黑木耳多糖降血脂作用的小鼠实验分析

刘荣，赵影，栾淑莹，王振宇

（1.东北林业大学林学院，黑龙江哈尔滨150040；2.哈尔滨工业大学食品科学与工程学院，黑龙江哈尔滨150090）

黑木耳多糖降血脂作用的小鼠实验分析

刘荣1，赵影1，栾淑莹1，王振宇2，*

（1.东北林业大学林学院，黑龙江哈尔滨150040；2.哈尔滨工业大学食品科学与工程学院，黑龙江哈尔滨150090）

采用不同剂量的两种黑木耳酸性多糖（Auricularia Polysaccharide，AP）对高脂模型小鼠进行灌胃，研究黑木耳多糖对高脂模型小鼠脂肪指数及相关酶类影响并初步探究黑木耳酸性多糖的降血脂作用。结果表明，两种黑木耳多糖均可增加小鼠粪便中的胆酸盐含量、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（lecithin-cholesterolacyltransferase，LCAT）含量（p<0.05）以及激素敏感性脂肪酶（hormone-sensitive triglayceride lipase，HSL）含量（p<0.05）；降低小鼠脂肪指数、HMG-CoA还原酶（Hydroxy methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor，HMGR）含量以及胰岛素（insulin，INS）活性；且碱提除蛋白多糖组（JC组）的效果优于碱提不除蛋白组（J组）。说明两种黑木耳多糖可通过调节相关酶的活性，达到降血脂的效果，且JC组的效果更好。

黑木耳多糖；高血脂症；降血脂

随着现代生活水平的提高，人们的饮食结构和生活习惯也在发生改变，高血脂症的发生率不断增加[1]。高血脂的临床主要表现为患者体内的血浆血脂含量明显高于正常水平[2]，是一种对人体危害极大的心血管系统疾病。据统计，在我国15岁～69岁做过血脂检查的人群中，高血脂症者占40%[3]。因此，本病的防治日益受到医学界的广泛重视，研制有调节血脂作用的保健食品对人类健康有重要意义[4-5]。加速体内脂类分解代谢，减少其合成及沉积，可有效降低体内血脂水平。其中增加卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）、脂蛋白酯酶（Lipoprotein Esterase，LPL）以及高密度脂蛋白含量是一种有效的方法。

黑木耳多糖是一种重要的生物活性成分。许多研究显示，黑木耳多糖具有降血压、抗氧化、抗炎、降血糖、抗凝血、降血脂等生物活性[6-8]。本研究选用小鼠为实验对象，通过两种黑木耳多糖灌胃干预，研究两种黑木耳多糖对高脂膳食小鼠卵磷脂胆固醇酰基转移酶、HMG-CoA还原酶、激素敏感性脂肪酶、胰岛素以及粪便中胆酸盐含量的影响，旨在研究两种黑木耳多糖对高血脂症的预防作用并对两种黑木耳多糖的降血脂效果进行比较。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明种雄性小鼠128只，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（黑）2013-004，体重（20±4）g。小鼠按清洁级动物饲养，自由进食，饮用洁净水，保持实验室环境卫生，温度18℃～20℃，相对湿度50%～60%，分笼喂养，适应性喂养1周后开始实验。

1.2 药品、仪器及试剂

黑木耳多糖（AP，碱提不除蛋白简写为J，多糖含量为704.59 mg/g；碱提除蛋白多糖简写为JC，多糖含量为758.13 mg/g）：东北林业大学食品科学与工程学科提供；生理盐水、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）、HMG-CoA还原酶（HMGR）、激素敏感性脂肪酶（HSL）、胰岛素（INS）试剂盒、硫酸溶液（取水65 mL，加浓硫酸50 mL，摇匀，即得浓度为8 mol/L的硫酸溶液）：南京建成生物工程所；胆酸标准品：中国药品生物制品检定所。

YP20001N电子天平：上海精天电子仪器厂；TDL-5台式离心机：上海科兴仪器；RT6000酶标仪：北京维欣仪奥科技；T6紫外可见分光光度计：北京普析通用。

1.3 测定指标及方法

1.3.1 动物分组及给药设计

雄性小鼠128只（22±2）g，适应性喂养1周后，随机分成8组，喂养饲料以及灌胃受试物的剂量如下：空白对照组（CN）：基础饲料+生理盐水；高脂对照组（HFD）：高脂饲料+生理盐水；J低剂量组（J-1）：高脂饲料+受试物J溶液（25 mg/（kg·bw·d））；J中剂量组（J-2）：高脂饲料+受试物J溶液（50 mg/（kg·bw·d））；J高剂量组（J-3）：高脂饲料+受试物J溶液（100 mg/（kg·bw·d））；JC 低剂量组（JC-1）：高脂饲料+受试物 JC 溶液（25 mg/（kg·bw·d））；JC中剂量组（JC-2）：高脂饲料+受试物JC溶液（50 mg/（kg·bw·d））；JC高剂量组（JC-3）：高脂饲料+受试物JC溶液（100 mg/（kg·bw·d））。每日按0.1 mL/（10 g）·bw的剂量进行灌胃，自由摄食和饮水，每周测定体重，确定灌胃量。

1.3.2 粪便中胆酸盐含量测定

每10天测定一次小鼠粪便中胆酸盐含量，方法为紫外分光光度计法[9]。

1.3.3 LCAT、HMGR、HSL、INS 以及脂肪指数测定

按实验要求喂养8周后，每组处死8只，最后一次灌胃的前一天晚上禁止小鼠进食，16 h后眼眶取血，血样于4℃，3 000 r/min，离心15 min，分离血清后测定瘦素（LEP）含量。取适量的肝组织，以重量：体积=1∶9（mg/mL）加预冷的生理盐水，放入组织匀浆器中研磨均匀，离心后取上清液转，现制现用。测定LCAT、HMGCoA还原酶、HSL、胰岛素及脂肪指数等各项指标值，测定方法按照试剂盒说明书测定。将剩下的小鼠接着按1.3.1方法喂养，喂至第12周，按1.3.3方法处理。

1.4 数据统计分析

用Excel软件将数据处理后以±标准差表示，采用SPSS 17.0软件进行统计分析，p＜0.05或p＜0.01表示具有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 粪便中胆酸盐的含量

粪便中胆酸盐的含量见表1。

表1 粪便中胆酸盐的含量Table 1 The content of cholate in faeces

至试验结束时，显示各组小鼠体毛色泽均无变化。表1显示，纵向比较来看，JC组调节体内胆固醇效果要优于J组；横向比较来看，随着黑木耳多糖灌胃的时间越久，小鼠粪便中胆酸盐含量排出越多，说明黑木耳多糖在调节体内胆固醇代谢含量方面效果显著。

2.2 黑木耳多糖对小鼠脂肪指数的影响

黑木耳多糖对小鼠脂肪指数的影响见表2。

表2 黑木耳多糖对小鼠脂肪指数的影响Table 2 Effect of AP on fat of the mice

表2显示，体内脂肪方面，纵向比较来看，第8周，灌胃组的平均值均低于HFD组，但差异不显著；第12周，JC组和J-3组的脂肪指数显著低于HFD组（p<0.05或p<0.01），且JC组在降低脂肪指数方面效果优于J组；横向比较来看，第12周脂肪指数低于第8周，说明持续灌胃黑木耳多糖能有效控制小鼠脂肪的增加。

2.3 黑木耳多糖对小鼠LCAT含量的影响

黑木耳多糖对小鼠LCAT含量的影响见表3。

表3 黑木耳多糖对小鼠LCAT含量的影响Table 3 Effect of AP on LCAT in liver of the mice

表3显示，对LCAT含量的影响方面，纵向比较来看，第8周时，J和JC组的中、高剂量组均极显著高于HFD组（p<0.01），第12周时，各灌胃组均极显著高于HFD组（p<0.01），且JC组的效果要优于J组。横向比较来看，第12周LCAT含量比第8周有所升高，说明黑木耳多糖持续干预可显著提高LCAT含量，从而达到降血脂效果。

2.4 黑木耳多糖对小鼠HMGR含量的影响

黑木耳多糖对小鼠HMGR含量的影响见表4。

表4 黑木耳多糖对小鼠HMGR含量的影响Table 4 Effect of AP on HMGR in liver of the mice

表4显示，在HMGR方面，纵向比较来看，第8周时，除J-1组外，其余灌胃组的HMGR含量均显著低于HFD组（p<0.01或p<0.05）；第12周时，各灌胃组HMGR含量均极显著低于HFD组（p<0.01）。横向比较来看，第8周时受试物已经起到显著的降低HMGR的含量，至第12周持续用受试物干预，HMGR含量继续降低，说明黑木耳多糖在降低HMGR的含量方面效果显著，JC组效果优于J组。

2.5 黑木耳多糖对小鼠HSL含量的影响

黑木耳多糖对小鼠HSL含量的影响见表5。

表5 黑木耳多糖对小鼠HSL含量的影响Table 5 Effect of AP on HSLin liver of the mice

表5显示，纵向比较来看，第8周和第12周时，各灌胃组HSL含量均极显著高于HFD组（p<0.01），说明在第8周时黑木耳多糖已经起到了升高HSL含量的作用。横向来看，第8周时各试验组激素敏感性脂肪酶（HSL）含量增加最显著，说明黑木耳多糖可以升高小鼠激素敏感性脂肪酶（HSL）含量；实验至第12周时，激素敏感性脂肪酶（HSL）含量有所下降，说明在第8周时黑木耳多糖在调节体内HSL含量方面达到最优效果且JC组效果要优于J组。

2.6 黑木耳多糖对小鼠INS含量的影响

黑木耳多糖对小鼠INS含量的影响见表6。

表6 黑木耳多糖对小鼠INS含量的影响Table 6 Effect of AP on INS of the mice

表6显示，对血清中胰岛素（INS）含量的影响方面，纵向比较来看，第8周时，各组胰岛素含量均在CN组和HFD组之间；第12周时，各灌胃组的INS含量均极显著低于HFD组（p<0.01）且JC组效果优于J组。横向来看，第8周与第12周胰岛素含量相差不大，说明黑木耳多糖在调节胰岛素含量上8周时已达到较优效果。

3 结论

体内胆固醇降解的主要途径是通过胆管系统将胆汁酸排出体外[10]，因此可以通过测定游离胆酸盐的含量间接得出胆固醇减少的量，进而表明降血脂的作用效果[11]。实验表明，两种黑木耳多糖均能有效的增加小鼠粪便中胆酸盐的含量、促进体内胆固醇的降解，达到降血脂效果，且JC组效果优于J组。

LCAT是血浆脂蛋白中催化游离胆固醇酯化的关键酶，在高密度脂蛋白代谢和胆固醇逆转运中起着重要作用[12-13]。高脂膳食诱导小鼠时，LCAT含量显著降低，实验结果表明，在用黑木耳多糖持续干预后，LCAT含量大大增加，这与苏徳奇[14]和李孟婕[15]等研究结果一致。说明黑木耳多糖可增加LCAT的含量且JC组效果优于J组。

HMGR是脂代谢中的关键限速酶，要想减少内源性胆固醇，那么就应该降低HMGR的活性[16]，阻断胆固醇的生物合成，使血液中总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇含量下降[17]。在实验周期内，灌胃组小鼠HMGR的含量持续降低，说明黑木耳多糖在降低HMGR的含量方面效果显著，JC组效果优于J组。

HSL是可以加快脂肪中的甘油三酯水解的速度，它可以水解很多脂质，对于降低体脂含量具有重要影响[18]。实验结果表明，黑木耳多糖可显著增加小鼠HSL含量，在第8周时达到最优效果且JC组效果优于J组。

胰岛素是一种激素，它可以增强脂肪细胞对血液中脂肪酸的摄取和合成脂肪的能力，同时，又能抑制体内脂肪的分解，促进极低密度脂蛋白（Very lowdensity lipoproteins，VLDL）、低密度脂蛋白（Lowdensity lipoproteins，LDL）的合成[19]。实验结果表明，黑木耳多糖有效的降低了高脂膳食小鼠体内胰岛素含量，在第8周时达到最优效果且JC组效果优于J组。

综上，黑木耳降脂多糖可增加LCAT的含量，促进组织、细胞内胆固醇的清除，维持细胞内胆固醇的稳态，同时抑制了HMG-CoA还原酶的合成，减少了胆固醇的内源性合成，因而降低了血清胆固醇水平。黑木耳降脂多糖还可通过增强HSL酶活性加速脂肪分解，降低血液胰岛素水平抑制脂肪的合成，从而降低甘油三酯水平，达到降血脂的效果，同时JC组的降血脂效果要优于J组。

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The Blood Lipids-lowering Effects of Auricularia Polysaccharide on the Hyperlipidemia Mice

LIU Rong1，ZHAO Ying1，LUAN Shu-ying1，WANG Zhen-yu2，*
（1.School of Forestry，Northeast Forestry University，Harbin 150040，Heilongjiang，China；2.School of Food Science and Engineering，Harbin Institute of Technology，Harbin 150090，Heilongjiang，China）

To explore the lipid-lowering effect of polysaccharides from Auricularia auricula in hyperlipidemia mice，two kinds of polysaccharides from Auricularia was extracted at different doses，intragastrically given to hyperlipidemic model mice to explore their effects on fat index and related enzymes.Text results showed that two kinds of AP both could increase the content of cholate in faeces，the content of lecithin cholesterol acyltrans ferase（LCAT）and the content of hormone sensitive lipase（HSL）in the mice，the effect was significant（p<0.05）.They could decreased the fat index，the content of HMGR and the activity of Insulin（INS）obviously，too.the effect was significant（p<0.05）.Group JC was better than group J.The result showed that two kinds of AP could significantly reduce blood lipid levels by agenting the activity of related enzymes，the effect of JC group was better.

Auricularia polysaccharide；hyperlipidemia；blood lipids reduction

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.034

黑龙江省林业科学院2014年度科学试验研究实施计划（GA13B202）

刘荣（1971—），女（汉），副研究员，博士，研究方向：功能食品。

*通信作者

2017-03-10