肝癌组织中长链非编码RNA CCAT2的表达变化及意义

刘义冰，石军梅，石帅

(河北医科大学第四医院，石家庄 050010)

肝癌组织中长链非编码RNA CCAT2的表达变化及意义

刘义冰，石军梅，石帅

(河北医科大学第四医院，石家庄 050010)

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)在肝癌(HCC)组织中的表达变化，并探讨其意义。方法收集100例份HCC患者的癌及癌旁组织，采用实时荧光定量PCR法检测癌及癌旁组织中CCAT2表达；分析癌组织中CCAT2表达与HCC患者临床病理特征间的关系；Kaplan-Meier法检测CCAT2表达与患者生存率间的关系。结果LncRNA CCAT2在HCC癌组织中的表达高于癌旁组织(Plt;0.05)；LncRNA CCAT2表达与HCC患者的TNM分期、肝内播散灶及血管侵袭密切相关(P均lt;0.05)，而与患者年龄、性别、肿瘤大小及肝硬化无关(P均gt;0.05)；Log Rank检验结果显示，CCAT2高表达与HCC患者不良预后呈正相关(χ2=6.481,P=0.011)。结论HCC癌组织中LncRNA CCAT2呈高表达，且与TNM分期、肝内播散、血管侵袭有关；检测LncRNA CCAT2在癌组织中的表达有助于病情判断。

肝癌；结肠癌相关转录物2；长链非编码RNA

肝癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，发病率呈逐年上升趋势，5年生存率较低[1]。据WHO统计，2012年中国新增HCC病例数和死亡病例数均占全球新增病例数和死亡病例数的50%以上[2]。近年来，长链非编码RNA(LncRNA)在生理及疾病过程中扮演的重要角色引起关注。LncRNA指长度超过200 bp的一类非编码RNA，在细胞分化、个体发育等多种生命活动过程中发挥作用。LncRNA是基因表达的重要调节因子，可在转录及转录后水平调节基因表达。LncRNA异常表达与人类多种肿瘤密切相关，如前列腺癌、膀胱癌、肾癌等，可通过多种机制参与调控肿瘤形成、侵袭转移等[2,3]。2016年10月～2017年5月，我们观察了肝癌组织中LncRNA CCAT2的表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 100例HCC患者的新鲜癌组织及癌旁组织(距离癌组织2 cm)来自我院2009年6月～2011年6月的手术切除标本，所有组织标本经HE染色明确病理诊断，组织标本均置于液氮中保存。患者男45例、女55例，年龄34～81(49.32±3.22)岁。临床分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期23例，Ⅲ期26例，Ⅳ期30例。肿瘤直径：lt;5 cm 42例，≥5 cm 58例。有肝硬化47例，无肝硬化53例。肝内播散灶阳性53例，阴性47例。血管侵袭阳性53例，阴性47例。纳入对象均未接受过放、化疗等。患者均有完整的病历资料，签署知情同意书，并经医院伦理委员会审核同意。100例HCC患者随访60个月，其中死亡病例61例。

1.2 肝癌及癌旁组织中LncRNA CCAT2表达检测 采用qRT-PCR法提取组织总RNA，逆转录得到cDNA后，用SYRB Green染料(Q111，南京诺唯赞生物科技有限公司)对CCAT2转录水平进行相对定量检测。qRT-PCR引物由上海英骏生物技术有限公司合成。在qRT-PCR仪(Light Cycler480，瑞士Roche公司)上进行实验，反应程序：95 ℃，10 min；95 ℃，30 s；60 ℃，1 min，共40个循环。采用2-ΔΔCt方法计算CCAT2相对表达量。在CCAT2表达的统计分析中，将HCC患者分为CCAT2低表达组(CCAT2表达水平低于中位数)和CCAT2高表达组(CCAT2表达水平高于或等于中位数)。

2 结果

2.1 LncRNA CCAT2在肝癌及癌旁组织中表达比较 与癌旁组织相比，CCAT2在87.00%的癌组织中表达升高(87/100)。LncRNA CCAT2在肝癌及癌旁组织中相对表达量分别为4.152±0.310、0.996±0.005，癌组织中CCAT2表达是癌旁组织的4.169倍，差异有统计学意义(Plt;0.05)。

2.2 LncRNA CCAT2表达与HCC患者临床病理特征的关系 CCAT2表达与HCC患者TNM分期、肝内播散灶及血管侵袭相关(P均lt;0.05)，而与患者年龄、性别、肿瘤大小及肝硬化无关(P均gt;0.05)，见表1。

表1 LncRNA CCAT2表达与HCC患者临床病理特征的关系[n(%)]

2.3 LncRNA CCAT2表达与HCC患者预后的关系 CCAT2低表达组50例，高表达组50例。CCAT2低表达组、高表达组的生存时间分数分别为(48.13±1.87)、(30.22±7.07)个月，Log Rank检验结果显示，CCAT2高表达与HCC患者不良预后呈正相关(χ2=6.481,P=0.011)。

3 讨论

HCC是一种发病率、病死率均较高的一类恶性肿瘤，具有恶性度高、易转移、复发及预后差等特点，因此深入研究HCC的发生发展机制对HCC的早期诊断和治疗尤其重要。CCAT2位于人类染色体8p7位置上，全长1 752 bp。研究发现，CCAT2在多种肿瘤中表达异常升高，发挥癌基因的功能，如乳腺癌、胃癌、结肠癌和肺胶质瘤等[4～6]。

ENCODE计划显示，人类基因组中能编码蛋白质的基因占整个人类基因组的比例不足2%，非编码RNA约占98%。本研究发现，CCAT2在HCC癌组织中的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义，提示CCAT2在HCC中可能亦发挥癌基因功能。进一步研究发现，CCAT2表达与HCC患者肿瘤分期、血管侵袭密切相关，提示CCAT2表达越高，HCC恶性程度越高，患者预后越差。通过查阅文献发现，CCAT2在不同肿瘤中似乎作用不完全一致。如Qiu等[7]发现CCAT2是肺癌特异性LncRNA，但与肺癌患者的性别、吸烟、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移不相关。Wang等[8]发现，胃癌中CCAT2高表达与淋巴结转移、远处转移和不良预后密切相关。Redis等[9]发现，CCAT2高表达可降低乳腺癌患者对5-FU的化疗敏感性，且CCAT2高表达与乳腺癌患者的淋巴结转移呈负相关，CCAT2表达越高，淋巴结转移越少。

研究发现，CCAT2在乳腺癌中高表达，可促进乳腺癌细胞的生长和转移[10]。胃癌中CCAT2高表达可促进胃癌细胞的增殖和侵袭，并与患者不良预后密切相关[11]。在胶质瘤中降低CCAT2表达可抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和EMT表型[12]。

LncRNA可通过丰富的机制参与调控肿瘤的形成、增殖和侵袭转移等。如与YB-1蛋白相互作用，促进HCC发生[2]。通过与LSD1和EZH2蛋白相互作用沉默p21和E钙黏蛋白，促进胃癌的增殖和转移[3]。本研究尚未探讨CCAT2在HCC中作用的具体机制。但有研究发现，CCAT2可以多种方式在肿瘤中发挥作用。如CCAT2高表达可通过增强WNT信号通路促进肿瘤细胞的增殖和转移能力[13]。结肠癌细胞中，CCAT2还可与TCF7L2相互作用，调节miR-17-5p、miR-20a 和MYC的表达[14]。到目前为止，HCC癌细胞中CCAT2促进肿瘤进展的具体作用机制尚不清楚，需后续进行更多的深入研究。

综上所述，HCC癌组织中LncRNA CCAT2呈高表达，且与TNM分期、肝内播散、血管侵袭相关；检测LncRNA CCAT2在癌组织中的表达有助于病情判断。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.41.017

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B

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河北省科技计划项目(162777264)。

2017-06-12)