芋儿七的成分鉴定及抗氧化作用

王晓梅 王怡捷 赵立芳 段宇航 王金锁

(宝鸡文理学院化学化工学院，陕西省植物化学重点实验室，陕西 宝鸡 721013；*西安医学院附属宝鸡医院，陕西 宝鸡 721000)

芋儿七，又名鱼儿七、狮儿七、佛手七。为百合科延龄草属植物延龄草TrillimtschonoskiiMaxim.的干燥根和根茎，是著名的太白山“七药”之一。为多年生草本，生于海拔1300-2200米的山坡林下。性味：甘、辛，温。功效：补肝肾，强筋骨，止痛，止血，生肌。治疗肝肾虚损、腰膝酸软、关节不利、肢体麻木、头晕、目眩、月经不调、不孕不育、外伤出血等病[1,2]。芋儿七主要在当地民间使用，且具有显著的疗效，但对其所含化学成分及有效部位的研究却鲜有报道。本实验运用各种化学方法对芋儿七的化学成分进行初步的鉴定，并对芋儿七几种提取物的抗氧化活性进行探讨，以期为太白草药的开发利用提供实验室依据。

1 材料、试剂与仪器

芋儿七(购于眉县)，经陕西中医药大学胡本祥教授鉴定。茚三酮(上海源叶生物公司)；α-萘酚(上海鼓臣生物)；三羟甲基氨基甲烷(上海探求生物技术有限公司)；邻苯三酚(南京展云化工有限公司)；香草醛(阿拉丁试剂)；盐酸，浓硫酸，酒石酸钾钠，无水碳酸钠，次硝酸铋，三氯化铁，三氯化铝，枸橼酸，丙酮，醋酸镁，95%乙醇，无水乙醇，氢氧化钠，硫酸铜等均为市售分析纯。

ZF-7型暗箱三用紫外线分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)；UV-1200紫外可见分光光度计(郑州美谱达仪器有限公司)；DK-98-1电热恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司)；KQ5200E型超声波清洗器(上海市超声仪器有限公司)。

2 实验方法

2.1 提取物的制备

称取粉碎的芋儿七，分别以水、95%乙醇及乙酸乙酯为溶剂，以质体比1∶12浸泡提取芋儿七，超声提取30 min，静置后倾出上清液，沉渣再次提取，合并两次的上清液，经浓缩、干燥，研成粉末备用。

2.2 芋儿七提取物化学成分的鉴定

2.2.1氨基酸的鉴定

取芋儿七提取物溶液1 mL分别于试管中加入1%茚三铜试液2-3滴，加热煮沸4～5 min，观察现象。

2.2.2皂苷的鉴定

取芋儿七提取物溶液2 mL于带塞试管中，用力振摇3 min，观察现象。

2.2.3糖、多糖或苷类的鉴定

α-萘酚试验：取芋儿七提取物溶液1 mL加5%萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴入5-6滴浓硫酸，观察现象。

斐林反应：取2支试管，加入斐林试剂A和B各1.0 mL摇匀后分别加入取芋儿七提取物，摇匀后置沸水浴中加热数分钟，取出冷却，观察现象。

本尼迪哥特反应：取芋儿七提取物1 mL于试管中，分别加入本尼迪哥特试剂2 mL置沸水浴中加热数分钟，取出冷却，观察各管颜色变化。

2.2.4鞣质及酚类的鉴定

三氯化铁试验：取芋儿七提取物溶液1 mL加1%三氯化铁试液1～2滴，观察现象。

香草醛试验：取芋儿七提取物溶液点于滤纸上，干后滴加1%香草醛，观察现象。

2.2.5黄酮及苷类的鉴定

盐酸—镁粉试验：取芋儿七提取物溶液1 mL加少量镁粉后加浓盐酸4-5滴置沸水浴加热2-3 min，观察现象。

三氯化铝试验：取芋儿七提取物溶液点于滤纸上，干后喷雾1%三氯化铝乙醇试液，在紫外灯下观察现象。

硼酸丙酮枸橼酸丙酮试验：取芋儿七提取物溶液1 mL在沸水浴上蒸干加入饱和硼酸丙酮溶液及10%枸橼酸丙酮液各0.5 mL，蒸去丙酮后，在紫外灯下观察现象。

碱液试验：取芋儿七提取物溶液点于滤纸上，干后喷雾1%碳酸钠，观察现象。

2.2.6蒽醌类化合物的鉴定

Brongtrager’s反应：取芋儿七提取物适量，加2%氢氧化钠溶液数滴观察颜色变化。

浓硫酸反应：取样品适量，滴加浓硫酸观察颜色变化。

2.3 芋儿七提取物对超氧阴离子生成的影响

取10 mL试管，准确量取pH 8.2的0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液3.6 mL，去离子水3 mL和芋儿七提取物溶液(浓度分别为2 mg/mL，1 mg/mL，0.5 mg/mL，0.25 mg/mL，0.125 mg/mL，0.0625 mg/mL)1 mL，混合均匀，于25 ℃水浴保温20 min后，立即加入25 ℃预热的3 mmol/L邻苯三酚溶液0.2 mL，反应12 min后迅速倒入比色皿中，以0.1 mol/L Tris-HCl缓冲溶液作为参比，在345 nm处测定吸光度，记录数据为A样品，平行测三组，计算时取均值。以等体积去离子水代替邻苯三酚溶液以扣除样品本身的干扰，记录数据为A样品本体，平行测三组，计算时取均值。另设不加提取物溶液的空白组，记录数据为A空白，平行测三组，计算时取均值。按下列公式计算抑制率。

3 结果与讨论

3.1 芋儿七提取物中成分的鉴定

在茚三酮实验中两种提取物均呈紫色，说明芋儿七醇提物和水提物中含有氨基酸。

芋儿七醇提物、芋儿七水提物在泡沫实验中均产生大量持久性的泡沫，说明两种提取物都含有皂苷类物质。

在α-萘酚试验中，两种提取物均出现微紫色环，推断芋儿七醇提物及水提物都含有糖类。在费林试验和本尼迪特试验中醇提物分别呈砖红色和黄绿色，水提取物均呈黄色，提示芋儿七醇和水提物都含有还原糖。

在三氯化铁试验中，两种提取物都出现蓝绿色，在香草醛试验中，芋儿七醇提物和水提物均呈现红色斑点，说明芋儿七醇和水提物都含有酚类和鞣质。

表1 芋儿七提取物中黄酮类的鉴定Table 1 Identification of flavonoids of extractsfrom Trillium tschonoskii Maxim.

由表1可知在四种实验条件下，提取物大多发生阳性反应，提示两种提取物中均含有黄酮类物质。

在Brongtrager′s反应中，醇和水提物均产生红色物质，在浓硫酸反应中两种提取物均呈深棕色，说明两种提取物均含有蒽醌类物质。

综上可知，芋儿七中含有氨基酸，皂苷类，糖类，鞣质和酚类物质，黄酮类以及蒽醌类物质。

3.2 芋儿七提取物对超氧阴离子的抑制作用

图1 芋儿七提取物对超氧阴离子的抑制作用Fig 1 Inhibition on superoxide anion of extractsfrom Trillium tschonoskii Maxim.

由图1可以看出，芋儿七三种提取物对超氧阴离子的生成均有不同程度的抑制作用。其中乙酸乙酯提取物在各浓度均有强的抑制作用，抑制率随着提取物浓度的增大而增高，抑制率由66.7%增大到82.1%。芋儿七乙醇提取物对超氧阴离子的产生同样有一定的抑制作用，但各浓度的抑制率均低于相应浓度的乙酸乙酯提取物，最大抑制率为66.7 %。水提取物的抑制作用在低浓度时抑制作用很微弱，当水提取物浓度大于0.25 mg/mL之后，抑制率急剧增高，水提物浓度为2 mg/mL时，抑制率高达84.6%。

药用植物中含有多种成分且具有各种药理作用。糖类是植物药中最常见的成分，其中多糖具有各种药理活性[3,4]。黄酮类在药用植物中分布很广，且药理作用多种多样[5]，如黄芩素可降压、抑菌、利尿。槲皮素、杜鹃素有祛痰作用。蒽醌苷类大都有泻下作用，有些可抗菌、抗肿瘤。人参皂苷具有强壮作用，柴胡皂苷有止咳、解热镇痛等作用等。鞣质是具有复杂结构的酚类化合物，也是药用植物中最常见的一类成分，鞣质在医疗上常用于收敛止血、止泻、抗菌消炎等[6,7]。过氧化物质是一类性质活泼、具有很强氧化性的物质，超氧阴离子是生物体细胞在新陈代谢过程中，氧分子受单一电子还原的产物。超氧阴离子若生成过量可造成DNA、蛋白质的损伤进而生物功能的异常。

4 结 论

本实验通过多种实验方法测得芋儿七中含有氨基酸，皂苷类，糖类，鞣质和酚类物质，黄酮类以及蒽醌类物质。通过邻苯三酚自氧化法，得知芋儿七乙醇提取物，芋儿七乙酸乙酯提取物，芋儿七水提取物对超氧阴离子的生成均有较强的抑制作用，进而可发挥细胞保护作用。对芋儿七化学成分及药理作用的深入研究将在今后的工作中继续进行。

[1] 宝鸡市卫生局.太白山本草志[M]. 西安:陕西科学技术出版社,1987:317～318.

[2] 陕西省中草药科研组.陕西中草药[M]. 西安:陕西省出版社, 2000,40～47.

[3] 黄光辉,孙连娜.麦冬多糖的研究进展[J]. 现代药物与临床,2012,27(5):523～529.

[4] 邓小云,丁登峰,戴美红 等.植物多糖药理作用研究进展[J]. 中医药导报,2006,12(9):86～88.

[5] 陈晓明，倪峰.植物黄酮类化合物对机体免疫调节作用研究进展[J]. 福建中医药大学学报, 2010, 20(2):69～70.

[6] 冯卫生,臧新钰,郑晓珂.鞣质的研究进展[J]. 中国新药杂志,2009,18(14):1 308～1 311.

[7] 覃鲁珊,赵海平,赵艳玲 等.大黄蒽醌与鞣质对大鼠肝脏的保护和损伤双向作用[J]. 中国中西医结合杂志,2014,34(6):698～703.