透皮吸收促进剂对接骨乳膏体外透皮吸收的影响

吴 彦，王慧娟，俸婷婷，彭礼军，周 英，4*

( 1.贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州大学 中药天然药研发中心，贵州 贵阳 550025；3.贵州省公共资源交易中心，贵州 贵阳 550002；4.贵州省中药材繁育与种植重点(工程)实验室，贵州 贵阳 550025)

透皮吸收促进剂对接骨乳膏体外透皮吸收的影响

吴 彦1，2，3，王慧娟1，2，俸婷婷1，2，彭礼军1，2，周 英1，2，4*

( 1.贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州大学 中药天然药研发中心，贵州 贵阳 550025；3.贵州省公共资源交易中心，贵州 贵阳 550002；4.贵州省中药材繁育与种植重点(工程)实验室，贵州 贵阳 550025)

为了比较不同含量冰片和薄荷油及不同含量氮酮对接骨乳膏体外透皮吸收的影响。以SD大鼠的背部皮肤为透皮实验模型，每隔2 h，以分光光度法测定接收池中总甾酮含量。结果表明：随着冰片、薄荷脑及氮酮含量的增加，单位时间通过单位面积皮肤的药物量逐渐增加。添加0.36 g冰片和0.04 g薄荷脑的接骨乳膏的透皮吸收能力稍强于添加4%氮酮接骨乳膏的透皮吸收能力。选择0.36 g冰片，0.04 g薄荷油作为促透皮吸收剂为较好的选择。

接骨乳膏；透皮吸收；新药研究；冰片；薄荷脑

骨折是指骨或骨小梁的完整性遭到破坏的同时，累及损伤处周围的软组织、关节、肌肉、韧带、血管和神经的一种临床病症。除骨折的特殊体征，同时还产生疼痛与压痛、局部肿胀、瘀癍和功能障碍等其他体征[1]。骨折愈合的过程就是“淤去、新生、骨合”的过程[2]。

接骨乳膏来源于黔东南侗族秘方接骨散，经过多年的临床验证，接骨散配伍

精炼，效果显著。接骨乳膏的透皮吸收量，是其产生药效好坏的关键所在。选择适当的透皮吸收促进剂对接骨乳膏的使用效果影响很大。本实验在接骨散的原组方基础上，加入不同比例的透皮吸收促进剂，即具有促进透皮吸收作用和解热镇痛作用的冰片、薄荷油[3-6]和同样有促进透皮吸收作用的氮酮[7，8]，分别制成乳膏，采用体外透皮渗透性实验，比较具有不同组成和含量冰片、薄荷油及氮酮的接骨乳膏中主要有效成分总甾酮的透皮渗透能力，优选出适合本制剂的透皮吸收促进剂及其比例。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器 TK-12B型透皮扩散试验仪(上海锴凯科技贸易有限公司)；T6紫外可见分光光度计(郑州南北仪器设备有限公司)；FA1104N电子分析天平(上海双电电子有限公司)；改良Franz扩散池(自制)。

1.1.2试药 接骨乳膏(贵州大学生命科学学院自制)。单方一(接骨乳膏主要生药)；单方二(接骨乳膏主要生药)；氮酮(AR，北京化学试剂公司)、高氯酸(AR，北京化学试剂公司)、冰醋酸(AR，北京化学试剂公司)、香草醛(AR，北京化学试剂公司)； 甲醇(HPLC，天津科密欧化学试剂有限公司)、乙腈(HPLC，北京化学试剂公司公司)，水为超纯化水。

1.1.3动物 2个月龄雄性SD大鼠，质量(250±30 g)(普通级，购自贵州医科大学)。

1.2方法

1.2.1皮肤接受液中蜕皮甾酮分析方法的建立

1.2.1.1 对照品溶液制备

精密称取蜕皮甾酮对照品，用色谱甲醇制成5.00 mg/mL的蜕皮甾酮溶液，作为对照品溶液。

1.2.1.2 供试品溶液制备

取样品适量于试管中，加入新鲜配制的50 mg/ml香草醛冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，置60℃水浴15 min，取出放冰水浴中冷却，加入冰醋酸5 mL，摇匀后放置45 min，作为供试品溶液。

1.2.1.3 蜕皮甾酮标准曲线的制备

以色谱甲醇处理后作为空白对照品溶液，取40 μl蜕皮甾酮标准品按1.2.1.2项方法处理后于波长535～590 nm处扫描，检测其最大吸收波长为575 nm，故以575 nm为检测波长。

将制备好的对照品溶液，分别精密移取20、30、40、50、60 μl于试管中，80℃挥发去除溶剂，加入新鲜配制的50 mg/ml香草醛冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，置60℃水浴15 min，取出放冰水浴中冷却，加入冰醋酸5 mL，摇匀后放置45 min，以色谱甲醇为空白对照，按2.1.2处理后测定吸光度。得到线性回归方程A=31.608C-0.302 8，R2=0.999 3。

1.2.1.4 稳定性实验

移取样品溶液，按1.2.1.2项处理，测定吸光度，每间隔1 h测定吸光度，重复六次。RSD为0.14%。表明样品在6小时内稳定。

1.2.1.5 精密度实验

移取6份对照品溶液，按1.2.1.2 项方法操作。测定吸光度，RSD为0.43%。

1.2.1.6 重复性实验

称取同一批样品6份，按1.2.1.2项方法操作。测定吸收度，RSD为1.39%。

1.2.1.7 实验样品制备

分别制备实验样品6份：1号样品含接骨散生药50%，冰片0.09 g，薄荷油0.01 g；2号样品含接骨散生药50%，冰片0.18 g，薄荷油0.02 g；3号样品含接骨散生药50%，冰片0.36 g，薄荷油0.04 g；4号样品含接骨散生药50%，2%氮酮；5号样品含接骨散生药50%，4%氮酮；6号样品含接骨散生药50%。

1.2.2体外透皮吸收实验

1.2.2.1 离体皮肤制备

取SD大鼠10只，采用8%硫化钠脱毛剂脱腹部毛，处死，剥离腹部皮肤，小心剔除皮下脂肪和黏连物，储存在生理盐水中，调整温度至4℃，24 h之内使用。

1.2.2.2 体外透皮实验及计算方法

采用改良 Franz扩散装置，将皮肤平整置于扩散池的结合部，角质层面向供给池，真皮层面向接收池，保持恒温将1、2、3号样品贴剂贴于鼠皮上，接收池加入预热至32℃的接收介质。磁力搅拌子搅拌速度为200 r/min。分别于 1，2，4，6，8，10，12，14 h取样，每次从接收池内取出全部溶液，并补充等量等温的接收介质。取样品溶液1 mL，挥干溶剂后，加1 mL甲醇溶解，再将溶液挥干，残渣按1.2.1.2方法制备后测定甾酮含量，依据所得甾酮含量，分别计算其单位面积药物累积渗透量Q。将Q对时间t进行线性回归，分别得到含不同浓度接骨乳膏的释放方程。得到6份实验样品的体外透皮吸收率。

2 结果与分析

未加入促渗剂的接骨乳膏单位时间通过单位面积皮肤的药物量(J)为0.1267明显低于加入了冰片、薄荷油的三种接骨乳膏。加入低、中、高三种冰片和薄荷油含量的接骨乳膏单位时间通过单位面积皮肤的药物量(J)分别为0.152 0、0.177 2、0.216 9，其数值随着冰片、薄荷油加入量的变大而增高，体外透皮吸收率(Kp)随之增加，见表1和图1。表明冰片和薄荷油有明显促进药物透皮吸收作用，同时其作用与含量成正比。

表1 不同冰片、薄荷油含量的接骨乳膏离体透皮吸收参数Tab.1 Transdermal absorption in differentcomposite ratio of borneol-menthol

图1 不同冰片、薄荷油含量的接骨乳膏离体透皮吸收Q-T曲线图Fig.1 Q-t curve in different composite ratio of borneol-menthol

药样Q-t1/2回归方程rJ(mg/cm2·h)kp(cm-1·h-1)空白对照Q=88977t1/2+14567099170126747142%氮酮Q=10549t1/2+15614099250162060214%氮酮Q=12451t1/2+1540709916019127107

图2 不同氮酮含量的接骨乳膏离体透皮吸收Q-T曲线图Fig.2 Q-t curve in different composite ratio of Azone

未加入促渗剂的接骨乳膏和加入中、高氮酮含量的样品单位时间通过单位面积皮肤的药物量(J)分别为0.1267、0.1620、0.1912，其随着氮酮含量的增大而增加，体外透皮吸收率(Kp)随之增加，如表2和图2所示。表明氮酮有明显促进药物透皮吸收作用，同时其作用与含量成正比。

图3 不同含量氮酮和冰片、薄荷油含量的接骨乳膏离体透皮吸收Q-T曲线图Fig.3 Q-t curve in different composite ratio of Azone and borneol-menthol

为选择较佳的透皮吸收促进剂，通过表1和表2的数据以及图3，比较冰片、薄荷油和氮酮的促药物透皮吸收作用。其中高剂量的冰片、薄荷油样品组的单位时间通过单位面积皮肤的药物量(J)和体外透皮吸收率(Kp)，略高于4%氮酮样品组。促进药物透皮吸收作用为：高剂量冰片、薄荷油样品组﹥4%氮酮样品组﹥中剂量冰片、薄荷油样品组﹥2%氮酮样品﹥低剂量冰片、薄荷油样品组﹥空白对照组。

3 结论与讨论

氮酮有促进药物透皮吸收作用。冰片和薄荷油具有解热止痛的作用[9，10]，并且可增加生药的透皮渗透量[11，12]，其促进药物透皮吸收作用与氮酮类似。冰片和薄荷油两者共同使用，可产生协同作用，进一步加大透皮渗透作用[13]。除此之外，冰片还具有保护中枢神经[14，15]，抗病原微生物的作用[16]，使药物的疗效得到进一步增强，同时可有效治疗骨折引起的软组织和肌肉损伤、炎症。因此在该中药六类新药-接骨乳膏中加入一定比例的冰片和薄荷油。

通过体外透皮吸收实验，探讨接骨乳膏中不同比例冰片和薄荷油的经皮给药作用。本研究结果显示，随着冰片和薄荷油含量的增加，渗透量逐渐增加。其中较佳促透皮吸收的剂量配比为：冰片0.36 g，薄荷油0.04 g。本实验结果显示加入0.36 g冰片、0.04 g薄荷油可增加接骨乳膏透皮吸收的释药量，提高了药物利用度。可见，在接骨乳膏中加入一定比例的冰片和薄荷油，更有利于药物有效成分的有效释放、透皮吸收和协同作用。

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EffecttoComparisonTransdermalAbsorptionofJieguCreaminDifferentTransdermalEnhancer

WUYan1，2，3，WANGHui-juan1，2，FENGTing-ting1，2，PENGLi-jun1，2，ZHOUYing1，2，4*

( 1.collegeoflifescience，GuizhouUniversity，Guiyang，Guizhou550025，China；2.Guizhouresearchcenteroftraditionalchinesemedicineandnaturaldrugs，Guiyang，Guizhou550025，China；3.Guizhoupublicresourcestradecenter，Guiyang，Guizhou550025，China；4.collegeofagriculture，GuizhouUniversity，Guiyang，Guizhou550025，China；)

To comparison transdermal absorption between different composite ratio of Azone and borneol-menthol.Back skin of SD rats were used as the transdermal experiment material. After transdermal absorption， the contents of total phytosterone in the reception tank were measured at regular intervals by spectrophotometry every 2 h.Azone and borneol-Menthol in different concentration can significantly increase it’s permeability，which the best concentration was 0.36 g borneol and 0.04 g Menthol not 4% Azone.The optimal dose proportion is 0.36 g borneol and 0.04 g menthol.

Jiegu cream；transderm delivery；new medicines study；borneol；menthol

2017-02-27；

2017-06-06

教育部新世纪人才支持计划(No.[2014]95)；贵州省优秀青年科技人才培养对象专项(No．[2014]34号)。

*

周 英(1971-)，女，博士，教授，主要研究方向：中药天然药研究；E-mail：yingzhou71@126.com。

R285

A

1008-0457(2017)05-0087-04国际DOI编码10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2017.05.017