蓝莓酒肝清胶囊的制备工艺研究

郭诗琦，南敏伦，赫玉芳，郜玉钢，赵岩，张连学，何忠梅，*

（1.吉林农业大学中药材学院，吉林长春130118；2.吉林省人参工程技术创新中心，吉林长春130118；3.吉林省中医药科学院，吉林长春130012）

蓝莓酒肝清胶囊的制备工艺研究

郭诗琦1，2，南敏伦3，赫玉芳3，郜玉钢1，2，赵岩1，2，张连学1，2，何忠梅1，2，*

（1.吉林农业大学中药材学院，吉林长春130118；2.吉林省人参工程技术创新中心，吉林长春130118；3.吉林省中医药科学院，吉林长春130012）

确定蓝莓酒肝清胶囊的最佳制备工艺。采用L9（34）正交设计法进行试验，以指标成分含量及提取率为考察指标，利用综合评分法对数据进行分析，优选最佳提取工艺。考察粉末的流动性，辅料用量，测定胶囊的水分和装量差异；醇提最佳工艺为70%乙醇，料液比1∶15（g/mL），回流提取2次，每次3 h。水提最佳工艺为料液比1∶15（g/mL），水煎提取3次，每次3 h。最佳成型工艺为可溶性淀粉与干浸膏粉末按质量比1∶1混匀，制得的填充粉末流动性好，吸湿性较小；蓝莓酒肝清胶囊的制备工艺切实可行。

蓝莓胶囊；制备工艺；正交设计；指标成分；辅料

酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）是由于长期大量饮酒导致的一系列肝脏疾病，是我国目前继病毒性肝炎之后的第二大肝脏疾患，严重危害人民健康。酒精性肝损伤分为急性酒精性肝损伤和慢性酒精性肝损伤。急性酒精性肝损伤是由于一次摄入过量酒精而造成肝功能损害，表现为食欲不振、恶心、肝部不适、黄疸等类急性肝炎症状。慢性酒精性肝损伤是由于长期摄入酒精而导致肝细胞纤维化变性、坏死，肝脏免疫功能遭到破坏，常表现为酒精性脂肪肝、酒精性肝炎以及酒精性肝硬化[1-5]。中医认为酒为有热有毒之品，过饮之必伤及脾胃肝胆而引发疾病。《本草纲目》中曰：“少饮则和气血，多饮则杀人顷刻。”《诸病源候论》也认为：“酒精有毒，有复大热，饮之过多，故毒热气渗溢经络，浸溢脏腑，而生诸病也。”酒精性肝损伤的形成是因为饮酒过度则导致脾胃损伤，湿热内生，脾失健运，痰湿阻滞，气机不畅，气血不和而致[6-7]。

蓝莓酒肝清胶囊是在传统中医理论基础上，结合现代中药有效物质基础研究成果，以吉林省特产蓝莓为主要原料，与积雪草、栀子、白芍、丹参、姜黄等具有显著保肝作用的药食同源传统中药组方，自主研发的高端保健食品。本研究优选蓝莓酒肝清胶囊的制备工艺，并研究了其抗酒精性肝损伤的作用，为蓝莓酒肝清胶囊的进一步开发和应用提供了试验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

1.2 材料与试剂

蓝莓、栀子、姜黄、丹参、积雪草、白芍：吉林省百草大药房；标准品栀子苷（纯度≥98%，批号：B21661）、芍药苷（纯度≥98%，批号：B21148）：上海源叶生物科技有限公司；北京二锅头：北京双庆和酒业有限责任公司；联苯双酯片：江苏鹏鳐药业有限公司；0号胶囊壳：上海源叶生物科技有限公司；乙腈、甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为娃哈哈纯净水。

2 方法

2.1 提取工艺研究

蓝莓酒肝清胶囊组方为：蓝莓80 g，栀子150 g，姜黄100 g，丹参80 g，积雪草250 g，白芍100 g。本研究首先对其进行提取工艺研究，其中蓝莓、栀子、姜黄、丹参采用乙醇回流提取，在单因素试验基础上，选用乙醇浓度、料液比、提取时间及提取次数4个因素，采用L9（34）正交试验表进行正交试验，高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）测定提取物栀子苷含量，以栀子苷含量及提取率为指标，优选最佳醇提工艺。剩处方中的积雪草、白芍采用水煎煮提取，在单因素试验基础上，选用料液比、煎煮时间及煎煮次数3个因素，采用L9（34）正交试验表进行正交试验，HPLC法测定提取物芍药苷含量，以芍药苷及提取率为指标，优选最佳水提工艺[8]。

2.2 干粉流动性考察

采用固定圆锥底法测定休止角：将两只玻璃漏斗交错重叠固定在铁架台上，使一个漏斗的低端与另一个漏斗的内侧接触，漏斗下放一个倒置的表面皿，测其外直径（cm），漏斗出口与表面皿距离4 cm～6 cm之间，测定时使粉体缓慢通过上层漏斗，经下层漏斗的缓冲慢慢堆积到表面皿上，形成锥体，直至最高，测锥体高度H（cm），按下列公式计算，休止角=arctanH/R，式中：R为表面皿半径，cm；H为锥体高度，cm[9]。

2.3 辅料用量考察

本品为干浸膏粉末，流动性不好，需在细粉中加入适量辅料来改善药粉的流动性，以保证装量更准确。可溶性淀粉为轻质的白色粉末，无臭无味，不溶于冷水，溶于沸水，有较强的溶解性和崩解度，在制备胶囊剂时用作填充剂，吸附力强，流动性好，稳定性高，会使药物更易装入胶囊中。将可溶性淀粉与浸膏干粉按不同比例混匀，同2.2方法测定提取物混合细粉的休止角，比较流动性差异，确定辅料用量[9]。

2.4 水分测定

按照《中国药典》2010版水分测定法（附录IX H），第一法（烘干法）进行测定。水分测定法（烘干法）：取供试品2 g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5 mm；疏松供试品不超过10 mm；精密称定，打开瓶盖在100℃～105℃干燥5 h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30 min，精密称定，再在上述温度干燥1 h，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）[9]。

2.5 装量差异测定

按照《中国药典》2010版（附录I），除另有规定外，取供试品10粒，分别精密称定重量，倾出内容物（不得损失囊壳），硬胶囊囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净；软胶囊或内容物为半固体或液体的硬胶囊囊壳用乙醚等易挥发性溶剂洗净，置通风处使溶剂挥尽，再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量。每粒装量与标示装量相比较（无标示装量的胶囊剂，与平均装量比较），装量差异限度应在标示装量（或平均装量）的±10%以内，超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍[9]。

3 结果与分析

3.1 正交优化乙醇提取工艺

3.1.1 因素水平的确定

根据单因素考察得到的最佳提取工艺，选择乙醇浓度、料液比、回流时间、提取次数4项作为考察因素，每个因素3个水平，见表1。

首先，商业周期对现金支付可能性的影响可以用股票平均收益率来解释，股票市场的平均收益率越高，目标公司越有可能同意股票支付的支付方式。其次，股权集中度会增加现金支付的可能性，也就是说管理层持股比例的高低会影响到支付方式的选择。原因是并购公司管理层为了保持收购后对公司的控制权，不愿意采用换股方式并购，而倾向于选择现金支付方式。最后，成长性的公司倾向于使用非现金的支付手段完成并购，因为这些公司需要现金流投入新的项目，以获得更大的收益，而且这些公司的股票存在较大的升值空间，所以公司更倾向于用股票等非现金支付方式。

表1 试验因素水平表Table 1 Factors and levels

3.1.2 正交试验结果

正交试验结果表见表2。

表2 正交试验结果表Table 2 Results of orthogonal experiment

由表2可知，以综合评分为标准，在所选的因素水平范围内，各因素作用顺序为D>A>B>C，最佳组合为：D2A2B3C3，即 70%乙醇，料液比 1∶15（g/mL），提取 2 次，每次3 h。

3.1.3 醇提工艺验证

为考察正交试验优选方案D2A2B3C3重现性，按方案D2A2B3C3的工艺条件进行3组重复试验（材料量同正交试验），试验结果见表3。

结果表明方案D2A2B3C3重现性较好，说明此提取工艺条件稳定可行。

3.2 正交优化水煎提取工艺

3.2.1 因素水平的确定

根据单因素考察得到的最佳提取工艺，料液比、煎煮时间、煎煮次数3项作为考察因素，每个因素3个水平，见表4。

表3 醇提工艺验证试验Table 3 Results of the test for optimized condition with alcohol extraction

表4 试验因素水平表Table 4 Factors and levels

3.2.2 正交试验结果

正交试验结果表见表5。

表5 正交试验结果表Table 5 Results of orthogonal experiment

由表5可知，以综合评分为标准，在所选的因素水平范围内，各因素作用顺序为C次数>B时间>A料液比，最佳组合为：C3B3A2，即料液比 1 ∶15（g/mL），提取3次，每次3 h。

3.2.3 水煎提取工艺验证

为考察正交试验优选方案C3B3A2重现性，按方案C3B3A2的工艺条件进行3组重复试验（材料量同正交试验），试验结果见表6。

表6 水提工艺验证试验Table 6 Results of the test for optimized condition with water extraction

结果表明，按提取工艺C3B3A2进行提取，芍药苷含量和提取率差异较小，重现性较好，表明该工艺合理、稳定可行。

3.3 休止角测定结果

休止角越小，摩擦力越小，流动性越好，小于30°时流动性好，小于40°时可用于企业生产。干粉休止角测定结果见表7。由结果看出休止角大于40°，干粉流动性不好。

表7 干粉休止角测定结果Table 7 The results of dry repose angle

3.4 辅料用量测定结果

辅料用量测定结果见表8。

表8 辅料用量筛选结果Table 8 The screening results of accessories amount

由表8可知，加入淀粉后，细粉流动性显著提高，比较各组中加入的辅料量，考虑到实际生产成本，故确定可溶性淀粉与干浸膏粉最佳质量比例是1∶1。

3.5 水分测定结果

水分测定结果见表9。

由表9可知，蓝莓酒肝清胶囊含水量均小于9%，符合药典的规定。

表9 含水量测定结果Table 9 The measurement results of moisture

3.6 装量差异测定结果

装量差异测定结果见表10。

表10 装量差异测定结果Table 10 The measurement results of content uniformity

由表10可知，算出胶囊的装量差异范围为0.315g～0.370 g，试验数据中只有第二组不符合要求，故蓝莓酒肝清胶囊装量差异符合药典的规定。

3.7 空胶囊规格的选择

采用量筒法测定3批胶囊粉末堆密度，精密称取干燥至恒重的材料10 g，倒入100 mL量筒中，手持量筒振荡至体积不变，记录体积，堆密度即为质量与体积的比值。3批药粉测定结果分别为0.60、0.61、0.59 g/mL，堆密度平均值为0.60 g/mL，可选择0号胶囊填充，根据实测，平均每粒胶囊填充量为0.35 g。

3.8 胶囊成型工艺确定结果

将填充物按3.1和3.2的优化提取工艺进行提取，得到的干浸膏粉与可溶性淀粉按质量比1∶1混匀，喷以75%乙醇消毒，60℃烘箱干燥1 h后过80目筛，使用0号胶囊壳进行手工填充。

4 结论与讨论

本研究确定蓝莓酒肝清胶囊的提取和制备工艺为：蓝莓、栀子、丹参、姜黄加15倍量的70%乙醇回流提取2次，每次3 h；白芍、积雪草加15倍量的水煎煮3次，每次3 h。提取液过滤、合并、减压浓缩，80℃减压干燥成干膏。粉碎过80目筛，得干膏粉。由于干膏粉流动性不好，不能直接填充胶囊，经考察将干膏粉与淀粉按质量比（1∶1）混匀，喷以75%乙醇消菌杀毒，60℃烘箱干燥1 h后过80目筛，使用0号胶囊壳填充即可。本研究为蓝莓酒肝清胶囊的进一步开发与应用提供了科学依据，但其具体的保肝机理还需要进一步深入研究和探讨。

[1]李爱华.酒精性肝病发病机制的研究进展[J].吉林医学,2010,31(17):2670-2672

[2]赵洁,雷金艳.酒精性肝病的研究进展[J].北京中医药,2009,28(11):907-908

[3]Gao B,Bataller R.Alcoholic liver disease:pathogenesis and new therapeutic targets.[J].Gastroenterology,2011,141(5):1572-1585

[4]靳华.酒精性肝病的中医病因病机[J].中西医结合肝病杂志,2012,22(4):249-250

[5]王洪岩,李鑫,徐有青.酒精性肝病发病机制研究进展[J].实用肝脏病杂志,2014(1):5-8

[6]殷晓轩,尹常健.酒精性肝病中医用药规律探讨[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(12):285-287

[7]梁卫,吴承玉.酒精性肝病辨治心得[J].中医杂志,2013(5):433-434

[8]李磊.金枣远志胶囊的制备工艺及质量标准研究[D].西安:西北大学,2012.

[9]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:化学工业出版社,2010:21-22

Preparation Technology of Blueberry Jiuganqing Capsule

GUO Shi-qi1，2，NAN Min-lun3，HE Yu-fang3，GAO Yu-gang1，2，ZHAO Yan1，2，ZHANG Lian-xue1，2，HE Zhong-mei1，2，*
（1.Chinese Medicine College，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，Jilin，China；2.Jilin Provincial Ginseng Engineering and Technology Innovation Centre，Changchun 130118，Jilin，China；3.Academy of Chinese Medical Sciences of Jilin Province，Changchun 130012，Jilin，China）

The preparation of blueberry Jiuganqing capsule was determined.The orthogonal experimental design was carried out in our present study.In addition，the contents of the indicator component and the yield of extraction were used as the evaluating indexes，and the multiple guidelines grading method was also used to optimize extraction technology，by investigating angle of repose，accessories amount，content of moisture，and content of uniformity.The best alcohol extraction technology was showed in our present study，as follow：the concentrationofalcoholwas70%，theliquid-solidratiowas1∶15（g/mL），refluxedfor2timesand3 hours everytime.The best water extraction technology was also showed as follow：the liquid-solid ratio was 1∶15（g/mL），water extracted for 3 times and 3 hours every time.The best forming process of the capsules was that the soluble starch and the dry extract powder were mixed in 1∶1 mass ratio.The obtained powder had good fluidity and less hygroscopicity.The preparation technology of blueberry Jiuganqing capsule was feasible，and had obvious effect of preventing alcoholic liver injury.

blueberry capsules；preparation technology；orthogonal design；indicator component；accessories

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.020

吉林省科技发展计划项目（20140311029YY）

郭诗琦（1993—），女（汉），硕士研究生，从事中药新药研究与开发。

*通信作者：何忠梅，副教授，博士，从事中药有效成分、作用机制研究及产品开发。

2017-03-01