地黄饮子对急性脑中风大鼠脑组织SDF1和BDNF表达的影响

孙伟楠

（中国医科大学基础医学院，沈阳 110122）

地黄饮子对急性脑中风大鼠脑组织SDF1和BDNF表达的影响

孙伟楠

（中国医科大学基础医学院，沈阳 110122）

目的 探讨地黄饮子对急性脑中风大鼠脑组织脑源性神经营养因子（BDNF）和基质细胞衍生因子1（SDF1）表达的影响。方法 选取大鼠60只，随机分为正常组、治疗组和缺血组，各20只。麻醉后钳夹颈总动脉40 min，建立急性脑中风模型。治疗组：灌服地黄饮子汤36 g/kg，缺血组：灌服盐水1次，正常组：正常饮食。3周后，测量大鼠脑梗死面积，测定三组海马CA1区BDNF和SDF1蛋白表达情况。结果 正常组脑梗死面积为0。治疗组脑梗死面积明显低于缺血组，P＜0.05，差异有统计学意义。正常组海马CA1区BDNF和SDF1蛋白含量均明显高于治疗组和缺血组，P＜0.05，差异有统计学意义。治疗组BDNF和SDF1蛋白含量明显高于缺血组，P＜0.05，差异有统计学意义。结论 地黄饮子通过提高BDNF和SDF1蛋白水平，增加内源性保护机制和神经干细胞增殖、迁移，保护神经元的功能。

地黄饮子；急性脑中风；BDNF；SDF1

急性脑中风是临床上致残率和死亡率较高的疾病，由于脑缺血造成大脑神经受损，缺血区神经功能缺失。缺血性脑血管病发病率极高，内源性神经再生促进脑卒后神经功能恢复，弥补缺失的神经功能。有报道[1]地黄饮子能促进脑神经功能恢复，治疗缺血性脑血管病、中风及后遗症、血管性痴呆等疗效较好。本研究通过地黄饮子调节海马CA1区脑组织脑源性神经营养因子（BDNF）和基质细胞衍生因子1（SDF1）蛋白表达，探讨地黄饮子修复神经功能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物分组 健康清洁级Wistar大鼠60只，体重250～280 g，由中国医科大学动物部提供。随机分为正常组、治疗组和缺血组，各20只。

1.2 动物模型的制备 用10%水合氯醛麻醉、固定，切开颈部正中，分离出双侧颈总动脉，动脉夹钳夹40 min，同时纱布覆盖创面，松开动脉夹40 min后，再次用动脉夹钳夹40 min，急性脑中风状态，模型成功。

1.3 治疗方法 参照《素问·宣明论方》：熟地黄12 g，巴戟天15 g，炮附子15 g，麦门冬15 g，肉苁蓉15 g，石斛15 g，菖蒲12 g，五味子10 g，白茯苓12 g，山茱萸15 g，官桂10 g，远志10g。煎煮2次，混合药液，蒸发浓缩，干燥密封备用。造模后，治疗组：每日灌服地黄饮子汤36 g/kg。缺血组：每日灌服盐水1次。正常组：正常饮食，治疗3周。

1.4 检测指标及方法 （1）测量大鼠脑梗死面积。3周后断头取脑，大脑冠状切片，加入1%2，3，5-三苯基四氮唑的磷酸缓冲液，电镜图像分析，计算脑梗死面积，脑梗死=(白色的梗死面积/片子的总面积)×100%。

（2）免疫组化法检测海马CA1区BDNF蛋白。固定、石蜡包埋、切片、水化，灭活、抗原修复，滴加兔抗人BDNF多克隆抗体（北京博奥森生物有限科技公司，浓度1:300）和鼠抗BrdU单克隆抗体（北京博奥森生物有限科技公司，浓度1:50），湿化、显色、脱水封片。日本Olympus图像分析仪，计数BDNF和BrdU的阳性细胞数量，图像分析平均积分光密度（IOD）。取10 mg缺血脑组织，用ELISA试剂盒测定每1 mg蛋白中SDF1的含量。

1.5 统计学方法 用SPSS 17.0分析，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑梗死面积 正常组脑梗死面积为0。治疗组脑梗死面积明显低于缺血组，P＜0.05，差异有统计学意义，见表1。

表1 3组脑梗死面积比较

2.2 海马CA1区BDNF、SDF1蛋白含量 正常组BDNF、SDF1蛋白含量明显高于治疗组和缺血组，P＜0.05，差异有统计学意义。治疗组BDNF、SDF1蛋白含量明显高于缺血组，P＜0.05，差异有统计学意义，见表2。

表2 3组海马CA1区BDNF、SDF1蛋白含量比较 （±s）

表2 3组海马CA1区BDNF、SDF1蛋白含量比较 （±s）

注：与正常组比较，a P＜0.05；与缺血组比较，b P＜0.05

组别 例数 BDNF SDF1治疗组缺血组正常组20 20 20 83.32±11.46ab 61.25±12.31a 100.67±10.36 2.48±0.83ab 0.78±0.96a 3.23±0.87

3 讨论

BDNF在脑内广泛分布，尤其集中在大脑海马CA1区和大脑皮层，包含神经系统发育、促进神经细胞增殖、分化、生长等功能，BDNF与脑源性神营养因子受体 (TrkA等)结合，激活TrkA信号传导，保护神经元，促进神经细胞存活，同时，BDNF还具有抗凋亡，促进细胞增殖，形成新生血管等作用，缓解由缺血引起的神经元损伤[2]。本研究结果显示，急性脑中风导致海马CA1区BDNF蛋白表达明显减少，这与范文涛[3]的研究结果一致。地黄饮子治疗组BDNF蛋白表达高于缺血组，证实了地黄饮子通过增加BDNF蛋白表达，增强对内源性保护机制，保护神经功能。

SDF1具有调节神经功能和增强神经信息传递的功能，当脑组织缺血损伤时，内源性神经干细胞诱导SDF1迁移和分化，修复缺血的神经损伤。由于脑缺血区的炎症因子和SDF1同时刺激，海马区神经干细胞增殖、迁移，在损伤区分化为神经元，修复神经损伤。有研究[4]与本研究结果相同，地黄饮子可以增加脑缺血区SDF1蛋白表达水平，进一步增加神经干细胞迁移、增殖。缺血组SDF1蛋白表达水平明显低于正常组，地黄饮子治疗组SDF1蛋白表达水平明显高于缺血组，提示地黄饮子将进一步修复神经功能。

“毒损脑络”是中医对中风理论的新学说，认为由于毒邪损伤了脑络导致中风发作，络脉破损或拘挛瘀闭，由气血渗灌失常导致，中药地黄饮子具有驱毒化瘀功效，在治疗脑缺血中效果显著。综上所述，地黄饮子通过增加BDNF和SDF1蛋白表达，激活神经干细胞迁移、增殖，促使内源性神经细胞再生，减少神经元受损，有效地保护神经元的功能，为临床促使内源性神经细胞再生和神经干细胞增殖、迁移提供新的理论依据。

[1]邹伟，于婷婷，王冬，等.头针透穴法对脑出血大鼠脑组织中β-cate-nin表达影响的实验研究[J].中医药信息，2014，31(1):76-79．

[2]谢宁，刘艳丽，宋琳，等.地黄饮子的实验研究进展[J].中华中医药学刊，2015，33(12)：2823-2325.

[3]范文涛，王倩.地黄饮子对急性脑缺血大鼠神经干细胞迁移的影响[J].中医学报，2013，28（12）：1834-1835.

[4]王倩、范文涛，贺又舜.地黄饮子含药血清对胎鼠海马神经干细胞迁移的影响[J].中医药学报，2015，43(1):8-10.

The Effect of Dihuang Drink on the Expression of SDF1 and BDNF in Rats with Acute Cerebral Apoplexy

SUN Weinan
(Basic Medical College,China Medical University,Liaoning province,Shenyang 110122,China)

Objective To explore the effect of Dihuang drink on the expression of BDNF and SDF1 in rats with acute cerebral apoplexy.Methods 60 rats were randomly divided into two groups:normal group,treatment group and ischemic group.After anesthesia,the carotid artery was 40min and the model of acute cerebral apoplexy was established.Treatment group:potion of decoction of Dihuang drink (36g/kg),ischemia group:1 time,normal group:normal diet.Three weeks later,the area of cerebral infarction was measured,and the expression of BDNF and SDF1 protein in three groups of hippocampal CA1 regions were measured.Results The normal area of cerebral infarction were 0.The area of cerebral infarction in the treatment group was significantly lower than the ischemic group P＜0.05,and the difference was statistically significant.The contents of BDNF and SDF1 protein in the normal group of hippocampus CA1 region were significantly higher than those in the treatment group and the ischemic group,P＜0.05 was statistically significant.The content of BDNF and SDF1 protein in the treatment group was significantly higher than that in the ischemic group P＜0.05,and the difference was statistically significant.Conclusion In order to protect the function of neuronal cells,it increases the level of BDNF and SDF1 protein and increases the proliferation and migration of endogenous protective mechanisms and neural stem cells.

Dihuang drink;acute cerebral apoplexy;BDNF;SDF1

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.24.066

1672-2779（2017）-24-0148-02

李海燕 本文校对：施 蓓

2017-10-13）