牛羊活体采集O—P液的技术要点

文│杜平丽（河北省定州市农业局）

牛羊活体采集O—P液的技术要点

文│杜平丽（河北省定州市农业局）

在口蹄疫病原学检测工作中，牛、羊等反刍动物在发病前期、恢复期、无临床症状的可疑情况下，其食道—咽部位的分泌物即O—P液中口蹄疫病毒能够继续繁殖及存活，常被用于病原学检测。O—P液样品的采集、处理、保存、运送等技术环节是否严格把关，直接关系到样品质量、检验结果及结论的准确性和可靠性。

切实掌握O—P液的采集技术，是当前基层兽医工作者及实验室技术人员的一项基本技能。

一、前期准备要充分

1.器具。金属探杯（由采集杯、拉杆和把柄环组成）、灭菌广口瓶（或毫升大离心管）、采样箱、记号笔、标签、封口膜、一次性手套、口罩、标签纸、签字笔、冷藏箱、干冰/液氮、采样单等。

2.试剂。生理盐水、0.2%柠檬酸或2%氢氧化钠、磷酸盐缓冲液（0.04 摩尔/升、pH7.4）或细胞培养液（0.5%水解乳蛋白-Earle液）。

二、如何采集到高质量的样本

1.明确采样部位。O—P液主要收集被采动物食管开始部、咽喉壁、隐窝以及软腭表面的上皮细胞，口蹄疫病毒能够在这些部位存活和繁殖。

2.采样前准备工作。

（1）清洗器具。采样探杯在使用前需经0.2%柠檬酸或2%氢氧化钠溶液浸泡至少5分钟，再用与动物体温一致的自来水反复冲洗几次，以减少机体应激。为避免交叉感染，每采完一头动物，探杯就应重复进行消毒与冲洗。

（2）动物禁食。被检动物在采样前禁食(可饮水)12小时，以避免反刍胃内容物严重污染O—P液。

（3）做好采样人员的个人安全防护，提高防护意识。

3.采样技术。被采动物站立保定，头微上仰。操作人员洗手消毒，左手打开动物口腔，将开口器平伸进口腔，下压手柄竖立保持不动，另一手持采样探杯，沿开口器伸进动物口腔，达到咽部时轻轻抽送几下刺激动物吞咽，顺势动作轻缓地将消毒过的探杯伸到食道上部约15厘米处，前后稍微用力来回拉3～5次。最后，拉出探杯，确保杯中的咽部—食道刮取物不少于8毫升。

4.样品保存。将探杯涮洗几次，使O—P液样品全部放入等量的细胞培养液或磷酸盐缓冲液中，加盖密封后充分振荡摇匀，贴上标签。按体系文件中采样登记表要求，详细记录样品日期和编号等信息。

收集O—P液样品后，最好立即进行检测，如果不是立即检测，应该立即冷冻。如果运输时间较长，应当把样品放到干冰或者液氮中。冷冻前瓶口要求密封不漏气。特别注意，如果是干冰保存，若有二氧化碳进入瓶内会降低pH 值，由于口蹄疫病毒在酸性环境中很脆弱，很可能使口蹄疫病毒失活。在整个运输途中，避免样品解冻。

样品的正确采集及合理保存直接影响着检测结果和分析判定，不容忽视。

三、后期无害化处理工作

采样结束后，采样人员要进行消毒更衣，对采样中使用的器材及环境及时进行消毒，并对废弃物进行无害化处理，确保环境安全。