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藏药康定独活的生药学研究

2017-12-07郑立兰志琼艾青青高必兴邓晶晶卢先明

中药与临床 2017年6期
关键词:白亮香豆素康定

郑立,兰志琼,艾青青,高必兴,2,邓晶晶,卢先明

·品种品质·

藏药康定独活的生药学研究

郑立1,兰志琼1,艾青青1,高必兴1,2,邓晶晶1,卢先明1

目的:对藏区习用药材康定独活进行生药学鉴定研究。方法:对康定独活的性状特征、横切面与粉末显微鉴定特征、大类化学成分种类、总香豆素含量进行了研究,并以图文形式记录结果。结果:首次找出了康定独活药材的性状及显微鉴别特征,并确定该药材含有挥发油、香豆素类、有机酸、多糖,可能含有酚类和鞣质、皂苷;建立了康定独活总香豆素含量测定方法,并测定其总香豆素含量为1.53%。结论:本文为藏区习用药材康定独活的鉴别与应用提供了参考依据,并建立了康定独活总香豆素含量测定方法。

康定独活;性状特征;显微鉴别;成分分析;总香豆素

康定独活为伞形科独活属植物康定独活Heracleumsoulieide Boiss. Herb. 的干燥根。产于四川西部和西北部,生长于海拔2600-3500米的山坡上[1],资源丰富。据课题组前期于四川甘孜州、阿坝州等主产地调查发现,当地藏族人常将此种独活作为藏药“珠玛(噶)”药用。“珠玛”始载于《晶珠本草》,《晶珠本草》[2]云:珠玛杀虫,治溃疡,麻风,疥疮,止血。但迄今为止,国内外尚未见关于康定独活生药学方面的研究报道。本研究采用生药学方法对康定独活药材的性状及显微鉴别、成分及含量测定方面进行系统研究,为其鉴别及资源开发利用奠定扎实的基础,从生药学角度为藏医临床用药的安全性、有效性、稳定性提供一定的科学依据。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

CH20BIMF200显微镜(日本Olympus),描绘目镜(北京第三光学仪器厂),UV-1100型紫外-可见分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司),万分之一电子天平(德国Sartorius BP121s),十万分之一电子天平(德国Sartorius BP211D),紫外分光光度计(日本岛津UV-1600型),超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,KQ5200E型,功率200 W,频率40 KHZ),补骨脂素对照品(中国药品生物制品检定所,批号130739-201115,纯度99%)

1.2 材料

供实验的材料均为实地自采及购买,经成都中医药大学药学院卢先明教授鉴定为来源于伞形科独活属植物康定独活Heracleumsoulieide Boiss. Herb.的干燥根。具体见表1。

表1 康定独活药材样品产地

2 方法与结果

2.1 药材性状

采用性状鉴定法,观察并记录样品的外观性状特征,并以高清摄影技术记录其外观特征,结果见图1。

本品呈圆锥形,扭曲,直径约为1~5 cm,下部分偶有分支。表面棕黄色至棕褐色,具不规则的纵皱纹和横环纹,具有稀疏的细小皮孔及根痕。质坚硬,易折断,断面不平整,有一棕色环。皮部棕褐色,有棕褐色的油斑。木部白色,约占横切面的1/2,皮部与木部容易分离,露出光滑的木心。香气特异,味苦。

图1 康定独活药材图

2.2 横切面显微特征

对根进行切片制作,置显微镜下观察、描绘目镜观察并记录横切面显微特征。

根部横切圆形,最外层木栓细胞由4~9列扁平细胞组成,皮层狭窄,稀有油室,裂隙多见。韧皮部宽广,油室散在,直径11~72μm,周围分泌细胞5~9个,内含棕黄色分泌物。韧皮部射线及木射线由2~5列类长方形细胞组成。形成层成环。导管单个或2~3个聚集。直径约20~65μm。木质部内存在木纤维。无髓。见图2、图3。

图2 康定独活横切面简图

图3 康定独活横切面显微详图

2.3 粉末显微特征

通过光学显微镜观察,并运用显微成像系统记录康定独活药材的油室、淀粉粒、纤维、导管等纤维特征。

本品粉末黄色,淀粉粒多见,多单粒,偶见复粒,直径5~13μm。油室多破碎,可见油细胞。导管多螺纹,可见网纹,梯纹导管,直径13~69μm。纤维多个聚集,呈长梭状,胞壁厚,胞腔小,且胞腔呈分梭状,直径约15~35μm。木栓细胞类方形,椭圆形。见图4。

图4 康定独活粉末图

2.4 大类成分定性分析

2.4.1供试液的制备水供试液的制备:取药材粗粉约10g,置于具塞三角锥型瓶中,加水100 mL,冷浸24 h,滤过,取10 mL滤液为冷水提取液做氨基酸、多肽、蛋白质的检查。剩余药渣在60℃水浴锅上加热0.5 h,过滤,得热水提取液做糖、多糖、苷类、皂苷、鞣质、有机酸等检查。

乙醇供试液、酸水供试液的制备:取药材粗粉10g,加10倍量的95%乙醇,水浴锅加热回流1h,过滤,滤液分成两部分,一份为乙醇供试液做黄酮、蒽醌、酚、苷、香豆素、内酯、萜类、强心苷、甾体等检查;一份将乙醇液浓缩成膏状(至无醇味),加5%盐酸使溶解,过滤,得酸水供试液做生物碱检查。

石油醚供试液制备:取粗粉1g,置于具塞三角锥形瓶中,加石油醚10 mL,室温放置3h,过滤,滤液即为石油醚供试液做油脂、挥发油检查。

2.4.2 结果康定独活根含有挥发油、香豆素类、有机酸、多糖;可能含有2,6-二去氧糖的强心苷、酚类和鞣质、皂苷;不含氨基酸、多肽、蛋白质、生物碱类、蒽醌、黄酮类。具体方法及结果见表2。

表2 康定独活药材化学成分定性分析方法及结果

注:“-”表示无现象。“+”表示有现象。

2..5 总香豆素含量测定

2.5.1 对照品溶液的制备 精密称定补骨脂素对照品10.0 mg,置于50 mL的容量瓶中,加甲醇适量,超声使其溶解,放冷,用甲醇定容至刻度,摇匀,即得(每1 mL含补骨脂素0.19 mg)。

2.5.2 供试品溶液的制备 精密称定本品粉末0.5 g,置具塞锥形瓶中,加甲醇25 mL,静置24 h,回流90 min,放冷后,过滤至50 mL容量瓶中,残渣用甲醇洗涤两次,每次10 mL,用甲醇定容至50 mL,后取1 mL加入25 mL容量瓶中,用甲醇定容至25 mL;甲醇作为空白溶剂。以空白溶剂作为参比,于290 nm下测定吸光度,依标准曲线上读出供试品溶液中的补骨脂素的重量(μg),计算,即得。

2.5.3 测定波长的选择 参照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0401) ,在200~400 nm波长下分别对对照品溶液及供试品溶液进行扫描,结果显示,三种溶液均在290 nm左右有吸收峰,故将290 nm作为测定波长。

2.5.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL,分别置于50 mL的容量瓶中,甲醇定容至刻度,用甲醇作为空白溶剂。以空白溶剂作为参比,照紫外-可见分光光度法(附录ⅤA),于290 nm下测定吸光度,以浓度为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线。得出回归方程得出回归方程Y=0.0640X-0.0056,r=0.9986,补骨脂素在0~20 μg范围内,吸光度与浓度呈良好的线性关系。

2.5.5 精密度实验 精密量取对照品溶液1 mL置于50 mL容量瓶中,用甲醇作为空白溶剂。以空白溶剂作为参比,于290 nm下测定吸光度,连续测定6次,RSD为0.72%。

2.5.6 稳定性实验 精密称定药材粉末0.5 g,按供试品方法操作,于290 nm下测定吸光度,每15 min测定,测7次,共105 min。康定独活RSD为0.71%。

2.5.7 重复性试验 分别精密称定药材粉末0.5 g,平行六份,按样品制备方法操作,于290 nm下检视,康定独活RSD为1.07%。

2.5.8 加样回收实验 分别精密称定药材粉末0.1 g,分别加入补骨脂素贮备液适量,按供试品方法制备后,于290 nm下测定,计算总香豆素的回收率,结果:康定独活平均回收率为101.01%,RSD=1.45%。

2.5.9 样品测定 取各批康定独活0.5 g,精密称定,按供试品方法制备,计算总香豆素含量及其平均值,结果见表3。

表3 康定独活药材总香豆素含量

3.结果与讨论

3.1 经课题组前期实地调查发现,康定独活资源丰富,具有较大的开发潜力。但目前关于它的研究报道极少,亟待研究。

3.2 通过研究,首次找出了康定独活药材的性状特征及显微特征,为藏药“珠玛”类的鉴别奠定了扎实的基础。与白亮独活[5]相比,两者性状及显微特征有明显区别:☒康定独活根为圆锥形,下部分偶有分支;白亮独活根为圆柱形,下部分支。☒康定独活表面棕黄色至棕褐色;白亮独活表面灰棕色。☒康定独活木部白色,且木心光滑;白亮独活木部淡黄色,木部略朽蚀状。④康定独活皮层稀有油室,韧皮部油室散在;白亮独活皮层可见油室,韧皮部有类圆形油室排列成数轮。⑤康定独活粉末呈黄色,淀粉粒多见,多单粒,偶见复粒,纤维多个聚集;白亮独活粉末呈黄棕色。淀粉粒众多,类圆形,无脐点或偶呈点缝状,多单粒聚集成团,纤维单个或多个聚集。⑥康定独活木质部内存在木纤维,无髓。⑦白亮独活薄壁细胞多含淀粉粒。通过上述特征,可以从药材性状及显微特征上鉴别康定独活与白亮独活。

3.3 据《中华本草藏药卷》记载:珠噶类药材中白亮独活所含成分有挥发油、香豆素类、有机酸、萜类[1]。根据课题组前期研究,白亮独活所含成分中以香豆素类物质为主,且呋喃香豆素含量最多[3-4]。通过化学成分定性实验,确定康定独活药材含有挥发油、香豆素、有机酸、多糖,与白亮独活所含成分相似。同时,基于课题组前期关于白亮独活质量标准研究[5],首次建立了康定独活总香豆素含量测定方法,为进一步建立康定独活的质量标准奠定了扎实的基础。

3.4 研究结果表明:康定独活所测总香豆素平均含量为1.53%,白亮独活为3.49%[5]。可见,两种独活总香豆素含量差异甚大,提示我们白亮独活及康定独活药用价值的不同,具体有待进一步研究。

[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草.藏药卷[M].上海∶上海科学技术出版社. 2002∶ 139-140

[2] 帝玛尔•丹增彭措.晶珠本草(藏文)[M].北京∶ 北京民族出版社. 1986∶98

[3] 孙汉董,林中文,钮芳娣.伞形科中药的研究—Ⅶ.白亮独活根的化学成分(1)[J].云南植物研究.1984,01∶99-102.

[4] 林中文,陈一平,孙汉董,等.白亮独活的香豆素成分[J].云南植物研究.1993,15(3)∶313-314.

[5] 高必兴,兰志琼,邓晶晶,等.白亮独活(藏药珠噶)的质量标准研究[J]. 中药材,2015,38(05)∶962-965.

The pharmacognosy research of Tibetan medicine Kangting Duhuo

/ZHENG Li1, LAN Zhi-Qiong1,AI Qing-qing1,GAO Bi-Xing1,2, DENG Jing-Jin1, LU Xian-Ming1//(1.School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan;2.Sichuan Institute for Food and Drug Control,Chengdu 611730,Sichuan)

Objective:To study the pharmacognostic features of Tibetan conventional medicine Kangting Duhuo.Method:The morphological features, powder and original plant transverse section of microscopic identification, types of chemical species,total coumarin content were researched, and the results were recorded in graphic-text form.Result:The properties and microscopic identification features of KangtingDuhuo was found for the first time. Volatile oil, coumarin, organic acids, polysaccharides were contained. Phenols, tannins and saponins may exist in the herb. The determination method of total coumarin contentin Kangting Duhuo was established, and its total coumarin content was 1.53%.Conclusion:The article provides reference for the identification,development and utilization of KangtingDuhuo. And the determination method of the total coumarin content in Kangting Duhuo is also established.

Kangting Duhuo; morphological characteristics; microscopic identification; component analysis; total coumarin

R 282

A

1674-926X(2017)06-005-04

四川省藏药标准的制定(301-377);中药饮片调剂包装贮藏养护技术研究-成都中医药大学中药基础基地科研训练及科研能力提高项目子课题(J1310034-07)

1.成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地,四川 成都 611137;2.四川省食品药品检验检测院四川,成都 611730

郑立(1995-),女(汉族),在读本科生,主要研究方向为中药品种质量与资源开发Tel∶18408210842 Email∶1095148157@qq.com

兰志琼(1979-),女(汉族),博士,副教授,硕士生导师,第四批四川省中医药管理局学术带头后备人选,主要从事中药品种质量与资源开发的教学、科研工作Tel∶028-61800231 Email∶lanlan1979512@126.com

2016-12-28

(责任编辑:胡慧玲)

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