一例猪轮状病毒和圆环病毒2型混合感染的案例报道

龚双燕，李小璟，李幽幽，陈瑛琪，蔡 瑶，李雨濛，徐逸飞，徐志文，2，朱 玲，2

（1.四川农业大学动物医学院，四川 成都 611130；2.四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 成都 611130）

一例猪轮状病毒和圆环病毒2型混合感染的案例报道

龚双燕1，李小璟1，李幽幽1，陈瑛琪1，蔡 瑶1，李雨濛1，徐逸飞1，徐志文1，2，朱 玲1，2

（1.四川农业大学动物医学院，四川 成都 611130；2.四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 成都 611130）

2017年6月，四川省绵阳市某猪场仔猪出现渐进性消瘦、严重腹泻、呕吐、部分病猪死亡等临床症状，采集发病猪的肠道、淋巴结等样品，应用PCR、RT-PCR方法进行实验室检测。结果表明，该猪场为猪轮状病毒（PoRV）和猪圆环病毒2型（PCV2）混合感染。通过采取综合防控措施，病情得到有效控制，减少了该猪场的经济损失。

猪轮状病毒；猪圆环病毒2型；混合感染；诊断

轮状病毒（rotavirus）属呼肠孤病毒科轮状病毒属，可引起各种幼龄动物腹泻[1]，其中猪轮状病毒（porcine rotavirus,PoRV）是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原之一，感染仔猪主要表现为腹泻、呕吐，严重者脱水，且易继发其他细菌性感染，导致仔猪死亡率升高，生长缓慢，给世界各国的畜牧业造成严重的经济损失[2]。PoRV存在多种血清型，各血清型间无交叉保护或交叉保护性很差[3-4]。资料显示，我国猪群中轮状病毒的感染以A群为主，在A群PoRV中VP7是中和抗原基因，它编码轮状病毒外壳上的主要糖蛋白和中和抗原蛋白，在各毒株中高度保守[5]。

猪圆环病毒病（PCVD）是由猪圆环病毒2型（PCV2）引起的一种传染病。PCV2可导致断奶仔猪多系统衰竭综合征的发生，也与猪皮炎肾病综合征和仔猪先天性震颤相关[6]。PCV2不仅造成猪生长缓慢、饲料报酬降低，还可造成机体免疫抑制，引起其它疾病的暴发[7]，严重危害养猪业的发展。

1 发病情况、临床症状和剖检病变

2017年6月，四川省绵阳市某猪场病猪普遍表现出眼眶周围呈黑色，精神沉郁，食欲不振；2周龄内仔猪突发呕吐、腹泻排出糊状或者水样粪便，呈黄绿色、灰色或者黄白色，并混杂一定量的絮状物，散发腥臭味，死亡率高达95%以上。

解剖病死猪观察病变发现，肺脏肉变，肺门淋巴结及肠系膜淋巴结不同程度肿大出血，脾肿大发黑，有胸腔积液，肠内有灰绿色或黄白色黏稠液体，血液凝固不良，剖检采样后经实验室检验，结合临床症状，诊断为PCV2及PoRV混合感染。对发病猪曾用抗生素类药物治疗，疗效不理想。该猪场注射猪传染性胃肠炎、轮状病毒二联弱毒疫苗（哈尔滨兽医研究所研制）和猪圆环病毒疫苗，并采取综合防治措施后，病情得到有效控制，减少了猪场的经济损失。

2 实验室检测

2.1 试验地点

病料（1头病死仔猪编号1和1头肥育猪编号2）送至四川农业大学动物生物技术中心进行检测。

2.2 试验试剂

DNA、RNA提取试剂盒，Taq DNA聚合酶，RNA反转录试剂盒，均购自TaKaRa公司；引物均由上海Sangon生物工程公司合成。

2.3 试验器材

美国Thermo Micro21R微量离心机购自赛默飞成都分公司；PCR仪购自成都百乐科技有限公司；Eppendorf（EP）管、10 mL注射器。

2.4 检测方法

先提取病料RNA和DNA，采用反转录-聚合酶链式反应RT-PCR检测PoRV，聚合酶链式反应PCR方法检测PCV2。试验方法均按照试剂盒说明书及分子克隆实验指南（第3版）[8]操作。所用引物如下。

根据GenBank已发表的PCV2序列，笔者自己设计一对特异引物PCV2-F、PCV2-R，预计扩增产物大小为178 bp，PoRV引物源自本实验室检测用引物，均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成（表1）。

表1 PCR引物序列

3 结果与防治措施

（1）图1中1、2泳道为猪圆环病毒检测结果，条带大小为178 bp，呈阳性；图2中1、2泳道为猪轮状病毒检测结果，条带大小为500 bp，呈阳性。图1、图2中分别设有阴、阳性对照，证明本试验是成立的，可信度极高。根据检验结果，结合临床症状、剖检变化，诊断该猪场发生的疾病为PCV2及PoRV混合感染。

图1 两份病猪样品PCV2电泳结果

图2 两份病猪样品PoRV电泳结果

（2）针对诊断结果，采取防治措施：①免疫接种。对未发病猪群使用猪传染性胃肠炎、轮状病毒二联弱毒疫苗（哈尔滨兽医研究所研制）和猪圆环病毒疫苗进行免疫预防。两种疫苗免疫时间要有一定的间隔，注射疫苗保证免疫到位，提高猪群整体的免疫力，防制疾病继续发生和扩散；新生仔猪可在吮乳前肌内注射传染性胃肠炎、轮状病毒二联弱毒疫苗1 mL，至少经过30 min才能够再吮乳，并在断奶前7～10 d肌内注射2 mL，能够持续保护6个月；妊娠母猪可分别在分娩前5～6周和1周肌内注射1 mL，能够持续保护1年；架子猪、肥育猪和种公猪可肌内注射1 mL，能够持续保护6个月；②其次加强饲养管理。猪场严格采取全进全出制，确保从没有感染疾病的地区引进猪群。猪圈要经常进行清扫，且饲养不同批次的猪圈必须经过全面彻底的消毒处理；确保饲喂全价饲料，营养丰富，并注意给母猪及仔猪供给生长所必须的各种营养元素，提高机体抵抗疾病的能力。

（3）目前，轮状病毒还没有特殊性的防治措施。主要推荐采取对症治疗，即避免发生脱水，抑制腹泻，控制继发感染其他病菌。常用措施是立即停止喂乳，停止饲料饲喂，可使用葡萄糖盐水替代乳汁，如饮用葡萄糖甘氨酸溶液，能够显著缓解呕吐和腹泻症状。

（4）猪圆环病毒病是一种免疫抑制疾病，病原可破坏机体的免疫系统，导致机体抗病力降低。PCV2经常与高致病性蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌等病原发生混合感染或继发感染，与轮状病毒混合感染相比较为罕见，如果猪场发病后，疫情会更加严重，病死率也大幅增加。目前对猪圆环病毒病的防制主要是使用灭活疫苗对猪群进行免疫预防，同时结合生物安全、饲养管理和药物预防等综合防控措施，以达到防治该病的目的。

综上所述，对猪轮状病毒病和猪圆环病毒病的防制，应采取健全的生物安全措施、科学免疫接种、定期病原监测和加强饲养管理等综合防控措施，才能有效控制疾病的发生。若要消除PoRV和PCV2，可考虑清除带毒猪，以达到净化疾病的目的，净化实施过程中由于涉及大量种猪的淘汰和引进更新，投入的时间和经济成本都会很高，可考虑先由原种猪场实施。

[1] 殷震.动物病毒学[M].北京：科学出版社，1997.

[2] 王玲，蒲万霞，孟小琴，等.2007年甘肃省仔猪轮状病毒性腹泻的流行病学调查研究[J].中国动物检疫，2008，25（11）：40-41.

[3] Hoshino Y,Nishikawa K,Benfield D A,et al.Mapping of antigenic sites involved in serotype-cross-reactive neutralization on group A rotavirus outercapsid glycoprotein VP7[J].Virology,1994,199(1):233.

[4] Akopian T A,Lunin V G,Kruglyak V A,et al.Nucleotide sequence of the cDNA for porcine rotavirus VP7 gene(strain K)[J].Virus Genes,1992,6(4):393-396.

[5] 师东方，李一经，贾永清，等.猪轮状病毒中国分离株JL94 VP7基因的克隆与序列分析[J].中国兽医杂志，2003，39（8）：8-11.

[6] 周继勇，陈庆新，叶菊秀，等.猪圆环病毒2型感染的血清学分析[J].中国兽医学报，2004，24（1）：1-3.

[7] 王慧，宋宏晓，师丽刚，等.猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒混合感染的检测分析[J].中国畜牧兽医，2012，39（9）：173-177.

[8]J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔，萨姆布鲁克，等.分子克隆实验指南[M].第3版.科学出版社，2002.

S858.285.3

A

1002-1957(2017)06-0097-02

2017-10-20

四川省科技支撑计划（2017NZ0038）；“十二五”农村领域国家科技计划课题（2015BAD12B04-2.3）

龚双燕（1994-），女，重庆开县人，在读硕士研究生，研究方向是动物传染病病原分子生物学.E-mail:gsymanas@163.com

朱 玲，女，教授，博士，研究方向为动物传染病病原分子生物学.E-mail:abtcxzw@126.com

（编辑：柳青）