原发性干燥综合征相关间质性肺疾病患者血清活性氧、转录因子κB及转化生长因子β1水平变化及其临床意义研究

白淑荣，沈 乐，陈 乾，杨 静，耑 冰，王 艳，李 萍，杨 朝，郭东更，杨青兰

原发性干燥综合征相关间质性肺疾病患者血清活性氧、转录因子κB及转化生长因子β1水平变化及其临床意义研究

白淑荣1，沈 乐1，陈 乾1，杨 静1，耑 冰1，王 艳1，李 萍1，杨 朝1，郭东更2，杨青兰1

目的观察原发性干燥综合征相关间质性肺疾病(pSS-ILD)患者血清活性氧(ROS)、转录因子κB(NF-κB)及转化生长因子β1(TGF-β1)水平变化，并探讨其临床意义。方法选取2015年7月—2017年6月宁夏回族自治区人民医院呼吸科和风湿科收治的女性原发性干燥综合征(pSS)患者94例，其中单纯pSS患者46例作为pSS组，pSS-ILD患者48例作为pSS-ILD组；另选取同期体检健康女性50例作为对照组。采用免疫印迹法检测抗干燥综合征A(SSA)抗体、抗干燥综合征B(SSB)抗体、抗Robert52(Ro52)抗体，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平；血清NF-κB水平与pSS-ILD患者血清ROS及TGF-β1水平的相关性分析采用Pearson相关性分析。结果pSS组和pSS-ILD组患者抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体阳性率高于对照组(P<0.05)；pSS组和pSS-ILD组患者抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。pSS组和pSS-ILD组患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于对照组，pSS-ILD组患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于pSS组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示，血清NF-κB水平与pSS-ILD患者血清ROS(r=0.95)及TGF-β1(r=0.98)水平呈正相关(P<0.05)。结论pSS-ILD患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平明显升高，且血清NF-κB水平与血清ROS、TGF-β1水平有关，推测ROS-NF-κB-TGF-β1信号通路可能与pSS-ILD的发生有关。

干燥综合征；肺疾病，间质性；活性氧；转录因子κB；转化生长因子β1

原发性干燥综合征(primary Sjogren′s syndrome，pSS)是一种主要累及泪腺、唾液腺等外分泌腺体的常见慢性自身免疫系统疾病[1]，可单独发病，也可累及肺脏，表现为间质性肺疾病(interstitial lung disease，ILD)。近年来，原发性干燥综合征相关间质性肺疾病(primary Sjogren′s syndrome associated interstitial lung disease，pSS-ILD)发病率不断升高，目前其发病机制尚未完全明确，但肺纤维化是其致残率和病死率升高的主要原因之一[2-3]。活性氧(reactive oxygen species，ROS)是机体重要的信号转导分子，转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1，TGF-β1)是一种致纤维化效应因子，二者均在肺纤维化形成过程中发挥着重要作用。转录因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)是一种重要的转录因子，其可通过激活细胞因子级联反应而生成促炎递质，进而介导炎性反应。既往研究结果显示，ROS、NF-κB、TGF-β1均参与肺纤维化形成过程[4-5]，但其与pSS-ILD是否有关目前尚未明确。本研究旨在观察pSS-ILD患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平变化，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年7月—2017年6月宁夏回族自治区人民医院呼吸科和风湿科收治的女性pSS患者94例，均符合pSS诊断标准[6]，其中单纯pSS患者46例(pSS组)、pSS-ILD患者48例(pSS-ILD组)，ILD的诊断参照2002年美国胸科学会/欧洲呼吸学会(ATS/ERS)制定的ILD诊断标准[7]。排除标准：(1)有肺结核病史者；(2)合并慢性支气管炎、肺气肿、支气管哮喘、支气管扩张、肺部肿瘤等呼吸系统疾病者；(3)合并慢性心、肝、肾功能不全者；(4)长期吸烟者。另选取同期体检健康女性50例作为对照组。3组受试者年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)；pSS组和pSS-ILD组患者病程比较，差异无统计学意义(P>0.05，见表1)，具有可比性。

1.2 免疫印迹法检测自身抗体谱 pSS患者于入院次日、健康体检者于体检当天清晨采集空腹静脉血3 ml，3 000 r/min离心15 min(离心半径为10 cm)，分离血清置于-80 ℃冰箱中保存待测；采用深圳恒佳生物工程有限公司生产的ENA多肽抗体谱试剂盒检测抗干燥综合征A(SSA)抗体、抗干燥综合征B(SSB)抗体及抗Robert52(Ro52)抗体，严格按照试剂盒说明书进行操作，检测结束后将显色条带与标准条带卡比照。

表1 3组受试者一般资料比较

注：pSS=原发性干燥综合征，pSS-ILD=原发性干燥综合征相关间质性肺疾病；a为F值；“-”表示无相关数据

1.3 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平 pSS患者于入院次日、健康体检者于体检当天采集肘静脉血5 ml，置于5 ml分离胶-促凝管中(操作过程中避免溶血)，室温静置30 min，3 000 r/min离心15 min(离心半径为10 cm)，留取上层血清置于1.5 ml EP管中，每个EP管分装血清200 μl，做好标记，采用ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司生产)检测血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平，并严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.4 统计学方法 应用SPSS 11.5统计软件进行数据处理，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用q检验；计数资料分析采用χ2检验；血清NF-κB水平与pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平的相关性分析采用Pearson相关性分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体阳性率 3组受试者抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体阳性率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。其中pSS组和pSS-ILD组患者抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体阳性率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；pSS组和pSS-ILD组患者抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05，见表2)。

2.2 血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平 3组受试者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平，差异有统计学意义(P<0.05)；其中pSS组和pSS-ILD组患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于对照组，pSS-ILD组患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于pSS组，差异有统计学意义(P<0.05，见表3)。

2.3 血清NF-κB水平与pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平的相关性分析 Pearson相关性分析结果显示，血清NF-κB水平与pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平呈正相关(r值分别为0.95、0.98，P<0.05，见图1～2)。

表2 3组受试者抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体阳性率比较〔n(%)〕

Table2 Comparison of positive rates of anti-SSA antibody，anti-SSB antibody and anti-Ro52 antibody among the three groups

组别例数抗SSA抗体阳性抗SSB抗体阳性抗Ro52抗体阳性对照组503(6 0)2(4 0)1(2 0)pSS组4644(95 7)a29(63 0)a32(69 5)apSS⁃ILD组4846(95 8)a30(62 5)a34(70 8)aχ2值114 9346 1761 06P值<0 05<0 05<0 05

注：SSA=干燥综合征A，SSB=干燥综合征B，Ro52=Robert52；与对照组比较，aP<0.05

Table3 Comparison of serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1among the three groups

组别例数ROSNF⁃κBTGF⁃β1对照组50447 01±68 3059 95±8 6862 21±11 90pSS组46712 31±92 11a310 10±29 81a196 34±23 80apSS⁃ILD组481073 10±75 80ab440 77±57 33ab248 83±24 59abF值773 001308 791054 36P值<0 05<0 05<0 05

注：ROS=活性氧，NF-κB=转录因子κB，TGF-β1=转化生长因子β1；与对照组比较，aP<0.05；与pSS组比较，bP<0.05

注：NF-κB=转录因子κB，ROS=活性氧

图1 血清NF-κB水平与pSS-ILD患者血清ROS水平关系的散点图

Figure1 Scatter plot for relationship between serum NF-κB level and serum ROS level in patients with pSS-ILD

注：TGF-β1=转化生长因子β1

图2 血清NF-κB水平与pSS-ILD患者血清TGF-β1水平关系的散点图

Figure2 Scatter plot for relationship between serum NF-κB level and serum TGF-β1level in patients with pSS-ILD

3 讨论

pSS是一种自身免疫系统疾病，好发于绝经期之后或30～40岁女性，其发病率为0.3%～0.4%。pSS的典型临床表现为口、眼干燥，并可累及肾脏、肺脏、神经系统及消化系统等，其中肺脏是最常累及的器官之一，临床表现为ILD。pSS-ILD患者早期呼吸道症状不明显，病情可进一步进展为肺纤维化，进而导致患者残疾或死亡。

NF-κB是一个重要的转录因子，其可调节细胞因子、酶类、细胞黏附分子表达。NF-κB普遍存在于多种组织的多种细胞质中，其受到氧自由基、内毒素及紫外线等刺激后可激活，进而诱导细胞因子、生长因子(如TGF-β1)产生。KWOK等[12]研究结果显示，pSS患者唇腺组织中NF-κB水平较高。既往有研究显示，博来霉素诱导的肺纤维化小鼠肺泡灌洗液中丙二醛、TGF-β1水平及P65水平升高，采用N-乙酰半胱氨酸治疗后小鼠肺泡灌洗液中丙二醛、TGF-β1及P65水平均明显降低，提示丙二醛可能通过激活NF-κB途径而调节TGF-β1释放，进而导致肺纤维化[13]。

TGF-β1是一种致纤维化效应因子，其在组织损伤早期及修复期均具有促肺纤维化作用[14]。在体和离体实验发现，TGF-β1具有较强的促纤维化作用[5]。COTTIN等[15]、BEDARD等[16]研究结果显示，采用环磷酰胺序贯治疗的pSS-ILD患者血清及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、TGF-β1、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平明显降低，提示TNF-α、TGF-β1及MMP-9水平升高可能与pSS-ILD发病有关。

本研究结果显示，pSS组、pSS-ILD组患者抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体阳性率高于对照组，但pSS组和pSS-ILD组患者抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体阳性率间无差异，提示抗SSA抗体、抗SSB抗体及抗Ro52抗体与ILD的发生及发展无关。本研究结果还显示，pSS组和pSS-ILD组患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于对照组，pSS-ILD组患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于pSS组，且血清NF-κB水平与pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平呈正相关，提示血清ROS、NF-κB、TGF-β1水平可能参与pSS-ILD的发生。

综上所述，pSS-ILD患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平明显升高，且血清NF-κB水平与血清ROS、TGF-β1水平有关，推测ROS-NF-κB-TGF-β1信号通路可能与pSS-ILD的发生有关，但其具体机制尚需进一步研究证实。

作者贡献：白淑荣进行文章的构思与设计，研究的实施与可行性分析，撰写论文，对文章整体负责，监督管理；沈乐、杨静、耑冰、王艳、李萍、郭东更、杨青兰进行数据收集、整理、分析；陈乾进行结果分析与解释；杨朝负责文章的质量控制及审校。

本文无利益冲突。

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ChangesandClinicalSignificanceofSerumLevelsROS，NF-κBandTGF-β1inPatientswithPrimarySjogren′sSyndromeAssociatedInterstitialLungDisease

BAIShu-rong1，SHENYue1，CHENQian1，YANGJing1，ZHUANBing1，WANGYan1，LIPing1，YANGZhao1，GUODong-geng2，YANGQing-lan1

1.DepartmentofRespiratoryMedicine，thePeople′sHospitalofNingxiaHuiAutonomousRegion，Yinchuan750001，China2.DepartmentofRheumatology，thePeople′sHospitalofNingxiaHuiAutonomousRegion，Yinchuan750001，China

BAIShu-rong,E-mail：jzuxueer@163.com

ObjectiveTo observe the changes of serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1in patients with primary Sjogren′s syndrome associated interstitial lung disease(pSS-ILD)，to explore the clinical significance.MethodsFrom July 2015 to June 2017，a total of 94 female patients with primary Sjogren′s syndrome(pSS)were selected in the Departments of Respiratory Medicine and Rheumatology，the People′s Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region，thereinto 46 patients with isolated pSS were served as A group，the other 48 patients with pSS-ILD were served as B group；meanwhile a total of 50 healthy women were selected as control group.Western blotting method was used to detect anti-SSA anti-body，anti-SSB antibody and anti-Ro52 antibody，enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1；Pearson correlation analysis was used to analyze the correlations of serum NF-κB level with serum levels of ROS and TGF-β1in patients with pSS-ILD.ResultsPositive rates of anti-SSA antibody，anti-SSB antibody and anti-Ro52 antibody in A group and B group were statistically significantly higher than those in control group(P<0.05)，while no statistically significant differences of positive rate of anti-SSA antibody，anti-SSB antibody or anti-Ro52 antibody was found between A group and B group(P>0.05).Serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1in A group and B group were statistically significantly higher than those in control group，meanwhile serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1in B group were statistically significantly higher than those in A group(P<0.05).Pearson correlation analysis results showed that，serum NF-κB level was positively correlated with serum level of ROS(r=0.95)，of TGF-β1(r=0.98)in patients with pSS-ILD，respectively(P<0.05).ConclusionSerum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1are significantly elevated in patients with pSS-ILD，and serum NF-κB level is correlated with serum level of ROS，of TGF-β1，respectively，it is presumed that ROS-NF-κB-TGF-β1signal pathway may correlated with the occurrence of pSS-ILD..

Sjogren′s syndrome；Lung diseases，interstitial；Reactive oxygen species；Nuclear factor-κB；Transforming growth factor beta 1

宁夏自然科学基金资助项目(NZ15184)

1.750001 宁夏银川市，宁夏回族自治区人民医院呼吸内科

2.750001 宁夏银川市，宁夏回族自治区人民医院风湿科

白淑荣，E-mail：jzuxueer@163.com

R 593.22 R 563.13

A

10.3969/j.issn.1008-5971.2017.11.011

白淑荣，沈乐，陈乾，等.原发性干燥综合征相关间质性肺疾病患者血清活性氧、转录因子κB及转化生长因子β1水平变化及其临床意义研究[J].实用心脑肺血管病杂志，2017，25(11)：42-45.[www.syxnf.net]

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2017-09-23；

2017-11-16)

谢武英)