SLC52A3基因多态性与鼻咽癌易感性的关系

马佐鹏 王晓巍 郝丽娟 庞怀霞 葛 塬

(青海红十字医院耳鼻喉科，青海 西宁 810000)

SLC52A3基因多态性与鼻咽癌易感性的关系

马佐鹏 王晓巍1郝丽娟 庞怀霞 葛 塬

(青海红十字医院耳鼻喉科，青海 西宁 810000)

目的探讨核黄素转运蛋白SLC52A3基因单核苷酸多态性(SNPs)与鼻咽癌易感性的关系。方法采用Haploview 软件从国际人类基因组单体型图计划(Hap Map)公布的北京汉族人群基因型数据库中筛选出SLC52A3基因3个标签SNPs(rs13042395、rs3746803及rs3746804)，收集147例鼻咽癌患者外周血标本并采用直接测序法进行基因分型，选取159例健康体检者的外周血作对比，采用Hardy-Weinberg平衡分析3个SNPs位点的遗传平衡情况，比较鼻咽癌患者与健康对照rs13042395、rs3746803及rs3746804基因型和等位基因的分布差异并计算比值比(OR)及其95%置信区间(CI)来评价以上SNPs与鼻咽癌易感性的关系，同时分析SLC52A3 SNPs与常见临床病理参数的关系。结果147例鼻咽癌患者rs13042395、rs3746803及rs3746804基因型和等位基因的分布符合Hardy-Weinberg平衡。疾病组与对照组rs13042395基因型分布的差异无统计学意义(Pgt;0.05)，但疾病组等位基因C的比例高于对照组(Plt;0.05)，其中以CC基因型为参照，TT及CT+TT基因型发生鼻咽癌的风险降低至0.522、0.575倍(Plt;0.05)，T相对于C等位基因发生鼻咽癌的风险降低至0.719倍(Plt;0.05)。rs3746804分布上，疾病组TT基因型及等位基因T的比例均低于对照组，差异有统计学意义(Plt;0.05)，其中以CC基因型为参照，CT、TT及CT+TT基因型发生鼻咽癌的风险降低至0.501、0.400和0.466倍(Plt;0.05)；以C等位基因为参照，T发生鼻咽癌的风险降低至0.588倍(Plt;0.05)。rs3746803基因型及等位基因分布与鼻咽癌易感性无关。结论SLC52A3 rs13042395、rs3746804与鼻咽癌易感性及临床分期有关，其中携带等位基因T的鼻咽癌发生风险降低，在鼻咽癌早期筛查中有一定价值。

鼻咽癌；SLC52A3；单核苷酸多态性；易感性

鼻咽癌是一种Epstein Barr病毒(EBV)相关的恶性肿瘤，发病具有明显的地域和种族差异，在我国南方地区高发〔1〕。对于早期鼻咽癌，放疗是一种有效的治愈手段，但晚期患者的治疗效果较差〔2〕。鼻咽癌的发病过程涉及多个基因，且基因与环境间的作用亦参与鼻咽癌的发生发展〔3〕。单核苷酸多态性(SNPs)被认为是预测各种癌症的易感性及预后的稳定和有效的生物标志物〔4〕。SLC52A3也称为C20orf54，定位于人20号染色体上，编码人类核黄素转运蛋白(RFT)2，可以特异性跨膜的方式将核黄素转运至细胞内，在核黄素平衡中发挥作用〔5〕。SLC52A3基因的SNPs与食管鳞状细胞癌的易感性相关〔6〕，目前尚未见该基因SNPs与鼻咽癌易感性的研究。本研究探讨SLC52A3基因的SNPs与鼻咽癌易感性的关系。

1 资料与方法

1.1对象 收集2013年1月至2016年6月青海红十字医院经病理确诊的鼻咽癌患者147例，均为汉族，男85例，女62例，年龄29～71岁，中位年龄58.0岁，lt;60岁94例，≥60岁53例；ECOG评分0～1分77例，2分70例；临床分期：Ⅰ、Ⅱ期91例，Ⅲ、Ⅳ期56例；病理类型：鳞癌126例，腺癌21例；T分期：T1、T2期88例，T3、T4期59例；N分期：N0～N2期86例，N3期61例。本研究患者未合并其他肿瘤且均签署知情同意书。选取同期的159例健康体检者作对照，男91例，女68例，年龄31～74岁，中位年龄58.0岁。两组例数、性别及年龄的差异无统计学意义，具有可比性(Pgt;0.05)。

1.2样本收集及处理 147例鼻咽癌患者均于入院后第2天治疗前抽取外周静脉血5 ml，置于含EDTA的抗凝真空采血管中，3 000 r/min离心10 min后，取上清200 μl分装，采用天根血液基因组DNA提取试剂盒，依据说明书提取基因组DNA，要求DNA纯度和完整性较好，OD260/OD280值1.8～2.0，DNA无降解现象，置于-80℃冰箱中保存备用。每个样本取20 ng 样本DNA采用Applied Biosystems进行扩增。

1.3SNPs位点筛选及基因分型 采用Haploview 软件从国际人类基因组单体型图计划(Hap Map)公布的北京汉族人群基因型数据库(URL:http://www.hapmap.org/index.html.en)中筛选出SLC52A3基因3个标签SNPs(rs13042395、rs3746803及rs3746804)，要求最小等位基因频率 MAFgt;0.05和连锁不平衡参数r2gt;0.8。针对筛选的以上3个SNPs，由苏州金唯智公司设计并合成PCR扩增及延伸引物，采用直接测序法进行基因分型。

1.4评价指标 (1)采用Hardy-Weinberg平衡分析3个SNPs位点的遗传平衡情况；(2)比较鼻咽癌患者与健康对照rs13042395、rs3746803及rs3746804基因型和等位基因的分布差异并计算比值比(OR)及其95%置信区间(CI)来评价以上SNPs与鼻咽癌易感性的关系；(3)分析SLC52A3 SNPs与常见临床病理参数(性别、年龄、ECOG评分、病理类型、临床分期、N分期和T分期)的关系。

1.5统计学分析 采用SPSS16.0软件，SNP基因型及等位基因型分布比较采用χ2检验，试验样本群体SNP位点多样性进行Hardy-Weinberg平衡检验，计算OR及其95%CI。

2 结 果

2.1Hardy-Weinberg平衡检验 147例鼻咽癌患者rs13042395、rs3746803及rs3746804基因型和等位基因的分布与预测值的差异无统计学意义(Pgt;0.05)，表明本研究选取的鼻咽癌人群具有代表性，分布符合Hardy-Weinberg平衡。见表1、表2。

2.2两组SLC52A3基因SNP的分布情况 疾病组与对照组rs13042395基因型分布的差异无统计学意义(Pgt;0.05)，但疾病组等位基因C的比例显著高于对照组(Plt;0.05)；两组rs3746803基因型及等位基因分布的差异均无统计学意义(Pgt;0.05)；rs3746804分布上，疾病组TT基因型及等位基因T的比例均显著低于对照组(Plt;0.01)。见表3。

2.3SLC52A3基因SNP位点与鼻咽癌易感性的关系 (1)rs13042395：以CC基因型为参照，TT及CT+TT基因型发生鼻咽癌的风险降低至0.522、0.575倍(Plt;0.05)，而CT发生鼻咽癌的风险未改变(Pgt;0.05)；以C等位基因为参照，T发生鼻咽癌的风险降低至0.719倍(Plt;0.05)。(2)rs3746803：以GG基因型为参照，GA、AA及GA+AA基因型发生鼻咽癌的风险未改

变(Pgt;0.05)；以G等位基因为参照，A发生鼻咽癌的风险亦未发生明显改变(Pgt;0.05)。(3)rs3746804：以CC基因型为参照，CT、TT及CT+TT基因型发生鼻咽癌的风险降低至0.501、0.400和0.466倍(Plt;0.01)；以C等位基因为参照，T发生鼻咽癌的风险降低至0.588倍(Plt;0.01)。见表4。

表1 147例鼻咽癌患者SLC52A3基因型的Hardy-Weinberg平衡检验

表2 147例鼻咽癌患者SLC52A3等位基因的Hardy-Weinberg平衡检验

表3 两组SLC52A3基因SNP位点的分布情况〔n(%)〕

表4 SLC52A3基因SNP位点与鼻咽癌易感性的关系〔n(%)〕

续表4 SLC52A3基因SNP位点与鼻咽癌易感性的关系〔n(%)〕

2.4鼻咽癌SLC52A3基因多态性与临床病理参数的关系 rs13042395：鼻咽癌rs13042395基因多态性分布与性别、年龄、ECOG评分、病理类型及N分期均无关(Pgt;0.05)，而与临床分期和T分期均有关(Plt;0.05)。见表5。rs3746804：鼻咽癌rs3746804基因多态性分布与性别、年龄、ECOG评分、病理类型、T分期及N分期均无关(Pgt;0.05)，而与临床分期有关(Plt;0.05)。见表6。

表5 鼻咽癌rs13042395基因多态性与临床病理参数的关系

表6 鼻咽癌rs3746804基因多态性与临床病理参数的关系

3 讨 论

SLC52A3在机体核黄素吸收中发挥重要作用，与恶性肿瘤的发生发展有关〔7〕。SLC52A3在多种恶性肿瘤中高表达，如食管鳞状细胞癌组织的SLC52A3高于癌旁组织，且在食管鳞状细胞癌细胞中下调SLC52A3表达可达到抑制细胞增殖和集落形成，而当SLC52A3过表达可促进癌细胞增殖及对顺铂的耐药过程〔8〕。核黄素可维持细胞稳态，是叶酸代谢的重要物质，同时参与了氧化还原反应过程，其水平异常可促进亚硝胺类致癌物诱发食管的癌变，而补充核黄素可降低食管癌高发区域的风险〔9〕。目前已证实SLC52A3存在多个SNPs位点，直接影响了核黄素转运至细胞的过程，从而导致膳食补充核黄素的疗效存在个体差异〔10,11〕。以上证据提示SLC52A3基因多态性可能对于鼻咽癌的发生风险有一定影响。

本研究根据已报道的与恶性肿瘤易感性有关的SNPs位点，同时遵循最小等位基因频率 MAFgt;0.05和连锁不平衡参数r2gt;0.8的筛选策略，通过构建单体型挑选出覆盖SLC52A3的3个标签SNPs(rs13042395、rs3746803及rs3746804)。本研究通过Hardy-Weinberg平衡检验发现所选取147例鼻咽癌患者在这3个SNPs的基因型和等位基因分布整体上符合孟德尔遗传平衡法则，该鼻咽癌群体具有一定的代表性。研究表明携带rs13042395 T发挥保护作用，推测可能原因为C等位基因可能促进SLC52A3过表达，可能通过与某些转录因子的结合有关，但具体起效因子尚不清楚。与本研究推测一致，Tan等〔12〕的研究发现携带rs13042395 C者的SLC52A3蛋白水平高于未携带者。rs3746803基因型及等位基因分布与鼻咽癌易感性无关。另一项研究同样也发现rs3746803与口腔鳞癌的发病风险无关〔13〕。SNP rs3746804位于该基因的外显子3区域，其C→T突变可导致第267位氨基酸由脯氨酸转变为亮氨酸，可能会通过影响该蛋白的空间构型，继而影响SLC52A3对核黄素的转运效果〔14〕。本研究发现rs3746803亦与鼻咽癌易感性有关，进一步分析显示rs13042395及rs3746804与临床分期有关，且rs13042395还与T分期有关，更加强调SLC52A3 SNPs在鼻咽癌发生发展中的作用。综上所述，SLC52A3 rs13042395、rs3746804与鼻咽癌易感性及临床分期有关，其中携带等位基因T的鼻咽癌发生风险降低，在鼻咽癌早期筛查中有一定价值。

1邹 嵩,汪 琛,李 峰,等.调强放疗联合金龙胶囊治疗老年鼻咽癌的疗效〔J〕.中国老年学杂志,2016;36(7):1643-5.

2侯盘长,朱庆尧,雒建超,等.奈达铂或顺铂联合调强放疗治疗老年鼻咽癌的临床疗效〔J〕.中国老年学杂志,2015;35(6):1461-3.

3屈艳丽,于 洪,赵玉霞,等.ATM基因单核苷酸多态性与鼻咽癌易感性及复发的相关性〔J〕.现代肿瘤医学,2016;24(8):1194-7.

4吴晓红,于祥远,王程强,等.XRCC1 Arg399Gln 基因多态性与鼻咽癌易感性的 Meta 分析〔J〕.重庆医学,2015;44(28):3962-5.

5Gu H,Ding G,Zhang W,etal.Replication study of PLCE1 and C20orf54 polymorphism and risk of esophageal cancer in a Chinese population〔J〕.Mol Biol Rep,2012;39(9):9105-11.

6Palmer AJ,Lochhead P,Hold GL,etal.Genetic variation in C20orf54,PLCE1 and MUC1 and the risk of upper gastrointestinal cancers in Caucasian populations〔J〕.Eur J Cancer Prev,2012;21(6):541-4.

7Li J,Wang S,Li M,etal.Decreased risk of developing cancer in subjects carrying SLC52A3 rs13042395 polymorphism:proof from a meta-analysis〔J〕.Biomark Med,2016;10(10):1105-18.

8Jiang XR,Yu XY,Fan JH,etal.RFT2 is overexpressed in esophageal squamous cell carcinoma and promotes tumorigenesis by sustaining cell proliferation and protecting against cell death〔J〕.Cancer Lett,2014;353(1):78-86.

9Ji A,Wang J,Yang J,etal.Functional SNPs in human C20orf54 gene influence susceptibility to esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2011;12(12):3207-12.

10Abnet CC,Wang Z,Song X,etal.Genotypic variants at 2q33 and risk of esophageal squamous cell carcinoma in China:a meta-analysis of genome-wide association studies〔J〕.Hum Mol Genet,2012;21(9):2132-41.

11周福有,范宗民,张连群,等.食管鳞状细胞癌C20orf54基因多态性与吸烟、饮酒及体质量指数的相关性研究〔J〕.河南大学学报(医学版),2012;31(3):197-202.

12Tan HZ,Wu ZY,Wu JY,etal.Single nucleotide polymorphism rs13042395 in the SLC52A3 gene as a biomarker for regional lymph node metastasis and relapse-free survival of esophageal squamous cell carcinoma patients〔J〕.BMC Cancer,2016;16:560.

13He Y,Ye L,Shan B,etal.Effect of riboflavin-fortified salt nutrition intervention on esophageal squamous cell carcinoma in a high incidence area,China〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2009;10(4):619-22.

14纪爱芳,魏 武,杨建洲,等.核黄素转运蛋白C200rf54基因rs3746804位点单核苷酸多态性与食管鳞癌遗传易感性的关系〔J〕.中华内科杂志,2012;51(12):982-6.

〔2017-01-15修回〕

(编辑 徐 杰)

R73

A

1005-9202(2017)21-5346-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.21.058

西宁市科技攻关计划项目(2015B01024)

1 北京协和医院耳鼻喉科

马佐鹏(1980-)，男，主治医师，主要从事耳鼻喉科、眩晕、甲状腺外科研究。