氯胺酮成瘾者外周血白细胞端粒长度与中医病理因素的关联性研究

刘新爱，童秋玲，宫 璞，金 李，张金玲，林华坚，杨朝阳

（福建中医药大学中医学院，福建 福州 350122）

氯胺酮成瘾者外周血白细胞端粒长度与中医病理因素的关联性研究

刘新爱，童秋玲，宫 璞，金 李，张金玲，林华坚，杨朝阳

（福建中医药大学中医学院，福建 福州 350122）

目的 探讨氯胺酮成瘾者外周血白细胞的端粒长度与中医病理因素的关系，从而在基因层面上探讨氯胺酮对人体身心健康影响的可能中医内在机制。 方法 将91例氯胺酮成瘾者和100例健康受试者分为试验组和对照组，采集四诊信息，应用中医证素辨证方法提取中医病理因素，获取外周血白细胞的DNA，使用QPCR基础技术来测量端粒长度。 结果 ①2组外周血白细胞端粒长度与年龄和性别呈显著相关（P＜0.05）；校正性别和年龄后，试验组的端粒长度比对照组的短（P＜0.05）。② 氯胺酮成瘾者的中医证素分布：肝、肾、脾为主要病位因素；气虚、阳虚为主要病性因素。③ 校正性别和年龄后，试验组热、气虚、阳虚、血虚等证素的端粒长度相比对照组的端粒长度更短（P＜0.05）。 结论 ① 吸食氯胺酮会造成端粒受损，使端粒长度缩短。② 氯胺酮对机体损伤是多脏腑功能失调共同所致，肝、肾、脾为氯胺酮成瘾者的主要病位因素，气虚和阳虚为氯胺酮成瘾者的主要病性因素。③ 氯胺酮成瘾者端粒长度的缩短由中医多病理因素共同影响所致，主要体现在热、气虚、阳虚、血虚等中医病理因素上，从而进一步在基因水平上揭示了氯胺酮对人体身心健康影响的中医内在机制。

氯胺酮；端粒长度；中医病理因素

当前毒品泛滥问题已成为世界最严重的犯罪问题之一，吸毒已从个体或群体发展成为一个复杂的社会问题。相对于海洛因等人们耳熟能详的毒品，氯胺酮成本低廉，更具诱惑力，危害更大，并日益成为制毒、贩毒和吸毒人员的“新宠”，尤其是心智发育尚不成熟、缺乏社会阅历的青少年更容易成为此类毒品的受害者［1］。人体端粒由富含鸟嘌呤（G）的DNA重复序列组成［2］。毒品滥用会导致端粒受损，且吸毒者的端粒明显比正常人群的短［3］。而端粒保护着染色体末端免受各种酶的攻击，特别是在保护基因组的稳定性、完整性方面起着至关重要的作用［4］。在健康细胞中，端粒会“吞食”任何突出的DNA末端，从而形成一种形似套索样的T型环状结构，并通过这一结构来保护染色体［5］。端粒长度的缩短到一定界限可以导致细胞停止分裂，细胞老化而逐渐死亡。中医药在戒毒方面历史悠久，中医对毒瘾与端粒的研究也不断进行着探索和尝试，尤其是针对端粒与衰老的病机及治法上，取得了一定的成就。目前氯胺酮导致的端粒长度变化相关研究较少，因此本课题通过研究氯胺酮成瘾者的端粒长度变化以及探讨端粒长度变化与中医病理因素的关联性，以期进一步加深对毒瘾影响人体健康的中医机制的认识，为临床防治氯胺酮成瘾方面提供可靠依据。

1 对象和方法

1.1 研究对象 所有参与者均为年龄18～54岁的汉族人，试验组为氯胺酮成瘾者91例，均来源于2012—2014年在福建省司法厅戒毒管理局所辖的强制戒毒所和福州市公安强制戒毒所强制戒毒人员，其中男45例，女46例；对照组为100例健康受试者，均来源于福建省第二人民医院体检中心，其中男49例，女51例。

1.2 纳入标准 ① 试验组为强制戒毒人群中的康复期人员；② 符合《氯胺酮依赖诊断治疗指导原则》（卫医办〔2012〕112号）的戒毒患者；③ 参与者自知力完整、无精神疾病和其他严重疾病；④ 被调查者能配合问卷调查人员完成问卷，对在调查中所涉及的各种评估量表能够正确理解并顺利回答；⑤本人自愿参与本次调查。

1.3 排除标准 ① 肝、肾、心功能不全的受试者；② 在本研究之前有任何鸦片类药物使用史者。

1.4 研究方法 16项复吸原因问卷来自北京大学中国药物依赖研究所［6］，同时采用“证素辨证”的方法和参考《中医临床诊疗术语》制订，“福建省吸毒人员中医证候量表”经过预实验设计形成。所有被调查对象均由经过培训的专业人员对其逐项询问完成调查。

1.5 四诊资料采集 四诊资料信息力求做到准确客观，同时按规范化方法收集获得，参考“600种常见症状的辨证意义”［7］相关标准进行分析。

1.6 证素辨证 采用证素辨证方法，以各症状要素积分和阈值法确定证候及各个证的权重。各证要素的诊断确定以100作为通用阈值，各症状对各证的要素贡献度之和达到或超过100时，即可诊断为这些证的要素。每一症状的轻重，以中等程度为准，若该症状重时，其定量诊断值乘以1.5，若症状轻，乘以 0.7。

1.7 实验方法

1.7.1 提取人全血DNA 空腹抽取乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝全血，使用ABI6100全自动核酸提取仪，同时提取外周血白细胞DNA，DNA放置于-80℃冰箱保存。

1.7.2 外周血白细胞端粒长度的测量 采用QPCR技术来测量。每个样品均以核糖核酸酶P作为参考（ABI），每个样本的端粒长度相对值为T／S比值，即端粒／单拷贝基因比值。以作为参考的核糖核酸酶P的数量和端粒重复的数量同时在ABI7900 HT热循环仪10 mL反应体系的孔板上为样本，每个样本一式2份。核糖核酸酶P化验和端粒化验所需的循环条件为95℃，留置10 min，然后二者各在95℃、15 s内循环50次，60℃ 1 min内循环50次。

1.7.3 端粒酶反应 ①1个TaqMan基因表达预混液（ABI）试剂盒；② 300 nM 正向引物：5’-CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTT-TGGGTTTGGGTTTGGG TT-3’；③300 nM反向引物1 ng的模板DNA引物：5’ -GGCTTGCCTTACCCTTACCCT －TACCCTTACCCTTACCCT-3’。

1.8 统计学方法 采用ACESS2003软件，录入相关问卷资料，运用SPSS19.0软件进行统计分析。计量资料符合正态分布的以（x±s）表示，不满足参数检验条件的计量资料采用非参数秩和检验。两个变量相关分析不符合正态分布的采用Spearman法，2组端粒长度 T／S比率比较采用协方差分析。

2 结 果

2.1 端粒长度与年龄、性别的相关性 用Spearman相关分析所有研究对象的端粒长度与年龄、性别的相关性表明：端粒长度与年龄呈显著负相关，相关系数＝-0.353，P＝0.000＜0.05；端粒长度与性别呈显著相关，相关系数＝0.173，P＝0.018＜0.05。结果见表1。

表1 端粒长度与年龄、性别的相关性

2.2 2组端粒长度比较 见表2。

表2 2组一般资料比较（x±s）

2.3 试验组主要证素分布 中医证素分析根据证素判断标准，按证素积分赋值：积分值按70分以下和70分以上分2组，将2组分别赋值为0和1。具体病位及病性证素积分的分布见表3。

表3 试验组主要病位证素分布（n＝91）

2.4 试验组端粒长度与对照组各证素的端粒长度比较 选取试验组病位证素积分和病性证素积分较高的证素，分别比较试验组各证素的端粒长度与对照组端粒长度。校正性别和年龄后，试验组热、气虚、阳虚、血虚证素的端粒长度与对照组的端粒长度比较均有显著性差异（P＜0.05），且端粒长度相比对照组的端粒长度更短；其他证素的端粒长度与对照组端粒长度比较无显著性差异（P＞0.05）。见表 4、表 5。

表4 对照组端粒长度与试验组各证素的端粒长度比较

表5 2组各证素的一般资料比较（x±s）

3 讨 论

3.1 吸食氯胺酮会造成机体端粒损伤，使端粒长度缩短 端粒长度的维持取决于端粒酶及相关蛋白的共同作用。在生物学上，正常细胞长度随体细胞的不断分裂、增殖而逐渐缩短。同时，细胞端粒的长度还会受氧化应激、炎症反应、吸烟等因素的影响。在本研究中，校正了性别和年龄后发现氯胺酮成瘾者的端粒长度均比健康人群的短，说明吸食氯胺酮会导致端粒长度变短。

3.2 作为新型毒品，氯胺酮有潜在的滥用风险［8］，对人体的伤害不言而喻。长期吸食氯胺酮会对吸食者的躯体和神经系统造成严重损害［9］，还可导致严重心功能不全，诱发慢性肾衰竭等一系列心肾功能的损害［10］，严重者可发生精神错乱、精神分裂［11-13］，甚至意识丧失，长期活在幻想的精神世界中。

本研究证明氯胺酮成瘾者的中医证素分布病位以肝、脾、肾为主，尤以肝最为多见，说明氯胺酮和其他毒品一样对人体脏腑功能损伤主要是对肝、脾、肾等多脏腑功能损害［14］，正如《抉瘾刍言》所言：“五脏六腑皆能受瘾”。现代医学发现氯胺酮成瘾者临床上常出现尿频、尿急、血尿等症状［10］，这是氯胺酮与海洛因、冰毒等其他毒品明显不同的地方。从本研究结果可以看出肾的病变在氯胺酮成瘾者的发生发展过程中非常重要。

研究还发现在病性证素上，实证以气滞最为多见，虚证以气虚最为常见。毒品味辛性温燥，长期食用易散肝耗气，疏泄失常，气机不畅，从而出现心情抑郁、焦虑不安、气机不畅等气滞表现。吸毒日久，元气耗伤太过，脏腑机能减退，故而出现气短懒言、神疲乏力等气虚表现。由此可见，气滞和气虚是氯胺酮成瘾者气机失调的主要病理因素。

3.3 本研究证明：氯胺酮成瘾者对工作、生活失去兴趣与热、气虚、阳虚、血虚等密切相关。在证素分布上，氯胺酮成瘾者病位上以肝最为常见，且肾、脾、心、胃、心神也是氯胺酮成瘾者的主要病位因素。病性上以气虚最为常见，且阳虚、阴虚、气滞、血虚、痰也是氯胺酮成瘾者的主要病性因素。同时，吸食氯胺酮造成端粒长度变短主要表现在热、气虚、阳虚、血虚等中医证素上。

总而言之，吸食氯胺酮可导致端粒长度变短，其引起端粒长度的缩短均可体现在中医病理因素上，从而形成相应的证，且本研究认为这些证的形成均参与了毒瘾形成的过程。这为我们后续更进一步的研究以及对中医戒毒治疗提供一定的借鉴和参考。

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R277.7

A

1000-338X（2017）05-0001-03

2017-02-06

国家自然科学基金项目（81373553）

刘新爱（1989—），男，硕士研究生。

杨朝阳（1972—），男，医学博士，副教授。E－mail：yzy813@126.com