乳腺癌组织中热休克蛋白70和p53表达及相关性

蓝永洪 解 娜 饶朗毓 牛海艳 齐亚灵

(海南医学院形态学实验室，海南 海口 571199)

乳腺癌组织中热休克蛋白70和p53表达及相关性

蓝永洪 解 娜1饶朗毓2牛海艳1齐亚灵3

(海南医学院形态学实验室，海南 海口 571199)

目的探讨热休克蛋白(HSP)70和p53在乳腺癌组织中的表达及其相关关系。方法采用免疫组化技术检测24例乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中HSP70与p53的表达情况。结果与癌旁正常乳腺组织相比，乳腺癌组织HSP70与p53的阳性率显著升高(Plt;0.05)，与TNM分期和淋巴结转移密切相关(Plt;0.05)，而与年龄和肿瘤的大小无关(Pgt;0.05)；同时HSP70与p53的表达呈正相关(r=0.516，P=0.013)。结论HSP70与p53在乳腺癌组织呈高表达且关系密切，在乳腺癌的发生发展中起到一定作用。

乳腺癌；热休克蛋白70；p53

中国癌症统计报告中指出预计2016年中国乳腺癌发病人数达268 600人，在女性恶性肿瘤中发病率为第一位，病死率为第二位〔1，2〕。热休克蛋白(HSP)70广泛存在于生物体内，是HSPs家族中最保守、应激过程中表达最高的一种蛋白质，在细胞凋亡、DNA损伤、免疫反应等方面起着重要的作用，具有分子伴侣、细胞保护、结合功能等功能，在缺血、损伤、感染、肿瘤等情况下可诱发 HSP70过量表达〔3〕。p53分为野生型和突变型，野生型p53在维持细胞正常生长，抑制细胞恶性增殖过程中起主要作用，而突变型p53失去抑癌作用，同时还因突变而具有癌基因的作用〔4，5〕。研究表明HSP70可与p53结合，介导其蛋白产物的构象成熟，进而影响细胞的周期，调控细胞的增殖能力〔6〕。本研究采用免疫组化检测乳腺癌组织中HSP70与p53的表达情况，探讨二者的表达关系及其在乳腺癌发生发展中的作用。

1资料及方法

1.1一般资料 2015年1月至2016年12月海南医学院第一附属医院乳腺癌外科切除的病理标本24例，年龄35～72岁，平均(51.2±10.4)岁，术前均未行放、化疗，术后经病理学证实。所取组织标本为乳腺癌组织及其癌旁正常乳腺组织，经10%中性甲醛溶液固定后，常规脱水和石蜡包埋，连续切片厚度5 μm，捞片后放入干燥箱中烤片。

1.2主要试剂 兔单克隆抗体HSP70为英国Abcam公司产品、鼠单克隆抗体p53为福建迈新的产品； PV-6001〔山羊抗兔IgG/辣根过氧化物(HRP)聚合物〕、PV-6002(山羊抗小鼠IgG/HRP聚合物)、DAB显色试剂盒均为北京中杉金桥的产品。

1.3免疫组化方法 石蜡切片常规脱蜡和水化，置于枸橼酸缓冲液中微波修复，自然冷却后用3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶的活性，山羊血清封闭，加HSP70或p53抗体置于4℃冰箱中过夜，滴加PV-6001或PV-6002室温下孵育，DAB显色，观察染色结果，适时终止反应，苏木素复染，酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.4结果判断 HSP70、p53分别以胞质、胞核呈现棕黄色颗粒为阳性。高倍镜下选择10个视野，阳性细胞比例lt;20%为阴性(-)，≥20%为阳性(+)。

1.5统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行χ2检验和Spearman相关分析。

2 结 果

2.1HSP70和p53的表达情况 与癌旁正常乳腺组织(29.2%、20.8%)相比，乳腺癌组织中HSP70(83.3%)和p53的阳性率(75.0%)显著升高(Plt;0.05)。HSP70和p53的表达见图1。

2.2HSP70和p53阳性表达与乳腺癌临床病理特征的关系 HSP70与p53阳性表达均与TNM分期和淋巴结转移密切相关(Plt;0.05)，而与年龄和肿瘤的大小无关(Pgt;0.05)，见表1。

2.3HSP70和p53表达的相关性 20例HSP70阳性组织中有17例(85.0%)p53阳性，4例HSP70阴性组织中有1例(25.0%)

图1 乳腺癌组织HSP70和p53的表达情况(×400)

临床病理特征nHSP70P值p53P值年龄(岁) ≤4097(77.8)0.5726(66.7)0.465 gt;401513(86.7)12(80.0)肿瘤直径(cm) ≤264(66.7)0.2063(50.0)0.102 gt;21816(88.9)15(83.3)TNM分期 Ⅰ63(50.0)0.0382(33.3)0.020 Ⅱ1312(92.3)11(84.6) Ⅲ55(100.0)5(100.0)淋巴结转移 有1111(100.0)0.04410(90.9)0.040 无139(69.2)8(53.3)

p53阳性，乳腺癌组织中HSP70和p53的表达呈正相关(r=0.516，P=0.013)。

3 讨 论

HSP70高表达通常与肿瘤细胞的低分化、淋巴结转移、肿瘤耐药等紧密相关，可能参与肿瘤细胞的生物学行为〔7〕。细胞中野生型p53蛋白分布少，且溶于水，免疫组化难以检测，而突变型p53蛋白因为空间构象发生改变，稳定性增强，容易检测出，因此免疫组化检测到的p53基本为突变型p53蛋白〔8〕。近一半的肿瘤组织存在 p53蛋白的高表达，而p53蛋白的高表达与肿瘤的临床病理特征密切相关〔9〕。本研究结果提示HSP70和p53参与了乳腺癌的发生发展；乳腺癌组织中的HSP70与p53两者可能在乳腺癌的发生发展过程中相互影响，其原因可能为〔10～12〕：①HSP70的分子伴侣作用可以调节p53蛋白的构象平衡，避免p53蛋白被降解；②HSP70与p53蛋白结合形成复合物，导致p53蛋白在胞质积聚，共同参与肿瘤细胞的生物学行为。 综上，HSP70与p53蛋白在乳腺癌组织中呈高表达且关系密切，在乳腺癌发生发展中起一定作用，可能成为判断患者病情的指标；同时HSP70与 p53蛋白联合检测结果可以初步判断乳腺癌所处的阶段，也为其靶向治疗研究提供了一个方向。

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5詹 媛，江锦良，邬黎青.p53在乳腺癌基因治疗中的研究进展〔J〕.中国老年学杂志， 2016；36(17)：4391-3.

6Tollv C，Morimoto RI.Role of the heat shock response and molecular chaperones in oncogenesis and cell death〔J〕.J Natl Cancer Inst，2000；92(19)：1564-72.

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8蒙健军，蓝 东，韦敏怡.P73、P5蛋白在胃癌中的表达及意义〔J〕.广西医学，2010；32(5)：510-2.

9张媛媛，付 丽.p53基因治疗研究的新进展〔J〕.中华病理学杂志，2006；35(1)：49-50.

10范云霞.热休克蛋白70与肿瘤〔J〕.国际肿瘤学杂志，2000；27(4)：196-9.

11李三峰，丁 伟.HSP70与p53蛋白在肝细胞癌组织中的表达及相关性研究〔J〕.肿瘤基础与临床，2009；22(6)：468-71.

12李延辉，夏明汗，康举龄，等.HSP70和P53蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及其与临床病理特征的关系〔J〕.现代生物医学进展，2011；11(13)：2504-7.

〔2017-02-19修回〕

(编辑 苑云杰)

R737.9

A

1005-9202(2017)21-5245-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.21.012

海南省自然科学基金(No.814301)；海南医学院科研培育基金(No.HY2013-12)

1 病理学教研室 2 病原生物学教研室

3 组织学与胚胎学教研室

齐亚灵(1967-)，女，教授，医学博士，博士生导师，主要从事肿瘤基因诊断及生物治疗研究。

蓝永洪(1978-)，男，硕士，高级实验师，主要从事分子病理学研究。