擦拭直扩法和粘取磁珠法检测衣物脱落细胞DNA的比较

杨 电 ，陈俊璋，李 越

（1.广州市刑事科学技术研究所，广东 广州 510030；2.广州市公安局南沙区分局，广东 广州 510410）

擦拭直扩法和粘取磁珠法检测衣物脱落细胞DNA的比较

杨 电1，陈俊璋2，李 越1

（1.广州市刑事科学技术研究所，广东 广州 510030；2.广州市公安局南沙区分局，广东 广州 510410）

法医遗传学；直接扩增法；磁珠法；接触DNA；脱落细胞；衣物

法医检案中经常遇到对衣物接触DNA检验的要求，目前多为先用真空吸附或胶带粘取的方法富集衣物上的脱落细胞，然后用Chelex-100法、磁珠法或硅珠法提取DNA进行STR分型检测[1-5]。上述方法操作均较繁琐，且容易污染。本研究用生物检材采集与保存套管的尖头棉签擦拭穿过的衣物上的脱落细胞，然后剪取少量棉签头部，采用直接扩增法及用脱落细胞粘取器粘取后磁珠提取法获得脱落细胞DNA，并使用PowerPlex®21试剂盒（美国Promega公司）进行STR检测，对两种方法所得STR分型结果进行比较，结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 样本

按照知情同意的原则，收集志愿者11月份穿过1d的上衣15件、裤子10条、棉线袜子10双。上衣的衣领部位以标牌位置为分界，左边一半用1滴提取液湿润的生物检材采集与保存套管（广州浩源实验器材科技有限公司）的棉签尖头反复擦拭，右边一半用脱落细胞粘取器（公安部物证鉴定中心）反复粘取。裤子的裤腰部位以中缝为界，左半擦拭右半粘取。每双袜子，其中一只用棉签擦拭袜腿内侧，另一只用粘取器粘取相同部位。所有样本于采集后室温放置，1周内进行检验。

每个志愿者均采集口腔拭子提取DNA，用Power-Plex®21试剂盒扩增，获得明确的STR分型作为对照。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取

直接扩增：于每根擦拭棉签头部剪取芝麻粒大小，放入0.2mL扩增管中。

磁珠提取：用镊子将粘取后的脱落细胞粘取器上的胶带取下，放入96深孔板中，在Microlab®STAR自动化液体处理工作站（瑞士Hamilton公司）中用磁性DNA半定量提取试剂盒（长春博坤生物科技有限公司）进行提取，洗脱体积选取40μL。

1.2.2 PCR扩增和STR分型

按文献[6]在直接扩增样品管和磁珠提取样品管中加入PowerPlex®21扩增试剂后在同一台9700型PCR仪（美国AB公司）上扩增。

扩增产物取1 μL按文献[6]在3130xl基因分析仪（美国AB公司）上进行毛细管电泳检测分型，用GeneMapper®ID v3.2软件（美国Thermo Fisher Scientific公司）进行结果分析。

1.2.3 统计学分析

和志愿者口腔拭子检出的基因型进行比对，以检出全部完整均衡的基因分型且峰高＞100RFU视为检出成功。采用SPSS 16.0软件进行χ2检验，对擦拭后直接扩增的方法（简称“擦拭直扩法”）和粘取后磁珠提取的方法（简称“粘取磁珠法”）获得的衣物接触DNA的检出情况进行比较，检验水准α＝0.05。

2 结果和讨论

35例衣物分别采用擦拭直扩法和粘取磁珠法获得的接触DNA检验结果见表1。经χ2检验，两种方法对衣物接触DNA的STR分型成功率差异无统计学意义。

两种方法获得的衣物接触DNA的STR图谱在峰型、峰高和均衡性方面无明显差别，图1为同一件上衣采用擦拭直扩法与粘取磁珠法获得的STR图谱。2双袜子采用两种方法检验峰值均较低，有2～3个基因座出现了等位基因缺失。1条裤子用粘取磁珠法检验有2个基因座出现等位基因缺失，用擦拭直扩法虽检出全部基因型，但峰值较低。

表1 两种方法对衣物脱落细胞STR分型的检出情况

图1 同一件上衣采用两种方法获得的STR分型

衣服、裤子和袜子均属于渗透性载体，以往认为其中黏附的脱落细胞较难擦拭下来，故多用真空吸附的方法采集，然后用Chelex-100法、磁珠法或硅珠法提取DNA后进行STR检测分型[1-2]。笔者在实际工作中发现，真空吸附的方法富集的细胞虽然较多，但因吸附面积大容易造成污染，给基因型的判读带来困扰。胶带粘取法通过胶带粘取富集细胞，然后将胶带取下进行DNA提取，污染的可能性较真空吸附法减少，所以现在多用胶带粘取的方法。但是胶带的黏性大，难以进行直接扩增，需采用磁珠法或硅珠法提取DNA后再行扩增检测[3-5]。生物检材采集与保存套管的棉签为尖头，以此擦拭衣物上可能黏附脱落细胞的部位，细胞集中在棉签尖头上，因棉签悬空放置在试管中没有损失，剪取部分进行直接扩增，对衣物接触DNA的检出率虽然和粘取磁珠法相当，但可以达到简化实验步骤、缩短检验时间、降低检验成本的目的[7]，同时还节约检材、方便复检。因此，对衣物脱落细胞DNA的检验，尤其是重大紧急案件中的衣物脱落细胞DNA检验，擦拭直扩法无疑为首选方法。

本研究中的袜子只采集了袜腿部位的脱落细胞，无论擦拭直扩法还是粘取磁珠法，获得的STR分型峰高均较低，并有2双袜子出现等位基因缺失的现象，这说明袜腿上的脱落细胞较少，要保证获得完整的STR分型，可增加采集面积，如增加袜底部位的采集等。笔者也对实际案件中遇到的2例袜子同时擦拭袜腿和袜底部位然后直接扩增，均成功获得完整STR分型。李长征等[8]直接剪取10件上衣和10只手套可能含有脱落细胞的部位，采用AmpFℓSTRTMIdentifilerTM直扩试剂盒（美国Thermo Fisher Scientific公司）直接扩增，发现有7件上衣、9只手套可获得全部基因型。与其相比，本研究采用擦拭的方法将脱落细胞集中到棉签的尖头部位，再剪取部分检材直接扩增，检测成功率有所增加。分析原因为擦拭直扩法可以在保证扩增体系中细胞数量足够的同时，减少载体对直接扩增体系的影响，从而提高直接扩增的成功率。

[1]杨电，刘超，徐曲毅，等.Chelex-100法提取脱落细胞检材 DNA 的实时定量研究[J].刑事技术，2009（5）：30-31，34.

[2]王华荣，廖勤，吴世青.三种磁珠法提取脱落细胞DNA的比较[J].法医学杂志，2016，32（6）：459-460.

[3]VERDON T J， MITCHELL R J， VAN OORSCHOT R A.Evaluation of tapelifting as a collection method for touch DNA[J].Forensic Sci Int Genet，2014，8（1）：179-186.

[4]赵春鹤，郭业明，江煜灵，等.利用自研新型脱落细胞粘取器提取接触类检材 DNA[J].刑事技术，2014（4）：51-53.

[5]安宇然.应用透明胶布黏附法提取人体脱落细胞1例[J].法医学杂志，2014，30（5）：407.

[6]高波，唐振亚，杨电.PowerPlex21直扩法与磁珠法用于毛发 STR 检验的比较[J].中国公共安全（学术版），2015（2）：111-113.

[7]杨电，刘超，李越，等.生物检材采集与保存套管的应用[J].中国法医学杂志，2014，29（4）：352-354.

[8]李长征，刘海东.直扩试剂盒检验接触DNA检材初探[J].中国法医学杂志，2013，28（3）：247.

2016-03-09）

（本文编辑：张素华）

DF795.2

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10.3969/j.issn.1004-5619.2017.05.020

1004-5619（2017）05-0538-02

杨电（1969—），女，硕士，主任法医师，主要从事法医 DNA检验与研究；E-mail：yangdianyy@163.com

李越，男，硕士，主任法医师，主要从事法医DNA检验与研究；E-mail：13570128202@163.com