布芍调脂胶囊对高脂血症大鼠脂质代谢的影响及其作用靶点研究

陈玉兴，李茹月，黄雪君，曾晓会，甘海宁

（1广东省中医药工程技术研究院／广东省中医药研究开发重点实验室，广东 广州510095；2广州中医药大学，广东 广州510405）

布芍调脂胶囊对高脂血症大鼠脂质代谢的影响及其作用靶点研究

陈玉兴1，李茹月2，黄雪君1，曾晓会1，甘海宁1

（1广东省中医药工程技术研究院／广东省中医药研究开发重点实验室，广东 广州510095；2广州中医药大学，广东 广州510405）

目的探讨布芍调脂胶囊对高脂血症大鼠脂质代谢的影响及其作用靶点。方法选取70只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、非诺贝特组、血脂康组以及布芍调脂胶囊高、中、低剂量组。除正常对照组外，其余各组采用高脂饲料制备高脂血症大鼠模型，连续8周，第5周开始灌胃给药，末次给药后1 h麻醉大鼠，采血并分离血清测定TC、TG、HDL－C、LDL－C、ApoA1、ApoB；取肝组织测定TC、TG水平及LCAT、LXR－α基因表达。结果与模型对照组比较，布芍调脂胶囊明显降低血清TC、TG、LDL－C、ApoB水平，升高HDL－C、ApoA1水平，提高ApoA1／ApoB比值，且能够降低肝脏TC、TG水平，促进肝脏LCAT、LXR－α基因表达 （P均<0.01）。结论布芍调脂胶囊对高脂血症大鼠脂质代谢有较好的调节作用。

布芍调脂胶囊；高脂血症；脂质代谢

高脂血症是诱发动脉粥样硬化的首要原因，与冠心病、脑血管病、肥胖、脂肪肝等的发生发展密切相关［1］，危害严重，目前临床首选西药降脂药，如他汀类药物、贝特类药物等，但临床长期服用常伴有不同程度的不良反应，患者依从性较差。中医药调血脂有一定疗效且安全性较高，从中医药中研究开发降脂新药尤为重要［2］。传统中医认为高脂血症基本病机为脾虚失运，肾精亏虚，肝失疏泄，痰瘀阻络［3］，布芍调脂胶囊药味组成包括布渣叶、莪术、赤芍和穿心莲，有消食化滞和活血祛瘀等多种作用，临床常用于治疗气滞血瘀型高脂血症，获得良好疗效。本实验主要研究布芍调脂胶囊对高脂血症大鼠的调血脂作用，为布芍调脂胶囊的临床使用提供科学的实验数据。

1 实验材料

1．1 实验动物 Sprague-Dawley（SD）大鼠70只，SPF级，广东省医学实验动物中心提供，实验动物的质量合格证号为NO0109400。

1．2 实验药物 布芍调脂胶囊 （广东省第二中医院制剂室产品，批号为120403）；非诺贝特胶囊 （法国利博福尼制药公司产品，批号为16965）；血脂康胶囊 （北京北大维信生物科技有限公司产品，批号为20111108）。

1．3 主要试剂 猪油 （市售猪板油临用现炼）；丙基硫氧嘧啶（广州康和药业有限公司产品，批号为20111219）；Cholesterin gepulvert， Art．3672 （ E．Merck， Darmstadt 产 品 ， 批 号 为448K4728672）；TC试剂盒、TG试剂盒 （上海科欣生物技术研究所产品，批号为 20120509、20120517）；HDL－C试剂盒、LDL－C试剂盒 （中生北控生物科技股份有限公司产品，批号为120441、120471）；LPL／HL测试盒 （南京建成生物工程研究所产品，批号为20120526）；ApoA1测定试剂盒、ApoB测定试剂盒 （上海荣盛生物药业有限公司产品，批号为20120418、20120522）； TRIzol、 M－MLV First Strand Kit、 Platinum SYBR Green qPCR SuperMix－UDG （美国Invitrogen公司产品，批号为14105、8212090、8212106）；特异性引物 （上海英潍捷基贸易有限公司产品）；异丙醇、氯仿和无水乙醇等均为国产产品。

1．4 仪器 BS224S电子天平 （购自德国 SARTORIUS公司）；JJ3000双杰牌电子秤 （购自G＆G公司）；HH－6数显恒温水浴锅 （购自金坛市富华仪器有限公司）；3K30离心机 （购自SIGMA公司）；UV－2501PC型紫外分光光度计 （购自日本SHIMADZU公司）；5424型小型高速离心机 （购自德国Eppendorf公司）；－80℃ 超低温冰箱 （购自美国 Thermo公司）；IQTM5型荧光定量PCR仪 （购自美国 Bio－Rad公司）；SmartSpec plus核酸蛋白测定仪 （购自美国 Bio－Rad公司）；Milli Q Plus超级纯水仪 （购自美国Millipore公司）。

2 实验方法

2．1 分组、造模及给药 将大鼠按体重随机分为7组各10只，雌雄各半，分笼饲养。分别为正常对照组、模型对照组、非诺贝特组 （49．5 mg 药粉 ／kg）、 血脂康组 （0．108 g 药粉 ／kg） 以及布芍调脂胶囊高、 中、 低剂量组 （5．76、 2．88、 1．44 g 生药／kg）。上午9时左右，正常对照组给予正常饲料，其余各组造模大鼠每笼给予定量高脂饲料［4］200 g／d（含 2%胆固醇、10%猪油、0．2%丙基硫氧嘧啶、87．8%基础饲料），下午5时左右换成正常饲料100 g，饮水自由，每天重复上述操作，连续8周。第4周末，各组大鼠禁食不禁水16 h，从其眼眶静脉丛采血约1 mL，离心分离血清，测定血清TC、TG水平作为大鼠给药前的血脂水平。从第5周开始，各给药组大鼠每天按剂量给予相应药物灌胃，正常对照组、模型对照组同法给予等量蒸馏水灌胃，每天1次，连续4周。给药期间，各组大鼠造模方法同前述。

2．2 指标测定 于第8周末末次给药前各组大鼠均禁食不禁水16 h，末次给药后1 h，大鼠眼眶静脉丛取血，离心分离血清按试剂盒说明书测定总胆固醇 （TC）、甘油三酯 （TG）、高密度脂蛋白胆固醇 （HDL－C）、低密度脂蛋白胆固醇 （LDL－C）、载脂蛋白AⅠ （ApoA1）、载脂蛋B （ApoB）。取肝脏小块，按试剂盒说明书测定肝脏TC、TG水平和卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶 （LCAT）、肝X受体 α（LXR－α）的基因表达。结果用SPSS 22．0 统计软件 One－Way ANOVA S－N－K 法分析处理。

3 结果

3．1 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血清TC、TG水平的影响 给药前，与正常对照组比较，各组造模大鼠的血清TC、TG水平均显著升高 （P＜0．01）。给药4周后，与模型对照组比较，布芍调脂胶囊高、中、低剂量组的TC、TG水平均显著降低（P ＜0．01）。 见表 1。

表1 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血清TC、TG水平的影响（n=10； ±s， mmol／L）

表1 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血清TC、TG水平的影响（n=10； ±s， mmol／L）

注：非诺贝特组、血脂康组、布芍调脂胶囊剂量单位分别为mg药粉 ／kg、 g 药粉 ／kg、 g 生药 ／kg。 与正常对照组比较， *P ＜0．01； 与模型对照组比较， ＃P ＜0．01。

组别 剂量 给药前 给药后TC TG TC TG高剂量组 5．76 7．813±0．984*2．798±0．308* 5．284±1．244＃ 1．556±0．299＃中剂量组 2．88 7．741±0．753*2．790±0．302* 5．792±1．446＃ 1．917±0．464＃低剂量组 1.44 7．959±1．034*2．750±0．311* 6．585±1．131＃ 2．162±0．772＃血脂康组 0．108 7．801±1．240*2．580±0．153* 5．812±2．120＃ 2．434±0．638＃非诺贝特组 49．5 7．647±0．901*2．631±0．430* 6．272±1．268＃ 1．484±0．457＃模型对照组 － 7．729±0．528*2．696±0．186* 8．084±0．538*3．247±0．639*正常对照组 － 1．920±0．197 0．888±0．111 1．886±0．190 0．975±0．134

3．2 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血清HDL－C、LDL－C水平的影响 给药4周后，与模型对照组比较，布芍调脂胶囊高、中、低剂量组的 HDL－C水平均显著升高 （P＜0．01），LDL－C 水平均明显下降 （P ＜0．01）。 见表 2。

表2 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血清HDL－C、LDL－C水平的影响 （n=10； ±s， mmol／L）

表2 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血清HDL－C、LDL－C水平的影响 （n=10； ±s， mmol／L）

注：各组剂量单位同表1。与正常对照组比较，*P＜0．01；与模型对照组比较， ＃P ＜0．01。

组别 剂量 HDL－C LDL－C高剂量组 5．76 1．766±0．308＃ 1．011±0．305＃中剂量组 2．88 1．699±0．625＃ 1．111±0．447＃低剂量组 1.44 1．545±0．270＃ 1．202±0．393＃血脂康组 0．108 1．674±0．451＃ 1．279±0．287＃非诺贝特组 49．5 1．324±0．327＃ 0．884±0．243＃模型对照组 － 0．895±0．217* 1．720±0．285*正常对照组 － 1．932±0．542 0．604±0．103

3．3 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血清ApoA1、ApoB水平的影响 给药4周后，与模型对照组比较，布芍调脂胶囊高、中剂量组的 ApoA1水平均明显升高 （P＜0．01），ApoB水平均显著降低 （P ＜0．01）， ApoA1／ApoB 比值均明显升高 （P ＜0．01）。 见表 3。

表3 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血清ApoA1、ApoB水平的影响 （n=10； ±s）

表3 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血清ApoA1、ApoB水平的影响 （n=10； ±s）

注：各组剂量单位同表1。与正常对照组比较，*P＜0．01；与模型对照组比较， ＃P ＜0．01。

ApoB （g／L） ApoA1／ApoB 1．295±0．337＃0．941±0．228＃0．668±0．319 0．880±0．265＃0．970±0．368＃0．363±0．092*正常对照组 － 0．240±0．035 0．110±0．026 2．305±0．665组别 剂量 ApoA1 （g／L）高剂量组 5．76 0．211±0．043＃0．173±0．060＃中剂量组 2．88 0．185±0．030＃低剂量组 1.44 0．155±0．030血脂康组 0．108 0．209±0．026＃非诺贝特组 49．5 0．179±0．029＃模型对照组 － 0．128±0．022*0．208±0．065＃0．262±0．087 0．260±0．089＃0．204±0．064＃0．360±0．057*

3．4 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠肝脏TC、TG水平的影响 给药4周后，与模型对照组比较，布芍调脂胶囊高、中、低剂量组的肝脏TC、TG水平均明显降低 （P＜0．01）。见表4。

表4 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠肝脏TC、TG水平的影响（n=10； ±s， mg／g）

表4 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠肝脏TC、TG水平的影响（n=10； ±s， mg／g）

注：各组剂量单位同表1。与正常对照组比较，*P＜0．01；与模型对照组比较， ＃P ＜0．01。

组别 剂量 肝脏TC 肝脏TG高剂量组 5．76 5．079±0．559＃ 3．942±0．397＃中剂量组 2．88 5．499±0．443＃ 4．173±0．538＃低剂量组 1.44 5．738±0．374＃ 4．306±0．312＃血脂康组 0．108 6．074±1．186＃ 5．111±0．514＃非诺贝特组 49．5 6．920±0．767＃ 4．319±0．704＃模型对照组 － 10．440±1．464* 5．922±0．541*正常对照组 － 4．055±0．276 1．673±0．249

3．5 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠肝脏LCAT、LXR－α基因表达的影响 给药4周后，与模型对照组比较，布芍调脂胶囊高、中、低剂量组大鼠肝脏LCAT、LXR－α基因相对表达量均显著升高 （P ＜0．01）。 见表 5。

表5 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠肝脏LCAT、LXR－α基因表达的影响 （n=10； ±s）

表5 布芍调脂胶囊对高脂血症模型大鼠肝脏LCAT、LXR－α基因表达的影响 （n=10； ±s）

注：各组剂量单位同表1。与正常对照组比较，*P＜0．01；与模型对照组比较， ＃P ＜0．01。

组别 剂量 LCAT基因相对表达量 LXR－α基因相对表达量高剂量组 5．76 1．138±0．395＃ 2．334±0．679＃中剂量组 2．88 0．955±0．321＃ 1．975±0．611＃低剂量组 1.44 0．654±0．200＃ 1．057±0．299＃血脂康组 0．108 0．818±0．232＃ 1．473±0．425＃非诺贝特组 49．5 0．868±0．264＃ 1．825±0．580＃模型对照组 － 0．322±0．089* 0．432±0．223*正常对照组 － 1．000±0．327 1．000±0．172

3 讨论

随着生活水平的不断提高，我国高脂血症患者数量也不断上升，现已达1．6亿左右。高脂血症主要依靠药物治疗，但我国2 136例高胆固醇血症患者的用药情况调查结果显示，通过药物控制血脂的达标率仅为26．5%，现阶段血脂异常的防范控制情况已非常严峻。高脂血症药物需要长期服用，临床反映西药的疗效较好，但长期服用会导致肝肾功能损害、肌溶解，还存在停药后血脂反跳现象，这些不良反应一直未能解决，这也是西药治疗高脂血症的难题。由于高脂血症病因机制复杂多变，还可诱发多器官、多靶点同时产生病变，与西药比较，中药多组分、多靶点、整体调节的特性会更加对应契合高脂血症的病因机制，开发中药治疗高脂血症具有广阔的应用前景。

布芍调脂胶囊为我院临床应用多年的制剂，由布渣叶、赤芍、莪术、穿心莲组成，方中用布渣叶消食化积为君药，莪术行气、活血通脉，赤芍散瘀、使血循畅达，共奏活血祛瘀、行气破血之功，同为臣药，配穿心莲，性寒味苦，入大肠、膀胱经，助主药以清利湿热，全方合用旨在消食化滞、活血祛瘀，临床用于治疗气滞血瘀型高脂血症可取得较好疗效。本实验结果也表明，布芍调脂胶囊可降低高脂血症大鼠的TC、TG、LDL－C水平，升高 HDL－C水平，降低肝脏 TG、TC水平，与临床应用情况基本一致。

研究［5］显示，HDL的主要作用是将肝外组织的胆固醇转运到肝脏中消除。ApoA1是HDL主要的载脂蛋白，是LCAT的必需激活剂，通过ApoA1实现HDL的逆向转运TC，增强脂质清除功能，加速TC的清除。LDL为主要的致动脉粥样硬化性脂蛋白，ApoB是LDL的载脂蛋白。ApoA1／ApoB反映机体调节脂质代谢的水平［6］。本实验结果表明，布芍调脂胶囊可降低血清ApoB，升高ApoA1，提高ApoA1／ApoB比值，说明布芍调脂胶囊可通过调节ApoA1和ApoB代谢而调节血脂。

肝脏是机体内重要的脂质合成和代谢场所，机体的脂质代谢转运还与多种脂蛋白、 酶类等密切相关。HDL代谢过程中的关键酶LCAT就存在于肝脏中，是脂代谢过程中的重要酶，能将一个脂肪酸从卵磷脂转移至新生HDL的FC中形成胆固醇脂 （CE），CE构成HDL3的中性脂质核心，LCAT进一步活化产生更多的CE进入HDL3核心，形成HDL2，在HDL2与富含TG的脂蛋白间，脂质转运蛋白进行胆固醇酯与TG的互换，此过程将实现胆固醇的逆向转运和血浆胆固醇的持续下降［7］。LXR－α为LXR亚型之一，能在肝脏中高表达，与氧化的胆固醇衍生物结合并激活，激活后LXR－α可增加ABCG5／G8的表达，促进胆固醇转化为胆汁酸排泄进入胆汁［8］。本实验结果显示，布芍调脂胶囊可明显提高LCAT、LXR－α基因表达量，从而促进机体脂质代谢转运，这可能是其降脂作用机制之一。

本研究初步探讨了布芍调脂胶囊对高脂血症大鼠脂质代谢的影响及其相关作用靶点，更深入的研究有待继续进行。

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Study on the Effect of Bushao Lipid Regulating Capsule on Lipid Metabolism and Its Related Targets in Hyperlipidemic Rats

CHEN Yuxing1,LI Ruyue2,HUANG Xuejun1,ZENG Xiaohui1,GAN Haining1
(1Guangdong Province Engineering Technology Research Institute of TCM/Guangdong Provincial Key Laboratory of Research and Development in Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 510095,China;2Guangzhou Universisty of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China)

ObjectiveTo explore the effect of Bushao lipid regulating capsule on lipid metabolism and its related targets in hyperlipidemic rats.Methods70 SD rats were selected and randomly divided into seven groups,including normal control group,model control group,fenofibrate group,Xuezhikang group and high-dose group,middle-dose group and low-dose group of Bushao regulating capsule.Excepting normal control group,the rat models with hyperlipidemia of each group were established by high fat diet for 8 weeks.Intragastric administration was given at the fifth week.Rats were anesthetized at 1 h after the last administration,and their blood was collected and separated for the detection of TC,TG,HDL-C,LDL-C,ApoA1 and ApoB levels.The TC and TG levels as well as the gene expression of LCAT and LXR-α were detected in hepatic tissue.ResultsCompared with the model control group,Bushao lipid regulating capsules significantly reduced the serum TC,TG,LDL-C and ApoB levels,improved the HDL-C and ApoA1 levels and ApoA1/ApoB ratio,reduced the hepatic TC and TG levels and promoted hepatic LCAT and LXR-α gene expression(all P ＜0.05).ConclusionsBushao lipid regulating capsule has a good regulatory effect on lipid metabolism of hyperlipidemic rats.

Bushao lipid regulating capsule;Hyperlipidemia;Lipid metabolism

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.11.1525

2017－06－08

2017-08-24

广东省科技计划项目 （项目编号：2013B060300034；2014A070705014； 2015A040404030）

陈玉兴 （1971－），男，海南籍，主任中药师，主要从事中药药理学研究工作，E-mail：cyx89333@qq.com。

（责任编辑：常海庆）