不同T淋巴细胞亚群在恶性肿瘤患者外周血中的临床检测价值

张灿强，何继宏，张芳娣，郭劼琳

(1.惠州市惠城区慢性病防治站，广东 惠州 516001；2.惠州市第三人民医院)

不同T淋巴细胞亚群在恶性肿瘤患者外周血中的临床检测价值

张灿强1，何继宏2，张芳娣2，郭劼琳1

(1.惠州市惠城区慢性病防治站，广东 惠州 516001；2.惠州市第三人民医院)

目的探讨恶性肿瘤患者外周血中不同T淋巴细胞检测的临床价值。方法选择在我院接受治疗的147例恶性肿瘤患者作为观察组，选择同期在我院接受体检的健康人群80例作为对照组，检测并比较两组外周血中CD3+、CD4+、CD8+不同亚群T细胞以及CD4+/CD8+水平差异。结果观察组患者治疗前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显低于对照组(P<0.05)，治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显高于治疗前(P<0.05)，但仍明显低于对照组(P<0.05)。观察组患者治疗前后CD8+比较及与对照组之间比较均无明显差异(P>0.05)。观察组内各不同癌症T淋巴细胞水平不受肿瘤类型影响。结论恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群不同指标的检测有助于了解患者的细胞免疫功能状态，从而为患者治疗方案的确定和调整以及治疗效果的评估提供参考依据。

恶性肿瘤；T淋巴细胞亚群；细胞免疫功能

肿瘤的发生和发展已经被大量研究证实与肿瘤宿主的免疫状况密切相关。有研究[1]指出，在机体的抗肿瘤机制中，细胞免疫发挥着主要作用。其中外周血T淋巴细胞是人体抗感染和抗肿瘤反应中的免疫活性细胞之一，T淋巴细胞亚群数量和功能的变化在很大程度上与肿瘤的发生、发展、转移和扩散过程有关[2]。为了进一步了解不同T淋巴细胞亚群在恶性肿瘤患者外周血的变化情况，并探讨其检测对恶性肿瘤诊断、治疗和预后判断等方面的意义，我们分别对恶性肿瘤患者和健康对照人群的外周血T淋巴细胞亚群进行了监测和比较，现将具体结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2014年1月至2016年6月在我院接受治疗的147例恶性肿瘤患者作为观察组，选择同期在我院接受体检的健康人群80例作为对照组。观察组男84例，女63例；年龄14～79岁，平均(53.6±13.9)岁；其中肺癌54例，乳腺癌42例，食管癌31例，白血病20例。健康对照组中男51例，女29例；年龄13～80岁，平均(50.8±10.6)岁。两组研究对象年龄、性别组成等一般资料比较均无明显差异(P>0.05)。

1.2 研究方法

1 2.1 观察指标

所有恶性肿瘤患者均接受对症治疗，包括肿瘤切除、放疗、化疗等，对照组不做处理。观察两组之间治疗前后外周血T细胞亚群分布情况，以及不同类型肿瘤患者治疗前后T细胞亚群分布情况。

1.2.2 仪器与试剂

仪器：37℃恒温水浴箱、微量加样器、低速离心机、FACSA ria流式细胞仪系统。试剂：巯基化藻红蛋白染色的羊抗鼠Ig抗体；纯化单克隆鼠抗人CD3+、CD4+、CD8+；红细胞裂解液；PBS；1%多聚甲醛。

1.2.3 检测方法

取检测对象外周血2mL置于加入EDTA抗凝试管中，充分混匀，分别取100μL置于4个含有Ependorf管中(空白对照、CD3+、CD4+、CD8+)，空白对照管中加入PBS10μL，之后3个试管中加入10μL相应纯化的鼠抗人单克隆抗体，置于37℃恒温水浴箱中孵育1h。PBS清洗细胞后离心，CD3+、CD4+、CD8+管中分别加入巯基化藻红蛋白染色的羊抗鼠Ig抗体10μL，空白对照管中加入PBS10μL，室温条件下避光进行孵育。洗涤离心细胞后，分解加入红细胞裂解液2mL，洗涤后将上清液弃去，加入1%多聚甲醛0.5mL将细胞固定，置于4℃冰箱中避光保存待测。24h内应用FACSA ria流式细胞仪系统进行检测，以阳性细胞百分率表示CD3+、CD4+、CD8+含量。

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 两组患者外周血T细胞亚群检测结果比较

健康人群组及恶性肿瘤组患者在治疗前后两个时间点CD3+、CD4+、CD8+不同亚群T细胞以及CD4+/CD8+水平检测结果具体见表1。根据表1可知，观察组患者治疗前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显低于对照组(P<0.05)；观察组患者治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显高于治疗前(P<0.05)，但仍明显低于对照组(P<0.05)。观察组患者治疗前后CD8+比较及与对照组之间比较均无明显差异(P>0.05)。

与对照组比较，*P<0.05；与治疗前比较，△P<0.05

2.2 不同类型肿瘤患者治疗前后T细胞亚群检测结果比较

肺癌、食管癌、乳腺癌和白血病不同类型恶性肿瘤患者治疗前后T细胞亚群检测结果比较具体见表2。根据表2可知，不同类型恶性肿瘤患者治疗后CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+水平与治疗前相比均明显提高(P<0.05)，而CD8+含量无明显变化(P>0.05)。经方差分析，各肿瘤类型患者之间无显著差异(P均>0.05)。

表2 不同类型肿瘤患者治疗前后T细胞亚群检测结果比较

与治疗前比较，*P<0.05

3 讨 论

肿瘤的发生和发展在现代肿瘤免疫学说中与机体的免疫监视和抗肿瘤免疫应答密切相关，研究指出，T细胞亚群的细胞免疫是机体抗感染、抗肿瘤应答中的主要免疫应答形式，而T淋巴细胞的免疫调控作用就是通过各种功能不同的T淋巴细胞亚群来发挥的[3]。CD3+T细胞代表了成熟的淋巴细胞以及总体T淋巴细胞的水平，其是细胞免疫中的主要活性细胞。CD4+T细胞被称为辅助性T细胞，其主要通过不同细胞因子的分泌和第二活化信号的提供来辅助体液免疫和细胞免疫。但CD4+细胞并不被作为是重要的免疫调节细胞，反而对靶细胞的凋亡有直接的影响作用。CD8+T细胞则具有细胞毒性和免疫抑制作用。CD4+/CD8+比值则反映的是机体细胞免疫功能的状态，正常情况下其保持在动态平衡的状态，表示机体细胞免疫功能相应处于稳定状态，但二者的比值降低时则表示免疫抑制的出现，此时容易发生肿瘤。CD4+/CD8+比值的变化往往可以敏感地反应出机体免疫功能的变化，其比值的下降被认为是提示疾病恶化和预后不良的重要指标之一[4]。

近年来大量研究均证实肿瘤患者外周血中的不同T淋巴细胞亚群含量会发生变化，主要原因是恶性肿瘤的出现及其分泌的某些因子会直接打乱CD3+、CD4+、CD8+含量和CD4+/CD8+比值的平衡，尤其是对CD4+/CD8+比值的影响会导致机体免疫调节反应的紊乱[5]。本研究结果显示的观察组患者治疗前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显低于对照组的这一结果也证实了这一点，提示恶性肿瘤患者普遍存在免疫功能降低，尤其是细胞免疫功能的下降，并进一步表现为执行细胞免疫功能的淋巴数量和功能的变化，机体抗肿瘤的细胞免疫功能的下降是导致肿瘤发生和发展的重要原因之一。作为反映细胞免疫功能的主要细胞，CD3+、CD4+、CD8+等T细胞含量的检测结果可以作为评价疾病进展和预后的有效依据。同时如果及时对患者采取干预措施进行治疗则会转变这一现象。本研究结果显示：观察组患者治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显高于治疗前(P<0.05)，且不同类型恶性肿瘤患者均表现出明显升高的趋势，但与对照组相比仍具有明显差异。提示经过治疗后，不同类型恶性肿瘤患者机体的免疫功能均有不同程度的恢复。

综上所述，恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群不同指标的检测有助于了解患者的细胞免疫功能状态，从而为患者治疗方案的确定和调整以及治疗效果的评估提供参考依据。

[1]王俞,崔书中.恶性肿瘤患者的免疫功能状态及免疫治疗研究进展[J].中国肿瘤临床，2014,41(13):876

[2]MULLER L，MITSUHASHI，SIMMS P，et al.Tumor-derived exosomes regulate expression of immune function-related genes in human T cell subsets[J].Scientific Reports，2016，6:20254

[3]XIN W W，WANG Y，SCHLOEMER N J，et al.Sa1753 altered NK cell homeostasis，NK immune-modulation，and NK tumor suveilance function in a mouse model of colitis and colon adenocarcinoma caused by a targeted mutation in the FX Locus[J].Gastroenterology，2015，148(4):323

[4]施爱军,吴晓柳,沈宗丽,等.常见恶性肿瘤患者机体淋巴细胞亚群和活化T淋巴细胞的分析[J].国际检验医学杂志，2014,35(20):2758

[5]胡小倩,周国芹,王素霞,等.联合检测外周血T淋巴细胞及DNT细胞在恶性肿瘤早期诊断中的应用[J].标记免疫分析与临床，2016，23(2):139

ClinicalDetectionofDifferentTLymphocyteSubsetsinPeripheralBloodofPatientswithMalignantTumor

ZHANG Can-qiang,HE Ji-hong,ZHANG Fang-di,et al

(HuichengHuizhouDistrictChronicDiseasePreventionandControlStation,HuizhouGuangdong516001,China)

ObjectiveTo investigate the clinical value of different T lymphocytes in peripheral blood of patients with malignant tumor.Methods147 cases of malignant tumor patients in our hospital were chosen as the observation group study and 80 cases of healthy people underwent a medical examination in our hospital were selected as the control group.Theb different subsets of T cells of CD3+,CD4+and CD8+and the level of CD4+/CD8+in the peripheral blood were detected and compared in the two groups of subjects.ResultsCD3+,CD4+and CD4+/CD8+in the observation group before treatment were significantly lower than that of the control group(P<0.05).The CD3+,CD4+and CD4+/CD8+in the observation group were significantly higher than those before treatment(P<0.05),but still significantly lower than that of the control group(P<0.05).There was no significant difference in CD8+between the observation group and the control group before and after treatment(P>0.05).The levels of T lymphocytes in the different groups of cancer patients were analyzed and it was found that the levels of T lymphocytes were not influenced by tumor type.ConclusionThe patients with malignant tumor of peripheral blood T cell subsets in different target detection is helpful to understand the cellular immune function of patients,so as to provide reference for the evaluation of treatment.

Malignant tumor;T Lymphocyte subsets;Cellular immune function

R392.13

A

2095-4646(2017)05-0381-03

10.16751/j.cnki.2095-4646.2017.05.0381

2017-01-29)