子宫内膜癌组织中Elf5的表达变化及意义

杨荷，闫洪超

(1徐州医科大学研究生学院，江苏徐州221004;2徐州医科大学附属医院)

子宫内膜癌组织中Elf5的表达变化及意义

杨荷1，闫洪超2

(1徐州医科大学研究生学院，江苏徐州221004;2徐州医科大学附属医院)

目的探讨Elf5在子宫内膜癌组织中的表达情况及其临床意义。方法选取子宫内膜癌组织84例份、子宫内膜不典型增生组织30例份和正常子宫内膜组织30例份,用免疫组化法检测Elf5在不同内膜组织中的表达情况，分析其与子宫内膜癌患者各临床病理指标的相关性；对所有子宫内膜癌患者进行术后随访，采用Kaplan-Meier进行生存分析，Cox比例风险回归模型进行子宫内膜癌多因素分析。结果①子宫内膜癌组织Elf5阳性表达率低于正常子宫内膜组织及不典型增生子宫内膜组织(χ2分别为5.787、1.614，P均<0.05)；②Elf5的表达与FIGO分期、病理分级、病理类型、淋巴结转移和肌层浸润深度有关(P均<0.05)；③Kaplan-Meier生存分析显示，Elf5阴性表达患者的平均生存时间短于阳性表达患者(P<0.05)；④Cox回归分析显示FIGO分期、病理分级、肌层浸润深度、淋巴结转移及Elf5与子宫内膜癌患者预后有关(P均<0.05)，其中 Elf5是子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中 Elf5表达降低，其水平降低与子宫内膜癌发生发展及预后相关。

子宫内膜癌；抑癌基因；Elf5基因

子宫内膜癌是最常见的妇科恶性肿瘤[1]。流行病学调查显示有1.6%的子宫内膜癌患者年龄在20～34岁，6.1%在35～44岁[1]。虽然早期子宫内膜癌接受手术治疗和辅助治疗后有较好的预后,但由于缺乏有效的早期诊断方法,许多患者发现时已错过了最佳治疗时机。多种因素影响着子宫内膜癌的治疗效果,如临床因素(手术-病理分期、肌层浸润深度、辅助治疗等)以及生物因素(类固醇受体、生长因子、癌基因、抑癌基因等)[2]。近年来筛查子宫内膜癌的生物学指标及基因治疗逐渐成为研究热点。Elf5又称ESE2，属于能调节细胞增殖、分化凋亡的Ets转录因子家族，具有上皮特异性，在胎盘、肺支气管、乳腺中起到重要调节作用[3～5]。Chakrabarti等[6]研究表明，在正常乳腺中，Elf5有潜在的抑癌基因作用。本课题组的前期研究发现,卵巢上皮癌组织中Elf5 mRNA表达降低，其缺失影响卵巢上皮性癌的发生发展[7～9]。然而在与乳腺癌、卵巢癌相类似都存在一定程度激素依赖性的子宫内膜癌中Elf5的作用却未得到充分揭示，本研究旨在探讨Elf5在子宫内膜癌中的表达及临床意义，为子宫内膜癌的诊断治疗及评估预后提供新的靶点和思路。

1 资料与方法

1.1 临床资料 标本均来自2010年1月～2014年12月徐州医科大学附属医院妇科行手术治疗的患者在病理科存档的组织蜡块。本研究通过医院伦理委员会批准，均取得患者知情同意。标本中子宫内膜癌组织84例份(内膜癌组),患者年龄38～70岁、平均54.61岁。其中手术-病理分期(FIGO，2009)：Ⅰ期 54例，Ⅱ期10例，Ⅲ+Ⅳ期20例；肌层浸润深度：≤1/2 52例, >1/2 32例；淋巴结转移：有 41例，无 26例(共67例行淋巴清扫术)；病理类型：子宫内膜样腺癌 68例；非子宫内膜样腺癌16例；子宫内膜腺癌病理分级：G1级50例，G2级8例，G3级10例；月经：有 15例，无 69例。纳入标准：子宫内膜癌患者临床、病理资料完整，均进行术后随访，主要包括门诊、电话随访。患者接受手术的日期为随访起点，2017年6月31日为随访截止日期。排除标准：除外合并其他系统恶性肿瘤、来自于生殖系统其他器官肿瘤的转移癌(包括原发性双癌)及首次治疗为化疗、放疗或内分泌治疗。选取同期存档的因功血行手术治疗且经病理证实为不典型增生的子宫内膜组织蜡块标本30例份(不典型增生组)，患者年龄40～74岁、平均45.93岁。选取同期存档的因子宫肌瘤行手术治疗后经病理证实为正常子宫内膜组织的蜡块标本30例份(正常组)，患者年龄37～51岁、平均49.73岁。

1.2 组织中Elf5蛋白表达的检测 按照试验分组，所有标本经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片。烤片后浸入二甲苯、梯度乙醇脱蜡至水。3% H2O2室温孵育10 min，柠檬酸高压抗原修复。滴加Elf5抗体，4 ℃孵育过夜，加入超敏兔两分法检测试剂盒，37 ℃孵育30 min， DAB显色。复染、常规脱水、透明，中性树胶封片，显微镜下观察染色结果。Elf5抗体(bs-14564R )购自北京博奥森生物技术有限公司，超敏兔两分法检测试剂盒(PV-9001)及DAB试剂盒(ZLI9018)购自北京中衫金桥公司。 由2名经验丰富的副高职称医师分别阅片。采用半定量法，随机选取10个高倍视野，每个高倍视野观察100个细胞，按每个高倍视野阳性细胞数的百分比计数：阳性细胞<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。胞核按着色强弱计分:无着色0分，淡黄色1分,黄色2分，棕黄色3分。两种计分方法的乘积作为总评分：0分计为阴性，1～4分计为弱阳性(+)，5～8分计为中等强度阳性(++)，9分以上计为强阳性(+++)。+～+++均计为阳性。总阳性率=(弱阳性+中度强度阳性+强阳性例数)/总例数。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。Elf5在不同子宫内膜组织中的表达及其与临床病理参数间的关系采用χ2检验或Fisher′s确切概率法；应用Kaplan-Meier进行生存分析；应用Log-rank检验生存率组间差异性；应用Cox比例风险回归模型分析进行单因素、多因素分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同子宫内膜组织中Elf5的表达比较 Elf5主要在细胞核中表达，在细胞质也有少量表达，呈棕黄色颗粒。在正常组、不典型增生组、内膜癌组中，Elf5阳性表达率分别为93.33%(28/30)、 83.33%(25/30)、 69.05%(58/84)。内膜癌组Elf5阳性表达率低于正常组及不典型增生组(χ2分别为5.787、1.614，P均<0.05)。

2.2 子宫内膜癌组织中Elf5表达与患者临床病理参数的关系 Elf5表达与FIGO分期、病理分级、淋巴结转移、肌层浸润、病理类型有关(χ2分别为47.757、25.831、25.831、51.414、11.118，P均<0.05)。见表1。

2.3 Elf5表达与子宫内膜癌患者预后的关系 84例子宫内膜癌患者术后进行长期随访，随访时间6～67个月，失访18例，死亡11例，随访率78.57%。Elf5阴性表达患者平均生存期 66.766个月，Elf5阳性表达患者平均生存期42.842个月。Elf5阳性表达患者总生存期长(χ2=8.508，P=0.004)，见图1。

表1 子宫内膜癌组织中Elf5表达与临床病理参数的关系

注：*84例子宫内膜癌患者中共67例行淋巴结活检或清扫术;*68例子宫内膜腺癌患者行病理分级。

图1 Elf5阳性和阴性子宫内膜癌患者生存曲线

2.4 子宫内膜癌患者预后相关因素 Cox单因素分析显示：年龄(χ2=0.190，P=0.663)、病理类型(χ2=0.870，P=0.351)、月经有无(χ2=0.001，P=0.975)与预后无关，而FIGO分期(χ2=6.619，P=0.010)、肌层浸润深度(χ2=4.337，P=0.037)、淋巴结转移(χ2=4.788，P=0.029)、病理分级(χ2=4.225，P=0.040)、Elf5(χ2=6.706，P=0.010)与预后相关。Cox多因素分析显示：将FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、病理分级及Elf5纳入Cox模型进行多因素分析，最终筛选结果显示Elf5是影响子宫内膜癌患者预后的独立因素(χ2=4.424，P=0.035，HR=0.226，95%CI：0.056～0.904)。

3 讨论

Elf5是Ets转录家族成员之一，Ets家族在细胞的发育、分化、增殖及凋亡等活动中起到非常重要的调节作用。Elf5位于人11号染色体短臂13～15区，具有上皮特异性，在胎盘、肺支气管、乳腺、肾等器官中均有表达[3]。Lee等[3]在人类乳腺癌组织和细胞系中观察到Elf5表达缺失。Yan等[7]研究表明，Elf5 mRNA在卵巢上皮性癌及交界性卵巢上皮性肿瘤中的表达均明显低于良性卵巢上皮性肿瘤及正常卵巢组织,从而推测其可能为一个潜在的抑癌基因。本研究发现，子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织中Elf5阳性表达率的差异有统计学意义。提示Elf5表达减少或缺失有可能促进了子宫内膜癌的发生,子宫内膜癌中Elf5可能发挥抑癌作用。

本实验发现，子宫内膜癌组织Elf5阳性表达率随着FIGO分期、病理分级、肌层浸润深度增加以及淋巴结转移进展呈下降趋势，而与年龄、是否绝经无关。由此表明Elf5表达的变化可能与肿瘤发展相关。Colas等[10]研究表明，子宫内膜癌发生肌层浸润的前提是上皮性肿瘤细胞经历不同程度的上皮间质转化(EMT)。EMT能通过改变上皮细胞向间充质/干细胞转化的状态从而影响细胞黏附、细胞极性和细胞迁移。Zhou等[11]的研究表明，在肿瘤细胞中EMT及其逆向程序被激活，使肿瘤细胞能够获得更高级别的侵袭性以及复发有关的细胞特征。本课题组前期研究发现，Elf5可能通过抑制MMP-2和MMP-9的表达来抑制卵巢癌细胞生长、侵袭及转移[8]。Elf5在子宫内膜癌中可能具有相同的作用，但具体机制仍需要进一步研究。

Elf5表达与激素有密切关系。在乳腺中催乳素和孕酮能够促进Elf5表达，在怀孕期间促进胚前体细胞发育成雌激素受体α和孕激素受体，从而减少乳汁分泌。Ⅰ型内膜癌即雌激素依赖型内膜癌，均为子宫内膜样腺癌，其发生与无孕激素对抗的条件下雌激素长期作用有关。多数研究报告显示雌激素受体α从正常子宫内膜组织到G1～G3级表达逐渐减少，雌激素受体β(ERβ)在绝经后子宫内膜和G3级的内膜癌的胞质中显著表达，ERβ可能参与雌激素的非基因组效应。本研究结果显示，在子宫内膜样腺癌中Elf5阳性表达率高于其他病理类型(如浆液性癌、鳞状细胞癌等)。

子宫内膜癌患者预后相关的影响因素较多，无一致结论。张英兰等[12]采用单因素生存分析显示，年龄、绝经、阴道出血、病理类型、组织学分级、手术病理分期、肌层浸润程度、淋巴结转移、腹腔细胞学阳性及术后辅助治疗对子宫内膜癌的预后有影响。本研究结果显示,手术病理分期、病理分级、肌层浸润深度、淋巴结转移、Elf5是子宫内膜癌预后的影响因素，Elf5为影响子宫内膜癌的独立因素。提示Elf5可能可作为一种理想的判断子宫内膜癌预后的生物学指标。

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闫洪超(E-mail:1015058194@qq.com)

2017-09-19)