高效液相色谱法测定食用油中苯并（a）芘

陈冬兰 石叶蓉 陈晓岚

摘要 采用苯并（a）芘分子印迹柱做固相微萃取，用二氯甲烷洗脱食用油中苯并（a）芘，用带有荧光检测器的高效液相色谱（激发波长292 nm，发射波长410 nm）检测食用油中苯并（a）芘含量。结果表明，苯并（a）芘在0.5～20.0 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好，相关系数为0.999 91，在空白样品中添加3 个水平的标准品，回收率在96.8%～99.1% 之间。该法洗脱效果良好、操作简易、灵敏度高、回收率稳定。

关键词 高效液相色谱法；苯并（a）芘；食用油；分子印迹柱；荧光检测器

中图分类号 TS227 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）21-0254-01

Determination of Benzo（a）pyrene in Edible Oil by High Performance Liquid Chromatography

CHEN Dong-lan SHI Ye-rong CHEN Xiao-lan

（Rugao Comprehensive Testing Center in Jiangsu Province，Rugao Jiangsu 226500）

Abstract The benzo（a）pyrene molecularly imprinted column was used for solid phase microextraction.The benzo（a）pyrene in edible oil was eluted with dichloromethane.The excitation wavelength was 292 nm with high performance liquid chromatography with fluorescence detector.The emission wavelength was 410 nm，and the benzo（a）pyrene content in the edible oil was measured.The results showed that the linear relationship of be-nzo（a）pyrene in the concentration range of 0.5-20.0 ng/mL was good，the correlation coefficient was 0.999 91，and three levels of standard were added to the blank sample.The recovery rate was between 96.8% and 99.1%.The method had good elution effect，with the characteristics of simple operation，high sensitivity and stable recovery rate.

Key words high performance liquid chromatography； benzo（a）pyrene；edible oil；molecularly imprinted column；fluorescence detector

苯并（a）芘，英文縮写为BaP，是一种常见的高活性间接致癌物和突变原[1]，由一个苯环和一个芘分子结合而成的多环芳烃类化合物。已经检查出的逾400种主要致癌物中，50%以上是属于多环芳烃一类的化合物。食用油脂本身并不含有或很少含有此类物质，但在种植、加工、运输和烹调过程中往往受到污染。世界各国规定了食用油脂中苯并（a）芘的最大残留限量，欧盟208/2005号文件规定食用油脂中苯并（a）芘的最大限量为2 μg/kg，我国《食用植物油卫生标准》（GB 2716—2005）规定苯并（a）芘最大限量为10 μg/kg。

1 材料与方法

主要仪器有Agilent 1260 高效液相色谱仪（配荧光检测器）、Agilent 固相萃取装置、分析天平（0.000 1 g）、氮吹仪、涡旋振荡器、Agela苯并（a）芘分子印迹柱（500 mg/6 mL）、孔径0.45 μm的有机系微孔滤膜、棕色容量瓶等。主要试剂有纯化水（HPLC级）、乙腈（HPLC级）、二氯甲烷（AR级）、正己烷（AR级）、苯并（a）芘标准溶液（100 mg/L，O2si公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 标准溶液的配制。①标准中间溶液（1 μg/mL）配制：吸取0.10 mL苯并（a）芘标准储备液（100 μg/mL），用乙腈定容到10 mL。②苯并（a）芘标准溶液配制：苯并（a）芘标准中间液（1.0 μg/mL）分别用乙腈稀释得到校准曲线溶液（0.5、1.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL），临用现配[2]。③检测限标液配制：配制0.2 ng/mL苯并（a）芘标准溶液，临用现配。

1.2.2 样品前处理。精确称取0.400 g试样，加入5 mL正己烷，旋涡混合0.5 min，待净化。将苯并（a）芘分子印迹柱固定到固相萃取装置上，关闭阀门加入5 mL二氯甲烷静置5 min，打开阀门，二氯甲烷自然流出，待液面降至柱床时，加入5 mL正己烷活化柱子[3]。液面降至柱床时关闭阀门。将待净化液转移进柱子，打开阀门，待液面降至柱床时用6 mL正己烷淋洗柱子，弃去流出液。用6 mL二氯甲烷洗脱并收集净化液到试管中。设置氮吹仪温度40 ℃、氮气流速2 mL/min，将净化液吹干。准确吸取0.4 mL乙腈涡旋复溶0.5 min。用孔径0.45 μm的有机系微孔滤膜过滤至液相样品瓶[4-6]。

1.2.3 仪器分析条件。Agilent 1260 型高效液相色谱仪荧光检测器，Poroshell 120EC-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，4 μm）；流动相为乙腈∶水=88∶12；流速为1 mL/min；柱温为35 ℃；激发波长为292 nm，发射波长为410 nm；进样量为20 μL；运行时间为8 min。

2 结果与分析

2.1 校正曲线绘制

待仪器基线稳定后，编辑序列，将配制好的标准溶液按照浓度从低到高的顺序依次进样，采用峰面积外标法进行定量分析。以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，作标准曲线方程，得回归方程Y=2.368 1X+0.301 7，相关系数为0.999 91。如图1所示，在此浓度范围内苯并（a）芘的峰面积和浓度线性关系良好。如图2所示，同时测得苯并（a）芘在此方法下的出峰时间为5.6 min。

2.2 精密度测定

分别进6针0.5、5.0、20.0 ng/mL的标准溶液，通过6次平行样的峰面积计算精密度如表1所示，重现性较好。

2.3 检测限测定

分别按照《食品安全国家标准 食品中苯并（a）芘的测定》（GB 5009.27—2016）方法[2]（图3）及本试验方法（图4）测定0.2 ng/mL苯并（a）芘标准溶液，计算信噪比。GB 5009.27—2016方法测得信噪比为17.7，本试验方法测试信噪比结果为783，显著高于GB 5009.27—2016方法，灵敏度较高。

2.4 加标回收率测定

如表2所示，称取0.4 g空白试样3 份，添加标准溶液，使加标水平分别达到 0.04、1.60、16.0 μg/kg，充分混匀，按照本试验建立的方法进行测定，3个添加水平的回收率在96.8%～99.1%之间，可以满足分析要求。

3 结论

本试验采用激发波长292 nm、发射波长410 nm检测器参数，灵敏度高，重现性良好。利用苯并（a）芘分子印记柱处理样品操作简便、洗脱效果良好、回收率稳定。

4 参考文献

[1] 刘宁，沈明浩.食品毒理学[M].北京：中国轻工业出版社，2007.

[2] 食用植物油卫生标准：GB 2716-2005[S].北京：中国标准出版社，2005.

[3]食品安全国家标准 食品中苯并（a）芘的测定：GB 5009.27-2016[S].北京：中国标准出版社，2016.

[4] 董广彬，李鹏，顾鑫荣，等.反相高效液相色谱法测定动植物油脂中苯并（a）芘含量[J].中国卫生检验杂志，2009，19（7）：1529-1530.

[5] 郑睿行，祝华明，龚鸿萍，等.凝胶渗透色譜-高效液相色谱联用测定食用植物油中苯并（a）芘[J].食品科学，2011，32（22）：209-212.

[6] 刘晓辉，陈艳，李永波，等.油炸面制品中的苯并[a]芘的高效液相色谱荧光测定法[J].职业与健康，2015，31（4）：456-458.