口腔鳞状细胞癌组织中Twist、E-cadherin蛋白的表达变化及意义

王陈飞，冯桂娟，王继华，冯兴梅

(南通大学附属医院，江苏南通 226001)

口腔鳞状细胞癌组织中Twist、E-cadherin蛋白的表达变化及意义

王陈飞，冯桂娟，王继华，冯兴梅

(南通大学附属医院，江苏南通 226001)

目的观察口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中转录因子Twist及上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达变化，并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测65例OSCC组织、45例正常口腔黏膜组织中Twist和E-cadherin蛋白表达，分析Twist、E-cadherin表达与OSCC患者临床病理特征的关系，并采用Spearman等级相关分析法分析OSCC组织中Twist和E-cadherin表达的关系。结果Twist在OSCC组织和正常口腔黏膜组织中的阳性表达率分别为72.31%(47/65)、11.11%(5/45)，差异有统计学意义(Plt;0.05)；E-cadherin在OSCC组织和正常口腔黏膜组织中的阳性表达率分别为23.08%(15/65)、86.67%(39/45)，差异有统计学意义(Plt;0.05)。OSCC组织中，Twist和E-cadherin异常表达与患者淋巴结转移和肿瘤临床分期有关(P均lt;0.05)，与患者性别、年龄、组织分化程度、生长类型无关(P均gt;0.05)。OSCC组织中，Twist和E-cadherin表达呈负相关(r=-0.412,Plt;0.05)。结论OSCC癌组织中转录因子Twist表达上调，E-cadherin表达下调；二者在OSCC发生和恶性进展中发挥重要作用。

口腔鳞状细胞癌；转录因子Twist；上皮细胞钙黏蛋白

口腔鳞状细胞癌(OSCC)，恶性程度高，患者5年总生存率低于50%，预后较差，发病率呈逐年上升趋势[1]。侵袭转移是恶性肿瘤的主要致死原因，其中颈部淋巴结及远处脏器转移是导致OSCC患者不良预后甚至死亡的重要原因。近年来研究证实，上皮间质转化(EMT)过程与OSCC的肿瘤发生及恶性进展密切相关[2]。EMT是上皮细胞向间质细胞转变的复杂过程，E-cadherin在维持上皮细胞的完整性中发挥重要作用，E-cadherin表达丢失是诱发EMT的关键事件。E-cadherin与肿瘤侵袭迁移密切相关，其转录翻译受多种转录因子的调控，如ZEB-1、ZEB-2、Snail、SIP-1和Twist等[3]。Twist在多种上皮源性肿瘤中过表达，在肿瘤细胞凋亡和化疗耐药中发挥功能，此外，Twist能结合至E-cadherin启动子区的E-box元件，抑制启动子活性，导致E-cadherin转录表达下降，进而诱导EMT，增强肿瘤细胞侵袭转移能力[4]。目前关于Twist和E-cadherin在OSCC中的研究报道较少。2013年1月～2015年12月，我们采用免疫组化SP法检测Twist和E-cadherin蛋白在OSCC组织中的表达，探讨其与OSCC发生及恶性进展的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集本院2013年1月～2015年12月穿刺或切除经病理证实为OSCC的组织标本65例份，患者男34例、女31例，年龄gt;55岁42例，≤55岁23例。组织分化程度：低分化19例，中高分化46例；生长类型：外生型32例，浸润型33例；有淋巴结转移43例，无淋巴结转移22例；临床分期：Ⅰ+Ⅱ期25例，Ⅲ+Ⅳ期40例。另收集同期性别、年龄与之匹配的45例正常口腔黏膜组织作为对照，男23例、女22例，年龄20～60岁。本研究经患者知情同意并经医院伦理委员会批准。

1.2 Twist和E-cadherin蛋白表达检测 所有组织样本经10%甲醛固定，石蜡包埋，5 μm厚切片；二甲苯脱蜡，100%、95%、85%乙醇浸泡水化，98 ℃的枸橼酸钠溶液(0.01 mol/L，pH 6.0)中浸泡15 min进行抗原修复，滴加正常山羊血清室温封闭15 min，弃血清，分别滴加Twist和E-cadherin一抗工作液，37 ℃孵育2 h，PBS洗涤3次，每次5 min，滴加生物素二抗，室温孵育30 min，PBS洗涤3次，每次5 min，DAB显色，充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。以PBS替代一抗作阴性对照。每例标本均选择10个含有阳性细胞的高倍视野(×400)分别计数100个肿瘤细胞，取其平均值计算阳性细胞百分率。按阳性细胞百分率判定：无阳性细胞为0分；≤25%为1分；26%～50%为2分；gt;50%为3分。按染色程度判定：无阳性着色为0分；浅黄色为1分；深黄色为2分；棕黄色为3分。染色指数为阳性细胞百分率与染色强度之和：最小值0分，最大值6分。gt;3分为阳性；≤3分为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件。各组间样本率的比较采用χ2检验，两资料之间的相关性采用Spearman等级相关分析法。Plt;0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Twist和E-cadherin在癌及正常黏膜组织中的表达比较 Twist蛋白阳性表达主要定位于细胞质，Twist在OSCC组织和正常口腔黏膜组织中的阳性表达率分别为72.31%(47/65)、11.11%(5/45)，差异有统计学意义(Plt;0.05)。E-cadherin阳性表达主要定位于细胞膜，E-cadherin在OSCC组织和正常口腔黏膜组织中的阳性表达率分别为23.08%(15/65)、86.67%(39/45)，差异有统计学意义(Plt;0.05)。

2.2 Twist和E-cadherin表达与OSCC患者临床病理特征的关系 OSCC组织中Twist表达与患者性别、年龄、组织分化程度、生长类型无关(P均gt;0.05)，与淋巴结转移、临床分期有关(Plt;0.05)，见表1。E-cadherin表达与OSCC患者性别、年龄、组织分化程度、生长类型无关(P均gt;0.05)，与淋巴结转移、临床分期有关(P均lt;0.05)，见表1。

2.3 OSCC组织中Twist和E-cadherin表达的相关性 相关性分析结果显示，OSCC组织中Twist与E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.412,Plt;0.05)。

3 讨论

OSCC占口腔恶性肿瘤的90%以上，易发生局部淋巴结和远处脏器转移[5]。发病率逐年升高，且呈年轻化趋势[6]。研究证实，EMT在肿瘤细胞侵袭转移过程中起重要作用[7]。EMT的发生导致上皮细胞间极性被破坏，细胞形态改变，呈现出间质细胞特性[8]。E-cadherin是一种钙依赖性跨膜蛋白，参与维持细胞的完整性和极性，其表达丢失后导致细胞间的黏附力降低，侵袭能力增强[9]。肿瘤细胞侵袭性的增强是恶性肿瘤转移的重要条件，在EMT发生发展过程中起关键作用，E-cadherin表达丢失是EMT过程中最重要的特征性变化[10]。

本研究结果显示，E-cadherin蛋白在OSCC组织中的阳性表达率低于正常口腔黏膜组织，提示在OSCC组织中E-cadherin表达被抑制，Zhou等[11]研究证实，在OSCC组织中E-cadherin表达下降。此外，本研究结果发现，E-cadherin在临床分期较高OSCC患者癌组织中的阳性表达率较低，提示临床分期高者的细胞侵袭能力较强，可能更易发生侵袭转移。淋巴结转移OSCC患者癌组织中E-cadherin阳性表达率低于无淋巴结转移者，提示E-cadherin表达缺失的OSCC患者出现淋巴结转移的几率更高。

表1 Twist和E-cadherin表达与OSCC患者临床病理特征的关系

Twist蛋白是一种高度保守的转录因子，在胚胎发育、组织器官形成及分化过程中均占重要地位。Twist具有原癌基因功能，在多种肿瘤细胞中过表达，Twist通过识别E-cadherin启动子区的E-box基因序列，抑制E-cadherin基因转录翻译，进而诱导EMT的发生[12]。本研究结果发现，Twist在OSCC组织中的阳性表达率高于正常口腔黏膜组织，在临床分期较高(Ⅲ+Ⅳ期)OSCC患者癌组织中的阳性表达率较高，而且淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者，提示Twist在OSCC病情进展中发挥作用。

Twist负性调控E-cadherin基因表达，E-cadherin表达缺失又可诱导Twist基因表达，维持细胞呈现间质细胞特性。本研究发现，OSCC组织中Twist与E-cadherin表达呈负相关，与Wang 等[13]研究结果一致。

综上所述，OSCC癌组织中转录因子Twist表达上调，E-cadherin表达下调；二者在OSCC发生和恶性进展中发挥重要作用。

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ExpressionchangesofTwistandE-cadherininoralsquamouscellcarcinoma

WANGChenfei,FENGGuijuan,WANGJihua,FENGXingmei

(TheAffiliatedHospitalofNantongUniversity,Nantong226001,China)

ObjectiveTo explore the expression changes of the transcription factor Twist and the E-cadherin in the oral squamous cell carcinoma (OSCC) tissues and to investigate the clinical significance.MethodsThe immunohistochemical SP method was used to detect the expression levels of the Twist and E-cadherin in 65 cases of OSCC tissues and 45 cases of oral normal mucosa tissues. In addition, the relationship between the expression of Twist/E-cadherin and the clinicpathologic characteristics was analyzed, and the Spearman was used to explore the correlation between the Twist and E-cadherin in OSCC tissues.ResultsThe positive expression rates of Twist in the OSCC tissues and oral normal mucosa tissues were 72.31% (47/65) and 11.11% (5/45), respectively (Plt;0.05). The positive expression rates of E-cadherin in the OSCC tissues and oral normal mucosa tissues were 23.08% (19/65) and 86.67% (39/45), respectively (Plt;0.05). The Twist and E-cadherin expression levels in the OSCC tissues were related with the lymph node metastasis and the clinical stages (bothPlt;0.05), but were not related with the gender, age, differentiation degree and the type (allPgt;0.05). The expression of Twist and E-cadherin was negatively correlated in the OSCC tissues (r=-0.412,Plt;0.05).ConclusionsThe transcription factor Twist is up-regulated and E-cadherin is down-regulated, both of them play a critical role in the occurrence and malignant progression of OSCC.

oral squamous cell carcinoma; transcription factor Twist; E-cadherin

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.41.008

R739.8

A

1002-266X(2017)41-0028-03

江苏省卫生和计划生育委员会资助科研项目(H201678)。

王陈飞(1983-)，男，硕士研究生，主治医师，主要研究方向为口腔肿瘤。E-mail:gblw729@163.com

冯兴梅(1963-)，女，硕士研究生，主治医师，主要研究方向为口腔组织病理学。E-mail:1541985641@qq.com

2017-06-27)