三种剂量艾迪注射液对多西他赛在大鼠体内药动学参数的影响Δ

刘 雁，许 健，邢亚群，陈卫东

(1.蚌埠医学院第一附属医院药剂科，安徽 蚌埠 233000； 2.蚌埠医学院第二附属医院药剂科，安徽 蚌埠 233000； 3.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012)

三种剂量艾迪注射液对多西他赛在大鼠体内药动学参数的影响Δ

刘 雁1*，许 健1，邢亚群2，陈卫东3#

(1.蚌埠医学院第一附属医院药剂科，安徽 蚌埠 233000； 2.蚌埠医学院第二附属医院药剂科，安徽 蚌埠 233000； 3.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012)

目的：探讨三种剂量艾迪注射液对多西他赛在大鼠体内药动学参数的影响。方法：取24只SD大鼠随机分为艾迪注射液低、中及高剂量组和空白对照组，每组6只。艾迪注射液低、中及高剂量组大鼠分别尾静脉注射艾迪注射液5、10及20 ml/kg，连续给药10 d，空白对照组大鼠不做任何特殊处理；四组大鼠于第10日最后1次给药结束后10 min，尾静脉注射相同剂量的多西他赛13.5 mg/kg。四组大鼠于注射多西他赛后2、5、10、20、30、60、120、240、480和600 min 于眼框静脉丛取血约0.4 ml，经预处理后进样分析，根据血药浓度计算药动学参数。结果：与空白对照组比较，艾迪注射液高剂量组大鼠血浆半衰期(t1/2)和表观分布容积(Vd)明显降低；艾迪注射液中剂量组大鼠t1/2、药时曲线下面积和Vd明显降低，血浆清除率明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：10 ml/kg的艾迪注射液可加速大鼠体内多西他赛的清除，表现出较强的诱导作用。

多西他赛； 艾迪注射液； 药动学参数

*副主任药师。研究方向：药动学。E-mail：905015187@qq.com

#通信作者：主任药师，教授。研究方向：药动学。E-mail:anzhongdong@126.com

多西他赛为紫杉醇类抗肿瘤药，用于恶性肿瘤的疗效确切，但其引起的不良反应对治疗不利。艾迪注射液为中药复方制剂，其主要成分斑蝥素可通过诱导细胞凋亡[1]、调控细胞周期[2]及增强免疫或细胞自噬[3-4]等机制，发挥一定的抗肿瘤活性，该药与其他抗肿瘤药联合应用可增效减毒[5-7]。多西他赛与艾迪注射液在适应证的覆盖方面有较大交集，具有联合用药的可能；目前，已有2药联合治疗非小细胞肺癌的报道，可提高疗效、减少多西他赛的毒性反应，提高化疗顺应性和远期生存率[8]。然而，联合用药可能会通过影响代谢酶的活性或表达而发生药物相互作用，使多西他赛的药效增强或减弱，也可能增加药品不良反应。本研究探讨了三种剂量艾迪注射液对多西他赛在大鼠体内药动学参数的影响，以期为临床合理用药提供理论依据。

1 材料

1.1 实验动物

无特定病原体级SD大鼠24只，雌雄各半，体质量(220±20) g，由安徽医科大学实验动物中心提供[许可证号：SCXK(皖)2016-012]。

1.2 仪器

Agilent-1290型超高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；AB135-S型十万分之一电子天平(德国METTLERTOLEDO)；XW-80A型微型涡旋混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)；KQ-300B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；TG16-WS型台式高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；LC-4016型低速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)；DW-86L388A型立式超低温保存箱(青岛海尔特种电器有限公司)；BCD-225CHC型冰箱(合肥美菱股份有限公司)；Milli-Q Gradient A10型超纯水系统(密理博贸易有限公司)。

1.3 药品与试剂

多西他赛标准品(中国食品药品检定研究院，纯度99.3%，批号：100666—200401)；紫杉醇标准品(中国食品药品检定研究院，纯度99.6%，批号：100382—201102)；多西他赛注射液(齐鲁制药有限公司，批准文号：国药准字H20041129，批号：5030021TB，规格：40 mg)；艾迪注射液(贵州益佰制药股份有限公司，批准文号：国药准字Z52020236，批号：20160824，规格：10 ml)；甲醇(上海星可高纯溶剂有限公司，色谱纯)；超纯水(Milli-Q超纯水机制备)。

2 方法与结果

2.1 实验动物分组与处理

将24只SD大鼠随机分为艾迪注射液低、中及高剂量组和空白对照组，每组6只。艾迪注射液低、中及高剂量组大鼠分别尾静脉注射艾迪注射液5、10及20 ml/kg，连续给药10 d，空白对照组大鼠不做任何特殊处理。四组大鼠于给药第9日晚8时开始禁食，但不禁水；于第10日最后1次给药结束后10 min，尾静脉注射相同剂量的多西他赛13.5 mg/kg。

2.2 色谱条件

色谱柱为Hypersll BDS C18柱(2.1 mm×100 mm，3 μm)，检测波长为230 nm，流动相为甲醇-超纯水(V∶V=55 ∶45)，流速为0.4 ml/min，柱温为30 ℃，进样量为10 μl。

2.3 溶液的制备

精密称取多西他赛标准品适量和内标紫杉醇标准品适量，分别置于10和20 ml容量瓶中，以甲醇定容至刻度，分别制得质量浓度为100 μg/ml的多西他赛储备液和紫杉醇储备液。

2.4 样品预处理

取四组大鼠血浆100 μl，置于1.5 ml离心管中(已肝素化)，加入内标紫杉醇储备液15 μl，再加入甲醇300 μl，涡旋振荡3 min后，于14 000 r/min下高速离心10 min，精密吸取上清液200 μl，通过0.22 μm微孔滤膜，即得。

2.5 专属性考察

多 西他赛和内标紫杉醇的保留时间分别为8.75、6.59 min，血浆中的内源性物质不干扰测定，见图1。

A.空白血浆；B.空白血浆+多西他赛；C.空白血浆+紫杉醇；D.空白血浆+多西他赛+紫杉醇；E.尾静脉注射多西他赛后的血浆样本 A.blank plasma; B.blank plasma+docetaxel; C.blank plasma+paclitaxel; D.blank plasma+docetaxel+paclitaxel; E.plasma sample after the tail venous injection of docetaxel图1 高效液相色谱图Fig 1 High performance liquid chromatography

2.6 标准曲线及定量下限

将多西他赛储备液分别稀释并加入至空白血浆中，制得10.00、5.00、2.00、1.00、0.50、0.20、0.10和0.05 μg/ml的多西他赛工作液，按照“2.4”项下方法处理，再按“2.2”项下色谱条件进样分析，以大鼠血浆中多西他赛质量浓度为横坐标(X，mg/L)，以多西他赛与内标紫杉醇的峰面积比为纵坐标(Y)，得回归方程为Y=0.092X+0.008 2，R2=0.999 2。结果表明，多西他赛在0.05～10 μg/ml范围内线性关系良好，大鼠血浆中多西他赛的定量下限(S/N=10)为0.05 μg/ml。

2.7 精密度试验

在大鼠空白血浆中加入适量多西他赛储备液，制得0.1、0.5和10.0 μg/ml的样品，每个质量浓度5份，按“2.2”项下色谱条件进样分析。连续测定3 d，进行日内和日间精密度验证。结果表明，日内精密度低、中及高质量浓度的RSD分别为10.41%、5.62%及3.14%，日间精密度低、中及高浓度的RSD分别为11.31%、6.45%及3.14%，仪器精密度良好。

2.8 回收率测定

空白血浆中加入适量多西他赛质量和内标紫杉醇，制成多西他赛质量浓度为0.1、0.5和10.0 μg/ml的样品，每个质量浓度平行配制6份，按照“2.4”项下方法处理，再按“2.2”项下色谱条件进样分析，记录多西他赛峰面积C1。另取大鼠空白血浆适量，加入3倍体积甲醇后，再加入适量的多西他赛和紫杉醇标准品溶液，制得多西他赛质量浓度为0.1、0.5和10.0 μg/ml的样品，每个质量浓度平行配制6份，按照“2.4”项下方法处理，再按“2.2”项下色谱条件进样分析，记录多西他赛峰面积C2。大鼠血浆中多西他赛提取回收率=C1/C2。结果表明，低、中及高质量浓度的多西他赛提取回收率分别为(87.65±3.12)%、(91.25±2.31)%及(92.53±4.27)%。

2.9 稳定性试验

在大鼠空白血浆中加入适量多西他赛储备液，制得0.1、0.5和10.0 μg/ml的样品，每个质量浓度平行制备5份，分别于-80 ℃反复冻融3次和室温(25 ℃)下放置24 h后依次进样测定。结果显示，低、中及高质量浓度的质控样品在-80 ℃冻融和室温放置24 h后的RSD分别为3.5%、4.7%及5.8%和3.1%、2.9%及4.3%，表明多西他赛的稳定性良好。

2.10 药动学研究

(1)四组大鼠于注射多西他赛后2、5、10、20、30、60、120、240、480和600 min从眼框静脉丛取血约0.4 ml，置于涂有肝素的离心管中，低速离心(3 000 r/min)10 min后取上层血浆，按“2.4”项下方法处理，再按“2.2”项下色谱条件进样分析，得到多西他赛峰面积，计算血药浓度。四组大鼠的平均药时曲线见图2。(2)根据血药浓度数据，采用WinNonlin 5.2软件以非房室模型计算多西他赛的药动学参数，结果采用SPSS 17.0软件进行统计学检验(采用Students’t-test)。结果表明，与空白对照组相比，艾迪注射液中剂量组大鼠的血浆半衰期(t1/2)、药时曲线下面积(AUC0～∞)和表观分布容积(Vd)明显降低，血浆清除率(CLz)明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；与空白对照组相比，艾迪注射液高剂量组大鼠的t1/2、Vd明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；艾迪注射液低剂量组大鼠的各药动学参数与空白对照组的差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

图2 四组大鼠的多西他赛药时曲线(n=6)Fig 2 Blood concentration-time curve of docetaxel of four groups (n=6)

表1 四组大鼠的多西他赛药动学参数Tab 1 Pharmacokinetics parameters of docetaxel of four groups (±s, n=6)

3 讨论

多西他赛的药动学研究较多，研究认为其主要通过CYP3A4(对应大鼠Cyp3a1)酶进行代谢[9]。而艾迪注射液对CYP3A4的活性无影响或有较弱的抑制作用[10-12]，未见其有诱导CYP3A4活性的报道，故其诱导多西他赛的清除可能是通过诱导CYP3A4的蛋白表达来实现的。除CYP3A4外，其他CYP酶亚型[13]、P-糖蛋白[14]和有机阴离子转运多肽[15]等转运蛋白也会对多西他赛的清除产生影响，艾迪注射液可能影响上述一个或多个蛋白而诱导多西他赛的清除；还可能诱导多西他赛的排泄，从而诱导多西他赛的清除。

本研究结果显示，与空白对照组比较，艾迪注射液中剂量组大鼠的t1/2、AUC0～∞和Vd明显降低，CLz明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；与空白对照组比较，艾迪注射液高剂量组大鼠的t1/2、Vd明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；艾迪注射液低剂量组大鼠的各药动学参数与空白对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。表明中剂量艾迪注射液可能诱导了多西他赛的体内清除；高剂量艾迪注射液对多西他赛的代谢也有一定的诱导作用，但比中剂量弱；低剂量艾迪注射液对多西他赛的清除无显著影响。

[1]Prasad SB，Verma AK.Cantharidin-mediated ultrastructural and bio-chemical changes in mitochondria lead to apoptosis and necrosis in murine Dalton’s lymphoma[J].Microsc Microanal，2013，19(6)：1377-1394.

[2]Li W，Xie L，Chen Z，et al.Cantharidin, a potent and selective PP2A inhibitor, induces an oxidative stress-independent growth inhibition of pancreatic cancer cells through G2/M cell-cycle arrest and apoptosis[J].Cancer Sci，2010，101(5)：1226-1233.

[3]Verma AK，Prasad SB.Antitumor effect of blister beetles: an ethno-medicinal practice in Karbi community and its experimental eval-uation against a murine malignant tumor model[J].J Ethnopharma-col，2013，148(3)：869-879.

[4]Chen X，Qiu J，Yang D，et al.MDM2 promotes invasion and met-astasis in invasive ductal breast carcinoma by inducing matrix meta-lloproteinase-9[J].PLoS One，2013，8(11)：e78794.

[5]Xiao Z，Wang C，Chen L，et al.Has aidi injection the attenuation and synergistic efficacy to gemcitabine and cisplatin in non-small cell lung cancer? A meta-analysis of 36 randomized controlled trials[J].Oncotarget，2017，8(1)：1329-1342.

[6]Wang X，Jin W，Fang B，et al.Aidi injection combined with CHOP chemotherapy regimen in the treatment of malignant lymphoma: A meta-analysis based on randomized controlled trials[J].J Cancer Res Ther，2016，12(Supplement):11-14.

[7]Ge L，Wang YF，Tian JH，et al.Network meta-analysis of Chinese herb injections combined with FOLFOX chemotherapy in the treat-ment of adv-anced colorectal cancer[J].J Clin Pharm Ther，2016，41(4)：383-391.

[8]辛国华，侯继申，张志民.洛铂、多西他赛和艾迪注射液联合用药对72例ⅢB期非小细胞肺癌的综合疗效分析[J].中药材，2014，37(4)：722-725.

[9]Kenmotsu H，Tanigawara Y.Pharmacokinetics, dynamics and toxicity of docetaxel: Why the Japanese dose differs from the Western dose[J].Cancer Sci，2015，106(5)：497-504.

[10] 徐洁.艾迪注射液药物相互作用研究[D].南京：南京中医药大学，2013：1-51.

[11] 杨旭平，冯碧敏，黄毅岚，等.4种抗肿瘤中药注射液对大鼠细胞色素P4503A4亚型酶活性的影响[J].中国临床药理学杂志，2014，30(9)：800-802.

[12] 刘丽雅，韩永龙，余奇，等.消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射剂对人肝微粒体中CYP450酶7种亚型的体外抑制作用研究[J].中国临床药理学与治疗学，2014，19(5)：522-527.

[13] Cui J，Meng Q，Zhang X，et al.Design and Synthesis of New α-Naphthoflavones as Cytochrome P450 (CYP) 1B1 Inhibitors To Overcome Docetaxel-Resistance Associated with CYP1B1 Overex-pression[J].J Med Chem，2015，58(8)：3534-3547.

[14] Kato T，Mizutani K，Kameyama K，et al.Serum exosomal P-glycop-rotein is a potential marker to diagnose docetaxel resistance and select a taxoid for patients with prostate cancer[J].Urol Oncol，2015，33(9)：385.

[15] Kim HJ，Im SA，Keam B，et al.ABCB1 polymorphism as prognostic fac-tor in breast cancer patients treated with docetaxel and doxorubi-cin neoadjuvant chemotherapy[J].Cancer Sci，2015，106(1)：86-93.

EffectsofThreeDosagesofAidiInjectiononthePharmacokineticParametersofDocetaxelinRatsΔ

LIU Yan1, XU Jian1, XING Yaqun2, CHEN Weidong3

(1.Dept.of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Anhui Bengbu 233000, China; 2.Dept.of Pharmacy, the Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Anhui Bengbu 233000, China; 3.College of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Anhui Hefei 230012, China)

OBJECTIVE: To probe into the effects of three dosages of Aidi injection on the pharmacokinetic parameters of docetaxel in rats. METHODS: 24 SD rats were randomly divided into low dose group, medium dose group, high dose group and blank control group, with 6 SD rats in each. The low dose group, medium dose group and high dose group were respectively given tail intravenous injection of 5, 10 and 20 ml/kg of Aidi injection for 10 consecutive days, rats in blank control group

no process; all the four groups of rats were given same dose of docetaxel for 13.5 ml/kg at 10 min after the last administration at the 10th day. Each 0.4 ml blood was obtained from orbital venous plexus of four groups of rats at 2, 5, 10, 20, 30, 60, 120, 240, 480 and 600 min after the injection of docetaxel, and then was analyzed after pre-processing, the pharmacokinetic parameters were calculated according to the blood concentration. RESULTS: Compared with the blank control group, the plasma half-time (t1/2) and apparent volume of distribution (Vd) of high dose group were significantly decreased; thet1/2, area under curve of blood concentration-time andVdof medium dose group were significantly decreased, the plasma clearance rate was significant increased, with statistically significant differences (P<0.05). CONCLUSIONS: 10ml/kg of Aidi injection can accelerate the clearance of docetaxel in rats, which presented a strong induction.

Docetaxel; Aidi injection; Pharmacokinetic parameters

R969.1

A

1672-2124(2017)11-1471-03

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.11.009

安徽省教育厅一般项目(No.KJ2015B067by)

2017-06-13)