高效液相色谱法测定丹参注射液中丹酚酸B含量

许晓君

(荆州市第三人民医院妇产科，湖北 荆州 434000)

[引著格式]许晓君. 高效液相色谱法测定丹参注射液中丹酚酸B含量[J].长江大学学报(自科版), 2017,14(24):4～6.

高效液相色谱法测定丹参注射液中丹酚酸B含量

许晓君

(荆州市第三人民医院妇产科，湖北 荆州 434000)

目的：通过高效液相色谱法(HPLC)测定丹参注射液中丹酚酸B的含量，为其质量控制提供可靠方法依据。方法：丹酚酸B标准溶液作为外标溶液，采用高效液相色谱法测定丹酚酸B的含量。结果：丹酚酸B在0.0986～0.9860mg/mL范围内与峰面积具有良好线性关系。结论：高效液相色谱法测定丹参注射液中丹酚酸B的含量，范围广、分辨率高、数据处理速度快、结果准确、误差小，可作为测定丹参注射液水溶性成分质量的方法。

丹酚酸B；高效液相色谱法(HPLC)；含量测定

丹参是一种传统的中药，祛瘀活血，清心通络，是我国中医胸痹心痛辨证治疗中的常用药物[1]。药效学研究结果表明:丹参水溶性成分和脂溶性成分均有明显的心血管活性，对缺血心肌有保护作用[2]。丹参的有效成分主要是丹酚酸类和丹参酮两大类有机物，丹参酸属于水溶性组分，丹参酮属于脂溶性组分[3],前者以抗氧化、抗凝血和细胞保护作用为主，而丹参酮类化合物以改善血液循环[4]、抗菌和抗炎作用为主[5]，并具有显著的抗菌和适度的性激素样作用[6]。丹参水溶性酚酸类成分中主是要丹参素、丹酚酸B等是主要起药物疗效的物质[7]。许多研究文献在评测丹参类注射液的质量控制指标成分时，仅以丹参素和原儿茶醛作为指标, 是不足以全面反映该制剂临床疗效的，也应对丹参酚的含量进行测评。故本实验采用反相高效液相色谱法(HPLC)对丹参注射液中的丹酚酸B进行含量测定，并对该实验的方法进行考察，使该丹参类注射液的质量控制指标成分评价指标体系具有科学意义。

1 材料与方法

1.1 仪器

紫外可见分光光度计(日本岛津UV-240型)；高效液相色谱仪(岛津LC10AT)；紫外检测器(PDA-100)；色谱工作站(浙大N2000)；色谱柱(岛津C18色谱柱diamonsil@(钻石)C18, 250mmx4．6mm，5μm)；100μL微量进样器 (上海高鸽)；电子分析天平(OHAUS CP114 )0.45μm微孔滤膜。

1.2 药品及试剂

样品：丹参注射液(四川宜宾制药厂 10mL/支 批号100206)；对照品：丹酚酸B对照品(20mg/支批号111562-201514)；对照品均购自中国食品药品检定研究所，供含量测定用；甲醇(色谱纯)，水为屈臣氏蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

1.3 对照品和供试品的制备

精密称取对照品，加70%甲醇溶液制成含丹酚酸B 0.986mg/mL的溶液对照品溶液，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤即得。取适量丹参注射液，经0.45μm微孔滤膜过滤即得供试品。

1.4 检测波长的选择

以水为空白溶液，分别取丹酚酸B对照品溶液，在200～400nm的波长范围内进行紫外扫描，最大吸收波长为282.8、280.4、286.8nm，比较丹参注射液在不同检测波长下的色谱图, 确定样品测定波长为282nm。

1.5 HPLC色谱条件

色谱柱：选择C18反相色谱柱；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；检测波长：282nm；流速：0.8mL/min；洗脱时间：约40min；柱温：室温；进样量：10μL。

1.6 方法学考察

丹酚酸B对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相仪，记录色谱图。由保留时间确定各物质相应的色谱峰，确定参照峰。

精密量取1、2、4、6、8、10mL混合对照品溶液分别置于10mL量瓶中，加70%甲醇至刻度稀释摇匀，在波长：282nm；流速：0.8mL/min；洗脱时间：约40min；柱温：室温条件下分别进样10μL，分别记录色谱图、峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程。

2 结果

2.1 方法学考察结果

取丹酚酸B对照品溶液10μL，注入高效液相仪，记录色谱图，结果如图1、2所示。从图中可以看出丹酚酸B对照品色谱峰的保留时间tR约为36min，可以确定峰3-为丹酚酸B。另两峰为已知成分为丹参素钠、原儿茶醛。

图1 丹酚酸B对照品HPLC色谱图 图2 丹参注射液HPLC色谱图

2.2 线性关系

将稀释后的对照品取10μL进样，以峰面积为横坐标，对照品溶液的量(μg)为纵坐标，绘制标准曲线,求回归方程，丹酚酸B在0.0986～0.9860mg/mL范围内与峰面积具有良好线性关系。结果见表1、图3。

表1 丹酚酸B线性关系考察数据表

图3 丹酚酸B标准曲线图

2.3 加样回收率试验结果

按已确定的色谱条件，测定峰面积，采用外标法求出丹酚酸B的含量，并计算回收率，所测得的回收率为均在95%～105%之内，符合方法学考察要求。见表2。

3 讨论

本实验采用HPLC法测定丹参注射液中丹酚酸B水溶性成分含量, 使丹参类注射液的质量控制指标成分评价指标体系具有科学意义。

由于温度和pH对丹参注射液中水溶性有效成分丹酚酸B的回收率影响比较大，而现标准制备工艺中没有明确规定在水沉醇沉时的温度，因此在开展实验前要对丹参注射液进行必要的优化。丹参注射液生产厂家众多，市面上生产丹参注射的厂家众多，有香丹注射液、丹红注射(滴注)液、丹参多酚酸盐、注射用丹参(冻干)等多种品种。不同厂家的丹参注射液由于生产工艺有所不同，还有使用的原料也不尽相同，导致其质量可能存在较大差异。因此必须严格控制丹参的原药材来源的单一性，最终才能保证产品的疗效和质量的可靠、均一性。丹参水溶性成分主要是酚酸类化合物[8], 与丹参药材相比，丹参注射液的化学成分研究比较薄弱，厂家评测丹参注射液时仅仅评测丹参素和原儿茶醛来评估注射液的效果是不科学的，难以保证其临床使用的安全性和有效性，制约了其长期的健康发展。针对目前这一的状况，可采用高效液相色谱法方法对丹参制剂中的系列化学成分进行进一步的测定，重点对其酚酸类活性如丹酚酸B，进行定量的研究，对药品质量工艺控制，保障病人用药安全都具有深远的意义。

表2 丹酚酸B回收率测定结果

[1]王之羽, 王友群, 李明. 302例丹参注射液临床不良反应分析[J]. 中国药房, 2010, 21(32):3035～3036.

[2] 曹媛, 曹婉雯, 陈渊成,等.丹参水溶性成分抗心肌缺血的作用机制[J].药学进展, 2010,34(6):248～250.

[3] 王元文,张翔,蔡建国,等.超临界流体洗脱树脂上的丹参酚酸研究[A].上海：上海化学化工学术学会，2005.

[4] 杜冠华, 张均田. 丹参现代研究概况与进展(续一)[J]. 医药导报, 2004, 23(6):355～360.

[5] 吴杲, 何招兵, 吴汉斌, 等. 丹参酮的药理作用研究进展[J]. 现代中西医结合杂志, 2005, 14(10):1382～1385.

[6] 周立运, 朱晓新. 丹参及其化学成分药代动力学研究的进展[J]. 中国实验方剂学杂志, 2005, 6(2):23～25.

[7] Tan M K, Zhang J T. Salvianolic acid B inhibits fibril formation and neurotoxicity of amyloid betaprotein invitro[J]. Acta Pharmacol Sin, 2001,22(4):380～384.

[8] 孟锐, 任晓宇, 蓝培元. 中药注射剂入选国家基本药物目录存在问题的分析——以丹参注射液为例[J]. 中国药房,2010,21(28):2606～2608.

2017-04-28

许晓君(1965-)，女，主管护师，主要从事临床护理工作，409720909@qq.com。

R285.5；R927.2

A

1673-1409(2017)24-0004-03

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