两种高脂高糖乳脂配方复制高脂血症大鼠模型的比较

严家荣，梁志健，王 弋，刘盛来，李金凤，唐小江

(广东省医学实验动物中心，广东佛山 528248)

两种高脂高糖乳脂配方复制高脂血症大鼠模型的比较

严家荣，梁志健，王 弋，刘盛来，李金凤，唐小江*

(广东省医学实验动物中心，广东佛山 528248)

比较两种高脂乳脂配方复制高脂血症模型大鼠的血脂、肝重及肝病理的变化，为高血脂症的预防、治疗以及研究选择合适的动物造模方法。比较两次试验中，正常对照1组和高脂高糖乳剂1组、正常对照2组和高脂高糖乳剂2组SD大鼠，10只/组，按10 mL/kg分别给予相应的高脂高糖乳剂连续造模40 d，正常对照组则给予等量纯净水，分别于造模前、造模10 d、造模40 d时测定大鼠体重、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)含量及HDLC/TC比值，并测定肝脏重量以及肝脏病理组织学的变化。结果显示，与相应的正常对照组比较，第一次试验中的高脂高糖乳脂1配方造模40 d，可使血脂含量升高，肝脏细胞脂肪变性，第二次试验中的高脂高糖乳脂2配方造模40 d，只能使血脂含量升高，未见肝细胞脂肪变性。与高脂高糖乳脂1组相比，高脂高糖乳脂2组造模40 d体重下降幅度较小(P<0.05)，TC、TG、LDLC含量升高幅度较少(P<0.05)，HDLC/TC比值降低幅度较少(P<0.05)，肝脏重量增大幅度较大(P<0.05)，肝脏系数增大幅度较少(P<0.05)，肝脏未产生肝细胞脂肪变性。结果表明，第一次试验中的高脂高糖乳剂1配方可以制作混合型高脂血症伴脂肪肝大鼠模型，第二次试验中的高脂高糖乳脂2配方可以制作混合型高脂血症大鼠模型。

高血脂症；动物模型；高脂高糖乳剂

随着人们饮食结构的改变以及生活节奏的加快，运动量相对减少，导致高血脂症发病率升高，而且呈现年轻化的趋势[1]。因此，如何防治高血脂症成为国内外学者研究的热点，目前国内有采用脂肪乳剂灌胃法复制高脂血症大鼠模型，由于脂肪乳剂成分不一、含量各不相同，复制出的大鼠模型血清TG的升高与否各文献报道不一[2-5]。本文通过回顾性分析高脂高糖乳剂两种配方复制大鼠高脂血症大鼠模型血清总胆固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(glycerin trilaurate，TG)、高密度脂蛋白胆固醇( high-density lipoprotein cholesterol,HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇( low-density lipoprotein cholesterol,LDLC)的影响及肝脏病理组织学的差异，以期找到适合研究者需求的造模方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级雄性Spraque-Dawley大鼠40只，140 g～200 g，来自广东省医学实验动物中心[SCXK(粤)2008-0002]。动物饲养于广东省医学实验动物中心SPF级动物房[SYXK(粤)2008-0002]，并按照实验动物使用的3R原则给予人道的关怀。

1.1.2 主要试剂 TC和TG试剂盒，北京康思润业生物技术有限公司产品，批号分别为101109、120118和101108、110825；HDLC和LDLC试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司产品，批号分别为20110303、20110425和20110312、20110604；吐温-80，天津福晨化学试剂厂产品，批号为20110706；胆固醇和胆盐，广州威佳科技有限公司产品，批号分别为20110701、20110703；精炼猪油，广州市加益食品有限公司产品，批号为20110806；丙赛优(丙硫氧嘧啶片)，广东华南药业集团有限公司产品，批号为110301；果糖，广州威佳科技有限公司产品，批号20110101；蛋黄粉，南通康德生物制品有限公司产品，批号为20110105。

1.1.3 主要仪器 BS-3000A电子分析天平，感量0.1 g，上海友声衡器有限公司产品；Mikr020台式离心机，德国Hettich公司产品；HWS-28电热恒温水浴锅、UV-2100紫外分光光度计，广州市正一科技有限公司产品；TS-12N生物组织全自动脱水机、BM-VII生物组织包埋机及冷冻机、CS-VI摊片烤片机、RS-18生物组织全自动染色机，湖北孝感医用仪器有限公司产品；BX41病理图像分析系统，日本奥林巴斯公司产品；ECHO全自动血液生化分析仪，意大利LOGOTECH公司产品。

1.2 方法

1.2.1 模型的建立

1.2.1.1 高脂高糖乳剂1配方 取猪油20 mL放入200 mL的烧杯中，放在磁力搅拌器上加热，待温度升到100℃时，加入10 g胆固醇，溶化，加入1 g蛋黄粉，再加入1 g丙赛优，充分搅匀，然后加入20 mL吐温80，制成油相。同时在另一烧杯中加入40 mL蒸馏水、20 mL丙二醇和30 g果糖，放在电炉上加热至60℃，然后加入2 g胆酸钠，充分搅拌直到完全溶解，制成水相。然后将水相加入油相，充分混匀，即制成200 mL/L猪油、100 g/L胆固醇、20 g/L胆酸钠、10 g/L蛋黄粉、10 g/L丙赛优和300 g/L果糖的高脂高糖乳剂。分装置于4℃冰箱保存，使用时用37℃水浴解冻灌胃[6]。

1.2.1.2 高脂高糖乳剂2配方 操作同配方1，仅不添加丙赛优，制成200 mL/L猪油、100 g/L胆固醇、20 g/L胆酸钠、10 g/L蛋黄粉和300 g/L果糖的高脂高糖乳剂。

1.2.1.3 造模方法 大鼠适应性饲养3 d后，高脂高糖乳剂1组大鼠和高脂高糖乳剂2组大鼠按1 mL/kg体重经口灌服相应的高脂高糖乳剂，其余大鼠均给以等量纯净水，连续造模40 d。所有试验大鼠采血前禁食12 h，不禁水，分别于造模前、造模10 d、造模40 d经眼眶静脉丛采血，室温静置30 min，3 000 r/min离心10 min取上层血清备检。造模结束后取肝脏组织称重完后于100 mL/L福尔马林固定液中固定，进行病理组织形态学检查。

1.2.2 生化指标检测 测定血清TC、TG、HDLC、LDLC含量及计算HDLC/TC比值。

1.2.3 病理学检查 100 mL/L甲醛固定液中固定肝脏组织标本，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察肝脏病理学改变。

2 结果

2.1 体重的变化

表1结果表明，与正常对照1组相比，高脂高糖乳脂1组大鼠造模40 d体重明显下降(P<0.05)；与正常对照2组相比，高脂高糖乳脂2组大鼠造模10 d、40 d体重均有所下降(P<0.05)；与高脂高糖乳脂1组大鼠比较，高脂高糖乳脂2组大鼠造模40 d体重下降幅度较轻(P<0.05)。结果提示，高脂高糖乳脂配方1、配方2均可以引起动物体重下降，但配方2组的大鼠体重下降明显低于配方1组，这与配方2不含有丙赛优有关。

表1 各组大鼠体重的变化Table 1 Changes of the body weight of rats in each group

注：与正常对照1组相比，△P<0.05；与正常对照2组相比，*P<0.05；与高脂高糖乳脂1组相比，#P<0.05。
Note：Compared with normal control group 1，△P<0.05;Compared with normal control group 2，*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 2，#P<0.05.

2.2 血脂的变化

表2～表6结果表明，与正常对照1组相比，高脂高糖乳剂1组TC、TG、LDLC含量在造模10 d和40 d均显著升高(P<0.05)，HDLC含量在造模40 d显著升高(P<0.05)，在造模10 d不显著升高(P>0.05)，HDLC/TC比值在造模10 d和40 d均显著下降(P<0.05)；与正常对照2组相比，高脂高糖乳剂2组TC、TG、HDLC、LDLC含量在造模10 d和40 d均显著升高(P<0.05)，HDLC/TC比值在造模10 d和40 d均显著下降(P<0.05)；与高脂高糖乳脂1组大鼠比较，高脂高糖乳脂2组大鼠TC、HDLC、LDLC在造模40 d的含量降低幅度较轻(P<0.05)，TG含量在造模40 d不显著增加(P>0.05)，HDLC/TC比值在造模10 d和40 d下降幅度均较低(P<0.05)。结果提示，高脂高糖乳脂配方1可引起动物大幅度升高血脂含量，而配方2引起的血脂升高较平缓。

2.3 肝脏的变化

表7结果表明，试验结束后，与正常对照1组相比，高脂高糖乳剂1组肝脏重量显著降低(P<0.05)，肝脏系数显著升高(P<0.05)；与正常对照2组相比，高脂高糖乳剂2组肝脏重量及肝脏系数均显著升高(P<0.05)；与高脂高糖乳脂1组大鼠比较，高脂高糖乳脂2组大鼠肝脏重量显著升高(P<0.05)，肝脏系数则升高幅度较低(P<0.05)。结果提示，配方1虽可引起动物肝脏系数的升高，但未能增大肝脏重量，而配方2可同时引起肝脏重量、肝脏系数的增加，但肝脏系数增加的幅度没有配方1的严重。

2.4 肝脏组织病理学观察

2.4.1 肝细胞脂肪变性评分标准 0分：含脂滴的肝细胞散在稀少(图1A)； 1分：含脂滴的肝细胞≤1/4(图1B)；2分：含脂滴的肝细胞>1/4且≤1/2(图1C)； 3分：含脂滴的肝细胞>1/2且≤3/4(图1D)。

注：与正常对照1组相比，△P<0.05；与正常对照2组相比，*P<0.05；与高脂高糖乳脂1组相比，#P<0.05。
Note：Compared with normal control group 1，△P<0.05;Compared with normal control group 2，*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1，#P<0.05.

表3 各组大鼠TG的变化Table 3 Changes of rat TG levels in each group

注：与正常对照1组相比，△P<0.05；与正常对照2组相比，*P<0.05。
Note：Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05.

表4 各组大鼠HDLC的变化Table 4 Changes of rat HDLC levels in each group

注：与正常对照1组相比，△P<0.05；与正常对照2组相比，*P<0.05；与高脂高糖乳脂1组相比，#P<0.05。
Note：Compared with normal control group 1，△P<0.05;Compared with normal control group 2，*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1，#P<0.05.

表5 各组大鼠LDLC的变化Table 5 Changes of rat LDLC levels in each group

注：与正常对照1组相比，△P<0.05；与正常对照2组相比，*P<0.05；与高脂高糖乳脂1组相比，#P<0.05。
Note：Compared with normal control group 1，△P<0.05;Compared with normal control group 2，*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1，#P<0.05.

表6 各组大鼠HDLC/TC的变化Table 6 Changes of rat the ratio of HDLC and TC in each group

注：与正常对照1组相比，△P<0.05；与正常对照2组相比，*P<0.05；与高脂高糖乳脂1组相比，#P<0.05。
Note：Compared with normal control group 1，△P<0.05;Compared with normal control group 2，*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1，#P<0.05.

A.含脂滴的肝细胞散在稀少(记0分);B.含脂滴的肝细胞≤1/4(记1分);C.含脂滴的肝细胞>1/4且≤1/2(记2分));D.含脂滴的肝细胞>1/2且≤3/4(记3分)
A.Hepatic cells with less lipid droplets(0 score) ;B.Hepatic cells with lipid droplets≤1/4(1 score);C.Hepatic cells with lipid droplets were >1/4 and ≤1/2(2 scores) ;D.Hepatic cells with lipid droplets >1/2 and ≤3/4(3 scores)
图1肝细胞脂肪变性评分(HE，200×)
Fig.1 The degree of hepatic steatosis(HE，200×)

表7 各组大鼠肝脏重量、肝脏系数的变化Table 7 Changes of the liver weight and liver index in each group

注：与正常对照1组相比，△P<0.05；与正常对照2组相比，*P<0.05；与高脂高糖乳脂1组相比，#P<0.05。
Note：Compared with normal control group 1，△P<0.05;Compared with normal control group 2，*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1，#P<0.05.

2.4.2 肝脏HE染色结果 表8评分结果表明，高脂高糖乳剂1组可引起肝细胞脂肪变性(P<0.05)，高脂高糖乳脂2组不能引起肝细胞脂肪变性(P>0.05)。结果提示，高脂高糖乳脂配方1可引起肝细胞的脂肪变性，配方2只能引起血脂的变化未能造成肝细胞的脂肪变性。

表8 各组肝细胞脂肪变性评分Table 8 The degree of hepatic steatosis in each group

3 讨论

在流行病学调查中显示，高血脂症模型动物血清中TG的升高主要与高糖饮食有关。因此，本试验采用了含有200 mL/L猪油、100 g/L胆固醇和300 g/L果糖的高脂高糖乳脂进行复制高脂血症大鼠模型。但配方1和配方2的成分略有不同，配方2不含有10 g/L的丙赛优。

研究结果显示，配方1复制的高脂血症模型大鼠体重明显下降，TC、LDLC含量均显著升高，TG、HDLC均升高，HDLC/TC比值显著下降，肝脏重量减轻，肝脏系数增加，所有大鼠的肝细胞均发生不同程度的脂肪变性，提示该配方的造模方式可以复制混合型高脂血症合并脂肪肝大鼠模型，但与理想的高脂血症模型尚有差距。模型大鼠体重、肝重并不相应增加，主要是与配方1含有10 g/L的丙赛优及高脂高糖饮食有关。丙赛优是甲状腺的阻断剂，通过抑制甲状腺内过氧化物酶，从而抑制甲状腺激素的合成，影响脂质代谢，促使TC和LDLC增高，HDLC降低，但会降低大鼠的食欲及活动。尽管配方1可以复制混合型高脂血症合并脂肪肝大鼠模型，但由于可以导致大鼠体重明显下降，大鼠的正常食欲及活动均受影响，并不能很好地模拟人类疾病的病情和病程，而且血脂含量升高幅度较大，不利于降血脂药物的筛选。

配方2复制的高脂血症模型大鼠体重下降幅度低，TC、TG、HDLC、LDLC含量升高幅度较少，HDLC/TC比值下降幅度低，肝脏重量、肝脏系数均有所增加，但所有大鼠的肝细胞均未见脂肪变性，提示该配方该造模方式只能复制轻度高脂血症大鼠模型，并不能引起肝细胞脂肪变性。模型大鼠的肝脏重量、肝脏系数均有所增加，但大鼠体重还是略有下降，这与高脂高糖饮食有关。该配方复制的混合型高脂血症大鼠模型血脂含量升高幅度较少，是比较适合降血脂药物的筛选，如果想复制高脂血症合并脂肪肝大鼠模型的话，则需要延长造模时间或调整配方含量。

配方1和配方2造模10 d的血脂含量均有所增加，提示高脂高糖乳脂造模10 d后,即可形成高脂血症大鼠模型，可以进行药物的降血脂治疗研究。

[1] 王陇德.中国居民营养与健康状况调查报告之——2002 综合报告[M].北京：人民卫生出版社,2007:53-64.

[2] 由 宏,郝 睿,赵功玲,等.白萝卜提取物对大鼠非酒精性脂肪肝的药效作用[J].食品科学,2011，32(7):300-304.

[3] 朱艳媚,多 杰,陈秋红.金诃降脂胶囊对高脂血症大鼠血脂和血液流变学的影响[J].青海医学院学报,2004，,2(2):101-103.

[4] 林卓慧,熊 颖.决明子提取物对高血脂大鼠模型血脂的影响[J].新中医,2010,42(7):111-112.

[5] 刘绍东,张艳秋,张琴英.红车轴草提取液对实验性高脂血症大鼠血脂的影响[J].陕西中医,2009(10):1431-1432.

[6] Zou Y H,Li J,Lu C,et al.High-fat emulsion-induced rat model of nonalcoholic steatohepatitis[J].Life Sci,2006,79(11):1100-1107.

ComparisonofTwoModelsofHyperlipidemiabyTowKindsofHigh-fatandHing-sugurEmulsionsinRats

YAN Jia-rong，LIANG Zhi-jian，WANG Yi，LIU Sheng-lai，LI Jin-feng，TANG Xiao-jiang

(GuangdongMedicalLaboratoryAnimalCenter，Foshan,Guangdong,528248，China)

The aim of this study was to compare the blood fat,liver weight and liver histopathological lesions of two kinds of hyperlipidemia rat models,and to provide a better animal model for the prevention and treatment of hyperlipidemia.In two experiments,animals in normal control first group and high-fat and high-sugar first group,animals in normal control second group and high-fat and high-sugar second group,animals in high fat and high-sugar group were fed with high-fat and high-sugar diet in 40 days.During the experimental stage,the body-weight, serum total cholesterol (TC),triglycerides (TG), high density lipoprotein cholesterol (HDLC),low density lipoprotein cholesterol (LDLC) and the value of HDLC/TC before treatment and treatment for 10 days and 40 days in rats were detected,and the liver weight，live relative weight and liver histopathological lesions were recorded.The results showed that compared with normal control group,after 40 days,high-fat and high-sugar first group can make the serum lipid increase significantly (P<0.05) and make the liver cell fatty degeneration,while high-fat and high-sugar second group can make the serum lipid increase significantly (P<0.05) and have no liver cell fatty degeneration.Compared with high-fat and high-sugar first group,after 40 days,high-fat and high-sugar second group can make the body weight decrease slightly (P<0.05),the serum TC,TG,LDLC increase slightly (P<0.05),HDLC/TC decrease slightly (P<0.05),the liver weight increase significantly (P<0.05) and the live relative weight increase slightly (P<0.05),but have no fatty degeneration in liver.We found that high-fat and high-sugar in first formula can make the combined hyperlipidemia and fatty liver model in the first experiments,while high-fat and high-sugar in second formula only can make the combined hyperlipidemia in the second experiments..

Hyperlipidemia;animal model;high-fat and high-sugar emulsion

2017-02-04

广东省医学科研基金项目(B2014060)；广东省科技计划项目(2016A030303026)

严家荣 (1981- )，男，广东阳春人，硕士，助理研究员，主要从事人类疾病动物模型研究。*

S852.33

A

1007-5038(2017)10-0038-05