海口市泌尿生殖道感染患者生殖支原体的检测

肖敬川 王顺兰 曹 卉

·论著·

海口市泌尿生殖道感染患者生殖支原体的检测

肖敬川 王顺兰 曹 卉

目的检测海口地区泌尿生殖道感染患者生殖支原体(Mg)的感染率并分析危险因素。方法实时荧光核酸恒温扩增技术检测618例(男255例,女363例)泌尿生殖道感染患者分泌物棉拭子(178份)和尿液标本(440份)。结果618例患者Mg总阳性率为3.23%，尿液和拭子标本阳性率分别为3.64%和2.25%，无显著性差异(P>0.05)；男性患者阳性率为2.35%，女性为3.86%，无显著性差异(P>0.05)；不同年龄组之间阳性率也没有显著性差异(P>0.05)。结论尿液和拭子标本的选择、性别和年龄不是Mg阳性率的关键影响因素。

生殖支原体； 实时荧光核酸恒温扩增技术

生殖支原体(Mycoplasmagenitalium, Mg)由Tully等于1981年从男性非淋菌性尿道炎患者的尿道分泌物中分离出来，迄今为止发现的能够自我复制的最小原核细胞型微生物[1]。Mg分类学上属于柔膜纲支原体目，主要特点是缺乏细胞壁，能独立复制，寄生于人和其他灵长类动物的泌尿生殖道、呼吸道和关节腔滑液中[2]。研究表明，生殖支原体是男性非淋菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis, NGU)的病原体之一，在男性NGU患者中的感染率可达21.9%～45%[3]。在女性中，Mg可能是黏液脓性宫颈炎(Mucopurulent cervicitis, MPC)的重要病原体，在盆腔炎和输卵管性不孕患者中的感染率达13%～17%[4]。可见，Mg是继淋球菌和沙眼衣原体之后引起泌尿生殖道感染的重要病原体，为了研究门诊患者Mg的感染情况，进一步提高对Mg的认识和重视，我们对就诊于海口市人民医院妇科和泌尿外科门诊的泌尿生殖道感染的患者进行了实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing, SAT)检测。

目前对于Mg的检测主要有分离培养法，血清学方法和实时荧光定量PCR法等，分离培养法耗时长，阳性率低，血清学方法有交叉反应，特异性差，此两者缺点明显，已趋于淘汰。实时荧光定量PCR法快速、敏感性和特异性好，临床应用广泛[5]。SAT技术是将核酸恒温扩增和实时荧光检测结合的核酸检测技术，该技术具有敏感性、特异性高和反应稳定等优点[6]，在生殖道、呼吸道病原体及肠道病毒检测的应用非常广泛。

1 资料与方法

1.1 研究对象 海口市人民医院2015年8月至2016年5月妇科门诊和泌尿外科门诊泌尿生殖道感染患者618例，其中男255例，女363例，年龄15～84岁，平均(36.07±11.09)岁。所有患者均表现出一种或多种泌尿道感染症状，如尿频、尿急、尿道刺痛、分泌物增多、排尿困难、灼热感等。

1.2 仪器与试剂 瑞士Roche公司LightCycler 480II实时荧光定量PCR仪，Mg-RNA试剂(批号：20150301,20150718,20151001,20160301)来自上海仁度生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 样本采集 尿液样本：取清晨首次尿或者长时间(至少1个小时)不排尿的首段尿500 μL，与500 μL尿液保存液(仁度试剂盒提供)混合。拭子标本：采用医用棉拭子伸入男性尿道口、女性宫颈口或阴道约1～2 cm，旋转1周，停留10 s后取出，将棉拭子头放入1 mL生理盐水浸泡贴壁挤干，取500 μL加入500 μL尿液保存液混合，即刻送检，即为待测样本。

1.3.2 样本检测 按照试剂盒说明，设置阴性、阳性和内标对照，在仁度生物MgX全自动核酸提取仪上完成核酸提取步骤，获得30 μL核酸提取液，然后60℃ 10 min，42℃ 5 min后加入10 μL 42℃预热的SAT酶液配制成40 μL PCR反应体系，在LightCycler 480II实时荧光定量PCR仪设定程序反应条件：42℃ 1 min，40个循环，荧光素通道设定为F1(FAM)和F2(HEX)，荧光信号采集每分钟进行一次，启动反应程序。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。阳性率的比较分别采用四格表资料和行×列表资料的χ2检验，曲线拟合采用双变量回归分析，模型依次选择直线、对数和指数选项，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同类型标本Mg阳性率的对比分析 在618例患者采集标本中，尿液标本440例，占总数比例近2/3，分泌物拭子标本178例，占总数比例近1/3，卡方检验的结果是与尿液标本相比，分泌物拭子标本阳性率没有显著性差异(χ2=0.781，P=0.271)。见表1。

表1 Mg在不同类型标本之间的阳性率 例(%)

2.2 不同性别之间Mg的感染情况 618例泌尿生殖道感染患者中，总体阳性率为3.23%，其中，255例男性患者中Mg阳性6例，阳性率为2.35%，363例女性患者中Mg阳性14例，阳性率为3.86%，卡方检验的结果是与男性组相比，女性组阳性率没有显著高于男性组(χ2=1.082，P=0.211)。见表2。

2.3 不同年龄组Mg阳性率的情况 618例泌尿生殖道感染患者中，≤20岁组阳性率最高，为10.34%，其次为21～30岁组，为4.18%，≥51岁组最低，为0。各年龄组患者Mg具体阳性率情况见表3。对各年龄组Mg的阳性率卡方检验的结果是不同年龄组间没有显著性差异(χ2= 8.218,P=0.084)。

表2 Mg在不同性别之间的阳性率 例(%)

表3 Mg在不同年龄组之间的阳性情况 例(%)

2.4 不同年龄段Mg阳性率曲线拟合 我们取不同年龄段内的年龄平均值，与各年龄段内的Mg阳性率做了三种曲线拟合，分别是直线，对数和指数，三者拟合数据见表4。

表4 三种曲线拟合的数据

从表4中看出，对数拟合的决定系数R2最大，标准误差中等，再结合图1中曲线与已观测点分布情况考虑，认定对数模型的拟合效果最好，拟合方程为Y=29.55-7.45ln(X)，其中Y代表阳性率，X代表年龄。

图1 阳性率与年龄的曲线拟合图

3 讨论

检验前的标本采集类型是影响检测结果的重要因素，本实验中选取了尿液和分泌物拭子两种不同的类型的标本，从统计学分析的结果看，两种类型的采集方式检测结果的阳性率没有显著性差异，可认为这两种采集方式都可以应用于门诊Mg的标本取样进行SAT方法检测，以便临床医生灵活选择，满足不同患者的要求。

本实验中应用SAT技术检测Mg的总体阳性率为3.23%，低于曾成龙等报道的7.23%[2]和路麒等报道的9.9%[7]。不同研究人员对于Mg检测结果的报道存在一定的差异，阳性率不一致的原因之一可能是主要与选取的患者对象差异有关，曾成龙和路麒选择的患者均来自皮肤性病门诊，我们选取的对象为泌尿外科和妇科门诊患者，且不同的实验室室间准确度水平并不完全一致，从而导致检测报道的Mg阳性率的不同。另外可能是由于地域气候的差异，导致不同地区的人对生殖支原体易感性的差异。

由于女性生殖道的解剖构造、生理、性活动、分娩和卫生习惯等因素，比男性更容易发生泌尿生殖道感染[8]，所以目前解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)和沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)常见泌尿生殖道感染患者中，女性的阳性率显著高于男性[8,9]。本实验结果显示，女性感染Mg阳性率均值虽然高于男性，但统计学上没有显著性差异，提示Mg在不同性别之间的发病特点可能与常见泌尿生殖道感染的UU、CT不同。已有研究发现，生殖支原体存在一个含大量脯氨酸的特殊顶端结构，通过此特殊的顶端结构黏附于上皮细胞表面[10]，可能此顶端结构的存在导致了Mg在泌尿生殖道上皮细胞的定植与UU、CT的不同，这可以作为进一步研究Mg致病机制的切入点之一。

从不同年龄组泌尿生殖道感染患者Mg阳性率可以看出，随着年龄增加，阳性率整体呈现下降的趋势，很大程度上是成年以后随着年龄增加，人群的性活跃程度也是呈下降趋势，而泌尿生殖道感染类疾病的传播又与性活跃程度密切相关。本实验结果统计学分析显示，各年龄组之间Mg阳性率没有显著性差异，栾瑞玲曾报道UU和人型支原体(MH)各年龄组之间也没有统计学差异[11]。可见，Mg与UU和MH在流行病学上年龄这一因素影响的相似性，年龄是影响Mg阳性率的因素，但可能不是决定性的因素。

本实验中各年龄组之间Mg阳性率没有显著性差异，但在Zheng等一项流行病学研究[12]中指出年轻化与Mg的感染显著性相关联，为了探讨Mg阳性率与年龄的关联度，用SPSS 19.0统计软件进行了两者的曲线拟合，通过对拟合的各方面因素综合考虑，选定了对数拟合，其P<0.05表明拟合的曲线方程有显著的统计学意义。通过对数方程可以相对准确的推算某一年龄的Mg阳性率，对于Mg的临床检验和预防工作具有一定的参考意义。

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DetectionofMycoplasmagenitaliuminthepatientswithurogenitaltractinfectioninHaikoucity

XIAOJingchuan,WANGShunlan,CAOHui.

TheCentalLaboratoryofHaikouPeople'sHospital,Haikou570208,China

CAOHui,E-mail: 13876002987@163.com

Objective: To detectMycoplasmagenitalium(Mg) in the patients with urogenital tract infection in Haikou city.MethodsFour hundred and forty secretion swabs and 178 urine specimens from 618 patients (255 males and 363 females) with urogenital tract infection were detected by simultaneous amplification and testing (SAT).ResultsMg total positivity rate was 3.23% in 618 patients. Mg positivity rates of urine and secretion swabs were 3.64% and 2.25%, with no significant difference (P>0.05). Mg positivity rates in males and females were 2.35% and 3.86%, with no significant difference (P>0.05). There was no significant difference of Mg positivity rate between different age groups (P>0.05).ConclusionSecretion swabs and urine specimen , gender and age may be not the key factors of Mg positivity rate.

Mycoplasmagenitalium; simultaneous amplification and testing

海口市人民医院中心实验室，海南海口，570208

曹卉，E-mail: 13876002987@163.com

(收稿：2017-07-05 修回：2017-08-21)