CART阻抑对阿尔茨海默病大鼠记忆能力的影响

刘 伟 常 娜 潘昊君 李 昕

1)河南大学淮河医院神经内科，河南 开封 475000 2)郑州大学第二附属医院神经内科，河南 郑州 450014

·论著科研之窗·

CART阻抑对阿尔茨海默病大鼠记忆能力的影响

刘 伟1)常 娜1)潘昊君1)李 昕2)△

1)河南大学淮河医院神经内科，河南 开封 475000 2)郑州大学第二附属医院神经内科，河南 郑州 450014

1 材料与方法

1．1材料

1．1．1 实验动物：100只Wistar大鼠由河南大学实验动物中心提供，体质量260～300 g。

1．2方法

1．2．2 大鼠记忆能力检测：大鼠记忆能力检测用Morris水迷宫方法检测，水迷宫为高60 cm，直径150 cm的圆形水池。将水迷宫划分为4个象限，每个象限正上方有摄像机。实验开始时，在第三象限放入一个白色的塑料泡沫为平台，分别从4个象限的入水点把大鼠面向池壁的方向放在水池中，保持泳池中的水位在平台上1 cm，水温维持在22 ℃。记录大鼠找到平台的时间为逃避潜伏期(超过60 s记为60 s)，实验持续4 d，每天检测4次，每次间隔时间为20 min，逃避潜伏期为最后平均值。5 d后撤掉平台，将大鼠在第1象限正中点面朝池壁的方向放入水中，观察并记录大鼠在60 s内穿过平台的次数。所有大鼠在实验开始前1 d分别进行2 min的适应性训练。

1．2．4 RT-PCR检测IDE、LRP-1、NEP水平：取100 mg的大鼠脑皮层组织，加入1 mL的Trizol溶液，混合后，放在室温下裂解反应5 min，加入氯仿(Trizol与氯仿比例为5：1)，剧烈震荡15 s，放在室温条件下静置3 min，4 ℃，14 000 r/min离心10 min，吸取上清液至EP管中，加入500 μL的异丙醇，上下颠倒20次，静置10 min，4 ℃，14 000 rpm离心10 min，弃上清液，用乙醇洗涤2次，晾干后，用DEPC水溶解，保存在-80 ℃备用。反转录试剂盒反转录合成cDNA，RT-PCR试剂盒检测目的基因的表达水平。

IDE上游引物：5’-CAAACACTGTTTATGGACTG-3’下游引物：5’-TGCTGAATTGAATGTGTACC-3’；LRP-1上游引物：5’-TCTTGGTGCCTTTTGTGTGAC-3’下游引物：5’-CTCTTCCTCGTTTTTGCTCTC-3’；GAPDH上游引物：5’-GCCAAGGCTGTGGGCAAGGT-3’下游引物：5’-TCTCCAGGCGGCACGTCAGA-3’；NEP上游引物：5’-AAAGCTAAAGAAGAAAACAG-3’下游引物：5’-CAGTGCCAACAAACAAAT-3’。

2 结果

2．1大鼠记忆能力检测结果构建的AD大鼠模型，经CART连续处理16 d后，水迷宫实验检测大鼠记忆能力。结果发现，4 d训练后，模型组大鼠逃避潜伏期明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.01)。假手术组大鼠逃避潜伏期与对照组大鼠相比差异无统计学意义(P>0.05)。实验组大鼠逃避潜伏期明显低于模型组，差异具有统计学意义(P<0.01)。如图1A。第5天去除平台后，模型组大鼠穿越平台次数明显低于对照组，差异具有统计学意义(P<0.01)。实验组大鼠穿越平台次数明显高于模型组，差异具有统计学意义(P<0.01)。假手术组大鼠穿越平台次数与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。见图1B。

注：A：逃避潜伏期；B：目标象限停留时间；C：穿越平台次数；1：对照组；2：假手术组；3：模型组；4：实验组；aP>0.05 vs 1；bP<0.01 vs 1；cP<0.01 vs 3图1 CART对AD大鼠记忆能力的影响

注：1：对照组；2：假手术组；3：模型组；4：实验组；aP>0.05 vs 1；bP<0.01 vs 1；cP<0.01 vs 3图2 CART对AD大鼠脑组织中A1-40水平的影响

注：A：mRNA相对表达水平；B：免疫印迹图；C：蛋白相对表达量；1：对照组；2：假手术组；3：模型组；4：实验组；aP>0.05 vs 1；bP<0.01 vs 1；cP<0.01 vs 3图3 CART对AD大鼠脑组织中IDE、NEP、LRP-1表达水平的影响

2．4 Tau蛋白磷酸化水平检测结果Tau 5是磷酸化和非磷酸化的Tau 蛋白抗体，检测Tau 5水平能够反映组织中Tau蛋白的总体水平。模型组大鼠中Tau 5水平及Tau 磷酸化水平(Tau pSp199/202、TaupT231)明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.01)。实验组大鼠中Tau 5水平及Tau 磷酸化水平(Tau pSp199/202、TaupT231)明显低于模型组，差异具有统计学意义(P<0.01)。假手术组大鼠中Tau 5水平及Tau 磷酸化水平(Tau pSp199/202、TaupT231)与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。见图4。

注：A：免疫印迹图；B：蛋白相对表达量；1：对照组；2：假手术组；3：模型组；4：实验组；aP>0.05 vs 1；bP<0.01 vs 1；cP<0.01 vs 3图4 CART对AD大鼠脑组织中Tau蛋白磷酸化水平影响结果

A：免疫印迹图；B：蛋白相对表达量；1：对照组；2：假手术组；3：模型组；4：实验组；aP>0.05 vs 1；bP<0.01 vs 1；cP<0.01 vs 3图5 CART对AD大鼠脑组织中GSK-3水平的影响

3 讨论

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EffectofCARTinhibitionofmemoryabilityofAlzheimer'sdiseaserats

LIUWei*，CHANGNa，PANHaojun，LIXin

*DepartmentofNeurology，HuaiheHospitalAffiliatedtoHenanUniversity，Kaifeng475000，China

10.3969/j.issn.1673-5110.2017.24.001

2014年河南省医学科技攻关计划重点项目，编号：201402018

△通信作者：李昕(1975-)，研究生，副主任医师。研究方向：脑血管病、神经变性病。Email：lzh999@126.com

R-332

A

1673-5110(2017)24-0001-06

(收稿2017-08-11)

王喜梅

信息：刘伟，常娜，潘昊君，等．CART阻抑对阿尔茨海默病大鼠记忆能力的影响[J]．中国实用神经疾病杂志，2017，20(24)：1-6．