钩菊胶囊质量标准研究

2017-11-17朱和平韩晓珂王权

中国医药导报 2017年28期

朱和平　韩晓珂　王权

[摘要] 目的建立钩菊胶囊的质量标准。方法薄层色谱法对钩藤、淫羊藿进行定性鉴别；UV-HPLC对淫羊藿苷进行含量测定。采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（25∶75）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长为270 nm。结果薄层色谱中斑点清晰，阴性均无干扰；淫羊藿苷在15～150 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9996），平均回收率为100.9%（RSD=2.77%）。结论本试验结果准确、简便，易控，可作为钩菊胶囊的质量标准。

[关键词] 钩菊胶囊；薄层鉴别；淫羊藿苷；含量测定

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）10（a）-0031-04

[Abstract] Objective To establish the quality standard of Gouju Capsules. Methods The main ingredients of Ramudus Uncaria Cum Uncis， Epimedium were identified by TLC. Content of icariin was determined by UV-HPLC. The content of the berberine was determined by HPLC； the column of Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm， 5 μm） was used. The mobile phase was ocetonitrile-water （25∶75）， the column temperature of 30℃， at the flow of 1.0 mL/min and detection wavelength was 270 nm. Results The spots on TLC plates were distinct， without interference. A good linearity of icariin was in the ranges of 15-150 μg/mL （r=0.9996）. The average recovery was 100.9% （RSD =2.77%）. Conclusion The results of this experiment are accurate， simple and easy to control. It can be used as a quality standard for Gouju Capsules.

[Key words] Gouju Capsules； TLC； Icariin； Content determination

近年來，随着人们物质生活水平的不断提高，高血压的患病率也逐年升高，因此，开发有效治疗高血压的药物具有重要意义，临床常用的各类西药降压药需终生服药，且存在血压易反弹、波动，毒副作用大等缺点，不利于高血压患者的康复，对人体具有极大的危害性，而中药作为民族的瑰宝，在治疗高血压方面有其优越性。

钩菊胶囊（原名：山菊稳压胶囊）是根据芜湖市中医医院名老中医郑梅生主任的临床经验总结的降压稳压方，在临床运用多年，疗效显著，毒副作用小，降压平稳和缓，得到广大患者的一致好评；拟将本方研发注册成为医疗机构制剂，更好地应用于临床，方便患者使用，本文的质量标准研究作为该制剂研究的一部分，为该药品的质量提供保证。本方由野菊花、钩藤、罗布麻叶、淫羊藿药味组成，具有平肝熄风、清热降火的作用，症见头胀头痛、面赤、眩晕、烦躁失眠等。作者对本方中钩藤、淫羊藿进行了薄层鉴别，以淫羊藿苷为指标性成分对制剂进行了含量测定。

1 仪器与试药

安捷伦1200高效液相色谱仪（Agilent Technologies）；KQ-500DB超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；XP-205电子天平（Metiler Toledo）；淫羊藿苷（中国药品生物制品检定研究院，110737-201516）；钩藤对照药材（中国药品生物制品检定研究院，批号121190-201204）；淫羊藿对照药材（中国药品生物制品检定研究院，批号121632-201502）；硅胶G薄层板（由青岛海洋化工厂提供），乙腈（HPLC/Spectro，Tedia公司）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯[1]。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 钩藤鉴别本品20粒，取内容物约3 g，加70%乙醇超声，1 h后，滤过，蒸干滤液，残渣加乙醇2 mL，溶解，得到供试品溶液。另取钩藤对照药材1 g，同上法得到对照药材溶液[2-5]。取除钩藤外的其他味药材饮片，按钩菊胶囊的处方工艺制成阴性样品，以与制备供试品溶液相同的方法制得阴性对照品液。按照《中国药典》2015年版薄层色谱法，吸取上述三种溶液各10 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（19∶1）作为展开剂展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点清晰。供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点，阴性色谱相应位置上无此斑点。见图1。

2.1.2 淫羊藿鉴别取本品内容物5 g，加入50 mL乙醇，超声30 min，滤过，将滤液蒸干，所得的残渣加水60 mL，振摇使其溶解，然后用水饱和的正丁醇萃取4次，每次均为40 mL，合并正丁醇萃取液，用5%氢氧化钠溶液洗涤2次，每次均为50 mL，再用水洗涤2次，每次均为30 mL，洗涤后的正丁醇萃取液水浴下蒸干，剩下的残渣加入2 mL甲醇，使其溶解，即为供试品溶液。称取淫羊藿苷对照品适量，加入一定量的甲醇，制成淫羊藿苷浓度为1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液[6-12]。取除淫羊藿外的其他味药材饮片，按照钩菊胶囊的处方工艺制成阴性样品，用与制备供试品溶液相同的方法，制得阴性对照液。按照《中国药典》2015年版薄层色谱法，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，将三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）混合，振摇，放于10℃下静置，以该静置液的下层溶液作为展开剂，展开，喷以10%硫酸乙醇液，在105℃下加热至斑点清晰。供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点，阴性色谱相应位置上无此斑点。见图2。endprint

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-水（25∶75）为流动相；检测波长为270 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2000[13-19]。

2.2.2 对照品溶液取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加入甲醇制成淫羊藿苷浓度为30 μg/mL的溶液。

2.2.3 供试品溶液精密称定1 g本品内容物，置锥形瓶中，加入25 mL的50%乙醇溶液，密塞，称定重量，超声30 min后，冷却，再称定重量，用50%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.2.4 阴性对照溶液按本品制法，除处方中淫羊藿，制成阴性样品，然后按照“2.2.3”项下相同的方法制成阴性对照溶液。

2.2.5 专属性试验吸取供试品溶液，淫羊藿苷对照品溶液和阴性对照溶液各适量，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图3，结果显示，淫羊藿苷的峰与其他组分峰的分离度>1.5。图谱显示，阴性对照溶液在相应位置未出现色谱峰，证明该方法专属性较好，测定无干扰。

2.2.6 线性关系考察取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，15.00 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀，即得150 μg/mL的对照品溶液。从对照储备液（150 μg/mL）中分别精密移取对照品各0.5、1、2、3、4 mL置5 mL容量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，摇匀，配成6种浓度的对照品溶液，分别为15、30、60、90、120、150 μg/mL，取适量，用0.45 μm微孔滤膜滤过，进样量10 μL。以进样溶液的浓度为横坐标（X），液相所得的峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线。回归方程为Y=34.716X-52.024，r2=0.9991，结果表明淫羊藿苷在15～150 μg/ml范围内呈现良好的线性关系。

2.2.7 日内精密度试验精密吸取供试品溶液10 μL，于1 d内连续进样6次，测定色谱峰峰面积。结果色谱峰峰面积的RSD值为0.6%。试验证明日内精密度良好。

2.2.8 日间精密度试验精密吸取供试品溶液10 μL，连续进样3 d，每天进样3次，测定色谱峰峰面积。结果色谱峰峰面积的RSD值为0.8%。试验结果证明该方法的日间精密度良好。

2.2.9 稳定性试验精密吸取供试品溶液10 μL，分别于0、2、4、6、8、10 h进样，测定色谱峰峰面积。结果色谱峰峰面积的RSD值为0.6%。试验结果表明该供试品溶液在10 h内稳定。

2.2.10 重复性试验取同一批次的钩菊胶囊，按样品测定下的方法测定样品中淫羊藿苷的含量。结果淫羊藿苷含量的平均值（n=6）为1067.1 μg/g，RSD值为0.68%。试验证明重复性良好。

2.2.11 加样回收试验取装量差异项下的本品内容物，6份，各约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入150 μg/mL的淫羊藿苷对照品溶液3.5 mL，按“2.2.3”项下方法制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，分别进样，测定淫羊藿苷的含量，计算淫羊藿苷的加样回收率，试验结果见表1。结果表明，用本法测定样品中淫羊藿苷的含量回收率良好。

2.2.12 钩菊胶囊样品的含量测定取三个不同批次的钩菊胶囊样品各适量，按“2.2.3”项下的方法，制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，分别进样，计算含量，结果见表2。

3 讨论

在试验过程中，选用了Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）和Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）两种不同色谱柱进行液相测定，结果均有较好的分离度，且峰形较好，表明该方法的耐用性良好；在色谱条件的研究摸索过程中，曾考察以乙腈-水（27∶73）为流动相，结果淫羊藿苷分离度达不到要求；考察以乙腈-水（27∶73）为流动相，分离度达到要求，但是保留时间较短，考虑到前面杂质峰在检测过程中可能对基线造成影响，故又选择考察以乙腈-水（25∶75）为流动相，结果分离度及基线均符合要求；对照品打开后，放置时间较长，有轻微的吸湿，造成加样回收率的测定结果稍微偏高。

钩菊胶囊为治疗阴虚阳亢型高血压病的有效方剂，朱琳等[20]曾指导研究本制剂对自发性高血压大鼠的降压作用，结果本制剂有平稳降压、降低血压黏度、改善心肌肥厚等作用，且对肝肾功能无明显毒副作用。

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