益智仁-乌药醚提取物对肾阳虚多尿模型大鼠血环磷酸腺苷和醛固酮水平的影响

朱 叶 谢毅强 尹德辉

(海南医学院第一附属医院，海南 海口 571199)

益智仁-乌药醚提取物对肾阳虚多尿模型大鼠血环磷酸腺苷和醛固酮水平的影响

朱 叶 谢毅强 尹德辉

(海南医学院第一附属医院，海南 海口 571199)

目的观察益智仁-乌药醚提取物对肾阳虚多尿模型大鼠的血环磷酸腺苷(cAMP)和醛固酮(ALD)水平的影响。方法应用腺嘌呤(250 mg/kg)造模，给予大鼠灌胃4 w，分别给予阳性对照药厄贝沙坦、益智仁-乌药醚提取物治疗4 w，观察益智仁-乌药醚提取物对大鼠cAMP和ALD的影响。结果与正常对照组比较，模型组大鼠血浆cAMP含量显著升高(Plt;0.01)，血清ALD含量明显降低(Plt;0.01)；益智仁-乌药醚提取物高剂量组血浆cAMP含量较模型组明显升高(Plt;0.05)，血清ALD含量较模型组明显升高(Plt;0.05)。结论益智仁-乌药醚提取物能够提高肾阳虚多尿模型大鼠血浆cAMP和血清ALD水平。

肾阳虚多尿模型；益智仁；乌药；环磷酸腺苷(cAMP)；醛固酮(ALD)

益智是海南四大南药之一，配伍乌药具有温补肾阳、温化肾气、减少尿量的作用，临床上常用于肾气虚寒的遗精、早泄、尿频、遗尿等症。课题组前期采用肾阳虚多尿大鼠模型已证明“益智-乌药”药对提取物具有缩尿作用，且其石油醚部位显示出较好的效果，优于其他部位〔1〕。本实验拟将益智仁-乌药醚提取物作用于肾阳虚多尿大鼠模型，探讨其对血浆环磷酸腺苷(cAMP)和血清醛固酮(ALD)水平的影响，研究益智配伍乌药补肾缩尿的作用机制。

1 材料与方法

1.1实验动物 健康SD大鼠，SPF级，不拘雌雄，体重180～220 g，长沙市天勤生物技术有限公司，许可证号：SCXK(湘)2009-0012。室内25℃，自由饮食水，适应性饲养1 w后，无不良反应即进入实验。

1.2试剂与仪器 益智和乌药购自海口市国瑞堂医药公司，经海南医学院药学院田建平副教授鉴定益智为姜科山姜属植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实；乌药是樟科植物乌药Lindera aggregate(Sims)Kosterm的干燥块根。

腺嘌呤(上海诺泰化工有限公司，生产批号20110312)；厄贝沙坦(安博维，赛诺菲杭州制药有限公司，批号：2A205)；离心机；AF240电子天平(中国瑞士梅勒公司)；酶标仪(上海闪普)；大鼠cAMP ELISA检测试剂盒(上海宝曼生物科技有限公司，产品编号：CK-E90861M)；大鼠ALD ELISA检测试剂盒(上海宝曼生物科技有限公司，产品编号：CK-E92888M)。

1.3动物造模及给药 造模参考文献〔2〕方法，SD大鼠48只随机分为正常对照组、模型组、去氨加压素(10 mg/kg)组、益智仁-乌药醚提取物高、中、低剂量(20、10、5 g·kg-1·d-1)组，每组8只。根据前期预实验〔1〕，益智乌药的提取物选择石油醚部位进行试验。除正常对照组以外，其余各组大鼠每天上午均给予腺嘌呤(250 mg/kg)灌服，连续4 w。从实验第3周开始，益智仁-乌药醚提取物高、中、低剂量组和去氨加压素组分别按1 ml/100 g连续灌胃给药干预4 w，正常对照组和模型组给予等量生理盐水。实验6 w后，各大鼠眼眶静脉取血，分别得血清和血浆。

1.4统计学处理 采用SPSS17.0软件行t检验。

2 结 果

2.1一般状态 正常对照组大鼠活泼好动，毛发光泽如初。模型组大鼠逐渐食量减少，体重减轻，畏寒蜷缩，毛发枯燥，多尿；与模型组比较，益智仁-乌药高剂量组和去氨加压素组的大鼠活动力较强，毛发较光泽，体重略有增加。

2.2益智仁-乌药醚提取物对肾阳虚大鼠血浆cAMP、血清ALD的影响 与正常对照组比较，肾阳虚多尿模型大鼠血浆cAMP含量显著升高血清ALD含量显著；与模型组比较，去氨加压素组与益智仁-乌药醚提取物高剂量组cAMP含量升高血清ALD含量升高(Plt;0.05)，见表1。

表1 益智仁-乌药醚提取物对肾阳虚多尿大鼠血浆cAMP及血清ALD水平的影响

与正常对照组比较：1)Plt;0.01；与模型组比较：2)Plt;0.05

3 讨 论

药对又称对药，是临床中药配伍中相对固定的两味药物的搭配形式，以协同增强疗效或相互纠正偏性、缓和毒性为目的，古有缩泉丸一方，即是乌药配益智仁加上山药，其中益智仁性温，味辛，具有暖肾固精缩尿、温脾止泻摄唾的功能，用于腹中冷痛，口多唾涎，肾虚遗尿，小便频数，遗精白浊等。益智仁的生物活性多样，神经保护作用、抗炎作用和抗老年痴呆作用是近年来的研究热点〔3〕；乌药性辛，温，具有行气止痛、温肾散寒的功效，现代药理学研究表明，乌药对免疫系统、消化系统、心血管系统、中枢神经系统以及抗病毒等方面具有广泛的药理活性〔4〕。二者配伍具有温肾祛寒，缩尿止遗的功效，用于治疗下元虚冷，小便频数等症，治疗效果显著〔5〕。

肾阳虚多尿大鼠模型是通过腺嘌呤对肾脏的直接毒性作用，出现类似肾阳虚的症候表现，模型表现符合中医肾阳虚典型证候，且造模成功后具有明显尿量增加，是比较公认动物模型〔6〕。实验所用的去氨加压素片(弥凝)为临床治疗遗尿、小便频数的常用药物，可以通过激活肾脏集合小管V2受体发挥抗利尿作用，疗效肯定，但其作用仅限于影响水的再吸收，下调尿量而起到止遗的作用，且价格昂贵，有一定的副作用〔7〕。cAMP在水通道蛋白(AQP)2调节及细胞膜的水渗透通透性方面起着重要的调节作用〔8〕。cAMP有助于磷酸化AQP2，从而增强其转运水的能力。ALD是调节机体水盐代谢的重要物质，促进机体保钠排钾，维持体液容量和渗透压的平衡，与多尿的产生关系密切，血中ALD水平升高时钠重吸收增多，排出减少，尿液减少〔9〕。本实验结果表明，益智仁-乌药醚提取物可以增加实验动物血中cAMP、ALD浓度，从而可增强其转运水的能力，水的重吸收增加，起到减少尿量的效果，推测其可能为益智配伍乌药补肾缩尿的分子机制。

1尹德辉，韦 祎，谢毅强，等.“益智-乌药”药对抗糖尿病肾病有效部位的筛选〔J〕.时珍国医国药，2015；26(3)：579-81.

2郑平东，朱燕俐，丁名城，等.腺嘌呤诱发“肾阳虚”动物模型的研制〔J〕.中国医药学报，1990；5(8)：228-33.

3陈 萍，王培培，焦泽沼，等.益智仁的化学成分及药理活性研究进展〔J〕.现代药物与临床，2013；28(4)：617-23.

4闫利利，王金芳，李秋月，等.乌药的化学成分研究〔J〕.中国药业，2013；22(2)：16-7.

5邓义卫，韦国麟.缩泉丸治疗遗尿症临床应用和实验研究概况〔J〕.黑龙江医药，2012；25(1)：129-32.

6彭 成.中医药动物实验方法学〔M〕.北京：人民卫生出版社，2008：287.

7唐 卓，卿国忠，刘玲玲，等.醋酸去氨加压素致抗利尿激素分泌不当综合征3例〔J〕.中国现代药物应用，2013；7(17)：154-6.

8Maurice DH，Palmer D，Tilley DG，etal.Cyclic nucleotide phosphodiesterase activity，expression，and targeting in cells of the cardiovascular system〔J〕.Mol Pharmacol，2003；64(3)：533-46.

9莫剑梅，刘唐威，黄荣杰，等.不同性别原发性醛固酮增多症的临床特点分析〔J〕.重庆医学，2013；42(4)：447-9.

〔2016-12-21修回〕

(编辑 李相军)

EffectoftheetherextractoftheYizhiren-WuyaoonCamp,ALDlevelsinpolyuriamodelofYang-deficiencyrats

ZHUYe,XIEYi-Qiang,YINDe-Hui.

HainanMedicalCollege,Haikou571199,Hainan,China

ObjectiveTo observe the influence of ether extract of the Yizhiren-Wuyao on the levels of cyclic adenosine monophosphate(cAMP)，aldosterone(ALD) in polyuria model of Yang-deficiency rats.MethodsThe model rats were induced by given adenine (250 mg/kg). After irrigation for 4 w, the levels of cAMP and ALD in the four groups were measured.ResultsCompared with those of normal control group, the cAMP level was significantly elevated, the ALD level was significantly decreased in model group(Plt;0.01); the levels of cAMP and ALD in Yizhiren-Wuyao high-dose group were significantly higher compared with those of model group(Plt;0.05).ConclusionsExtract of the Yizhiren-Wuyao could increase plasma cAMP and ALD levels in polyuria model of yang-deficiency rats.

Polyuria model of Yang-deficiency；Yizhiren；Obtusiloba； cAMP；ALD

R287

A

1005-9202(2017)22-5498-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.006

国家自然科学基金(81473618、81360586)

谢毅强(1972-)，男，教授，医学博士，主要从事中医药防治内分泌及代谢疾病的临床与实验研究。

朱 叶(1976-)，女，教授，医学博士，主要从事中医药防治内分泌疾病的临床与实验研究。