卵巢癌中Ezrin、Paxillin及CD44的表达及与临床病理参数的相关性

俞 桢 卢永超

(浙江大学医学院附属妇产科医院妇科，浙江 杭州 310006)

卵巢癌中Ezrin、Paxillin及CD44的表达及与临床病理参数的相关性

俞 桢1卢永超

(浙江大学医学院附属妇产科医院妇科，浙江 杭州 310006)

目的探讨埃兹蛋白(Ezrin)、桩蛋白(Paxillin)及CD44在卵巢癌中的表达及其与临床病理参数的相关性。方法选取卵巢癌组织120例，良性卵巢肿瘤组织100例，正常卵巢组织100例，应用免疫组化SP法检测不同组织中Ezrin、Paxillin及CD44蛋白的表达，分析其表达与临床病理参数的关系，并采用Spearman等级相关分析卵巢癌组织中Ezrin、Paxillin及CD44的相关性。结果卵巢癌组织中Ezrin、Paxillin及CD44的阳性表达率均高于良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织(均P<0.05)。Ezrin、Paxillin阳性表达率与卵巢癌手术病理分期及腹水转移有关(P<0.05)，与分化程度、病理类型无关(P>0.05)；CD44阳性表达率与卵巢癌手术病理分期、分化程度及腹水转移有关(P<0.05)，与病理类型无关(P>0.05)。Spearman等级相关分析显示，卵巢癌组织Ezrin的阳性表达率与Paxillin及CD44的阳性表达率呈正相关(Rs=0.843，0.672；均P<0.05)。结论临床上可通过检测Ezrin、Paxillin及CD44蛋白表达明确患者病情恶化情况。

卵巢癌；埃兹蛋白(Ezrin)；桩蛋白(Paxillin)；CD44

有报道显示，大约75%的卵巢癌患者确诊时已处于晚期，丧失了治疗的最佳时机〔1〕。埃兹蛋白(Ezrin)在介导细胞骨架运动、黏附和细胞间信号转导过程中发挥重要作用，与肿瘤发生发展有密切关系〔2〕。桩蛋白(Paxillin)是一种重要的细胞黏附分子，在肿瘤细胞黏附、迁移中发挥重要作用〔3〕。而CD44是一种重要的跨膜糖蛋白，参与细胞的黏附和迁移，与肿瘤转移和侵袭关系密切〔4〕。本研究旨在探讨卵巢癌中Ezrin、Paxillin及CD44的表达及与临床病理参数的相关性。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取2012年2月至2016年2月浙江大学医学院附属妇产科医院收集的卵巢癌组织120例，良性卵巢肿瘤组织100例，正常卵巢组织100例，均经病理学检查确诊。排除标准：先天性卵巢异常者，术前经放、化疗及免疫治疗者。其中卵巢癌患者年龄34～73〔平均(54.2±10.3)〕岁，国际妇产科联盟(FIGO)-手术病理分期(2003年版)：Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期88例；分化程度：低分化41例，中分化55例，高分化24例；病理类型：卵巢浆液性癌63例，卵巢黏液性癌20例，卵巢透明细胞癌19例，混合细胞癌18例；存在腹水转移71例，无腹水转移49例。良性卵巢肿瘤患者年龄36～74〔平均(54.4±10.4)〕岁。正常卵巢组织者年龄35～75〔平均(54.6±10.3)〕岁。3组一般资料比较无显著差异(P>0.05)，存在可比性。

1.2研究方法 应用免疫组化SP法检测不同组织中Ezrin、Paxillin及CD44蛋白表达情况。主要试剂包括浓缩型鼠抗人Ezrin单克隆抗体(NewoM2aekers公司生产)，鼠抗人Paxillin单克隆抗体(武汉博士德公司生产)，即用型CD44单克隆抗体(福州迈新试剂公司生产)。具体步骤严格按照试剂说明书进行，包括梯度酒精脱水、磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗、高温热抗原修复、PBS冲洗、加入生物学一抗过夜、加入生物学二抗、梯度酒精水化、二氨基联苯胺(DAB)显色、二甲苯封片等过程，完成检测后在显微镜下观察。并采用已知的阳性切片为阳性对照，阴性对照采用PBS液代替。

1.3评价标准 所有切片在400倍高倍镜下观察，参考Mathew的分级标准〔5〕进行判定，(1)Ezrin、Paxillin结果判定标准：均在细胞质内表达，且呈棕黄色颗粒。根据阳性细胞占比情况进行分级，无阳性细胞表达为阴性，阳性细胞占比<50%为弱阳性，≥50%为阳性。阳性表达率=(弱阳性+阳性)/总例数×100%。(2)CD44结果判定标准：在细胞质内表达，且呈棕色颗粒。根据高倍镜视野中所见阳性表达细胞占比进行判定：<10%为阴性，≥10%为阳性。

1.4统计学方法 应用SPSS20.0软件进行χ2检验和Spearman相关分析。

2 结 果

2.1不同卵巢组织中Ezrin、Paxillin及CD44表达比较 卵巢癌组织中Ezrin、Paxillin及CD44阳性表达率均显著高于良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织(均P<0.05)。见表1。

表1 不同卵巢组织中Ezrin、Paxillin及CD44表达比较〔n(%)〕

与正常卵巢组织比较：1)P<0.05；与良性卵巢肿瘤组织比较：2)P<0.05

2.2Ezrin、Paxillin、CD44与卵巢癌的临床病理学参数分析 Ezrin、Paxillin阳性表达率与卵巢癌手术病理分期及腹水转移有关(P<0.05)，与分化程度、病理类型无关(P>0.05)。CD44阳性表达率与卵巢癌手术病理分期、分化程度及腹水转移有关(P<0.05)，与病理类型无关(P>0.05)。见表2。

表2 Ezrin、Paxillin、CD44与卵巢癌的临床病理学参数分析〔n(%)〕

2.3卵巢癌组织中Ezrin、Paxillin及CD44表达的相关性 卵巢癌组织Ezrin的阳性表达率与Paxillin及CD44的表达阳性率呈正相关(Rs=0.843，0.672;均P<0.05)。

3 讨 论

卵巢癌是妇科肿瘤中病死率最高的恶性肿瘤，且发病早期具有较强的隐匿性，临床上一直缺乏早期有效的诊断，待到相关症状明显时，通常已是中晚期〔6〕。

本研究结果表明，Ezrin、Paxillin及CD44均在卵巢癌的发生、发展过程中起着至关重要的作用。Ezrin的临床表达具有相对的组织及细胞特异性，主要在维持细胞生存及形态方面发挥独特作用，同时可通过和肿瘤细胞表面黏附分子产生作用，从而对肿瘤细胞的分化、侵袭及转移造成影响〔7〕。Paxillin可通过和整合素发生作用，从而形成细胞和细胞外基质黏附部位，同时与多种信号蛋白与结构蛋白相互作用，进一步参与细胞形态变化、运动、黏附及侵袭的过程，从而对恶性肿瘤细胞的浸润转移产生调控作用〔8〕。CD44属于跨膜糖蛋白，主要是在细胞的黏附及迁移过程中发挥重要作用，且在多种存在侵袭及转移的肿瘤中显著表达〔9〕。此外，本研究结果表明，在临床治疗卵巢癌过程中可通过抑制Ezrin的表达或对其活性进行有效控制，可能有效控制病情稳定，甚至好转。因此，Ezrin可能成为未来抗肿瘤疾病的有效生物靶点之一。另外，卵巢癌患者的Paxillin表达水平可在一定程度上反映病情严重程度。Paxillin可通过调控下游的细胞外信号调节激酶(ERK)表达，从而刺激ERK信号的转导，进一步共同作用促进卵巢癌细胞的增殖、生长，最终导致病情的恶化〔10〕。因此，对Paxillin表达进行有效控制，亦可能成为临床治疗卵巢癌的有效途径之一。本文结果还提示CD44参与了卵巢癌的发生、发展过程，其表达水平可反映患者病情的严重情况。CD44属于多功能细胞表面黏附分子，亦是透明质酸的受体，可通过对肿瘤细胞和细胞外基质的结合能力产生影响，进一步促进肿瘤的侵袭及转移。由此，临床治疗中通过抑制CD44的表达，可能有效防止卵巢癌的侵袭及转移，为卵巢癌的治疗提供了新的思路〔11〕。Ezrin、Paxillin及CD44可能通过不同的方式共同参与了卵巢癌的发生、发展、侵袭和转移，这对开展卵巢癌分子靶向治疗提供了新的思路。

1杨 娜，韩燕燕，张梅娜，等.计算机辅助超声诊断提高卵巢癌诊断的准确性〔J〕.现代生物医学进展，2017；17(2)：276-9.

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3於安康，程 帆，袁 润，等.Talin和Paxillin在膀胱尿路上皮癌的表达及其意义〔J〕.武汉大学学报(医学版)，2016；37(3)：422-5.

4黄丽珊，卢碧燕，李仲均，等.CD44v6在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其对卵巢癌细胞株侵袭和迁移能力的影响〔J〕.现代肿瘤医学，2016；24(4)：625-9.

5张丽华，王 婧，武 昕，等.Moesin和RhoA蛋白在外阴鳞癌中的表达及意义〔J〕.中国妇幼保健，2015；30(3)：414-6.

6Yang Y，Zhao X，Li X，etal.Effects of anti-CD44 monoclonal antibody IM7 carried with chitosan polylactic acid-coated nano-particles on the treatment of ovarian cancer〔J〕.Oncol Lett，2017；13(1)：99-104.

7杨 波，李胜泽，马 玲，等.miR-132靶向调控Ezrin抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡的实验研究〔J〕.中国免疫学杂志，2017；33(1)：72-5，80.

8Theocharis S，Kotta-Loizou I，Giaginis C，etal.Expression and clinical significance of concomitant FAK/SRC and p-Paxillin in mobile tongue squamous cell carcinoma〔J〕.Anticancer Res，2017；37(3)：1313-9.

9Nakamura K，Sawada K，Kinose Y，etal.Exosomes promote ovarian cancer cell invasion through transfer of CD44 to peritoneal mesothelial cells〔J〕.Mol Cancer Res，2017；15(1)：78-92.

10Yoo SM，Latifkar A，Cerione RA，etal.Cool-associated tyrosine-phosphorylated protein 1 is required for the anchorage-independent growth of cervical carcinoma cells by binding paxillin and promoting akt activation〔J〕.J Biol Chem，2017；292(9)：3947-57.

11林 洁，席晨光，王玉湘，等.CD44及CK18在卵巢浆液性癌中的表达及临床意义〔J〕.现代妇产科进展，2016；25(4)：245-8.

R73

A

1005-9202(2017)23-5854-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.23.048

1 绍兴市上虞人民医院妇科

卢永超(1979-)，男，博士，副教授，主要从事妇科肿瘤研究。

俞 桢(1982-)，女，在读硕士，主治医师，主要从事妇科肿瘤研究。

〔2017-05-11修回〕

(编辑 袁左鸣/滕欣航)