ期组织比较，差异有显著性(P均<0.05)；TNM分期Ⅰ期骨肉瘤组织HER-2阳性率与Ⅱ+Ⅲ期、Ⅳ期比较，差异无显著性(P>0.05，表1)。

2.4骨肉瘤中HER-2表达与EGFR表达的相关性45例骨肉瘤中，9例EGFR、HER-2共表达，25例EGFR阳性、HER-2阴性，无HER-2阳性、EGFR阴性骨肉瘤。采用Spearman相关分析，骨肉瘤中HER-2与EGFR表达，无显著相关性。

表1 EGFR、HER-2表达与骨肉瘤临床病理特征的关系

3 讨论

HER家族(HER-1/EGFR、HER-2、HER-3、HER-4)受体蛋白在肿瘤发生和疾病进展中起关键性作用，它们与相应的配体结合后，形成同源二聚体或异源二聚体，使受体的酪氨酸激酶发生自磷酸化，从而激活细胞内的信号传导通路，调节细胞的增殖、凋亡、血管发生、黏附和运动性。许多肿瘤发生均与该受体突变、过表达、自泌反馈环刺激等导致的EGFR激活有关[2]。EGFR是原癌基因C-erbB-1的表达产物，与肿瘤细胞的增殖、黏附、侵袭、转移和肿瘤细胞的凋亡等密切相关。EGFR在多种肿瘤中如结肠癌、肺癌、乳腺癌等肿瘤中存在高表达或基因扩增[3-5]。

本组结果显示：EGFR在骨肉瘤组织中的阳性率为75.6%，且与肿瘤分化程度、TNM分期、肺转移密切相关。普通型骨肉瘤组EGFR阳性率显著高于高分化型骨肉瘤。TNM分期Ⅱ+Ⅲ、Ⅳ期组EGFR阳性率明显高于Ⅰ期组。EGFR阳性增加骨肉瘤患者发生肺转移的风险。提示EGFR参与骨肉瘤的瘤细胞增殖、侵袭、转移等过程。EGFR蛋白表达可作为骨肉瘤恶性程度判断指标。EGFR靶向抑制剂，在针对不同肿瘤的治疗中，取得显著的疗效[6]。2004年美国FDA批准酪氨酸激酶抑制剂阿法替尼用于携带EGFR基因突变的晚期非小细胞肺癌患者的治疗；然而酪氨酸激酶抑制剂目前尚未用于治疗骨肉瘤。EGFR阳性率与正常骨组织相比显著升高，且与骨肉瘤恶性程度密切相关，提示EGFR可能成为骨肉瘤治疗的靶点。EGFR抑制剂发挥直接的抗骨肉瘤效应并呈剂量依赖的方式[7]，研发新的EGFR抑制剂可以成为骨肉瘤治疗的有效途径。

HER-2与EGFR具有约50%的同源性，可接受表皮生长因子样物质的信息，刺激细胞增殖，具有酪氨酸激酶的活性。在15%～20%的乳腺中发现HER-2过表达，HER-2靶向药物曲妥珠单抗成为治疗乳腺癌最有希望的突破之一[8-9]。HER-2在食管鳞状细胞癌中也存在过表达，是潜在预后好的指标[10]。本组结果显示HER-2在骨肉瘤中阳性率为20%，比Mardanpour等[11]报道的结果稍低。本组骨肉瘤中9例HER-2阳性者，EGFR均阳性，提示两者的表达有一定关系，但分析结果显示两者的相关性无显著性，可能与样本量相对较小有关。本实验未发现HER-2表达与骨肉瘤患者肺转移之间的相关性，提示HER-2阳性不能成为骨肉瘤患者肿瘤转移的危险因素。

综上所述，骨肉瘤中EGFR表达增高与骨肉瘤分化程度、TNM分期密切相关，与骨肉瘤肺转移密切相关，可能参与骨肉瘤的发生、发展，并促进骨肉瘤转移，其可作为骨肉瘤恶性程度的判断指标。

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