2013年—2015年湖北省规模化蛋鸡场新城疫疫苗免疫效果调查

周 鹏, 郑海红，墨海峡，欧阳金旭, 杨玉莹, 江 涛,汪招雄*

(1.长江大学动物科学学院，湖北荆州 434025；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232；3.湖北省荆州市畜牧兽医局，湖北荆州 434020)

2013年—2015年湖北省规模化蛋鸡场新城疫疫苗免疫效果调查

周 鹏1△, 郑海红2△，墨海峡2，欧阳金旭3, 杨玉莹1, 江 涛1,汪招雄1*

(1.长江大学动物科学学院，湖北荆州 434025；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232；3.湖北省荆州市畜牧兽医局，湖北荆州 434020)

为了解近年来湖北省规模化蛋鸡场新城疫(Newcastle disease，ND)疫苗的免疫效果，从2013年6月到2015年12月在湖北省规模化蛋鸡场随机采集6 989份血清样本,用血凝抑制试验(hemagglutination inhibition，HI)测定NDV抗体滴度，并对不同年份和月份样本的抗体滴度进行统计分析。结果显示，2013年样本的NDV平均抗体滴度最低，为 9.2log2，2014年样本的平均抗体滴度最高，为10.0log2，2015年的为9.8log2。在2013年的7个月中，9月份样本的平均抗体滴度最低，为8.5log2，8月份样本的平均抗体滴度最高，为9.8log2；在2014年的样本中，1月份样本的平均抗体滴度最低，为8.3log2，5月份的最高，为12.3log2；2015年12月样本的抗体平均滴度最低，为8.9log2，11月的最高，为12.7log2。从日龄来看，120日龄～300日龄的鸡只NDV平均抗体滴度较为稳定，而小于120日龄和大于300日龄鸡只的抗体滴度呈现较大幅度波动。总体上所有样本的NDV抗体平均滴度均大于9log2，说明湖北省NDV的免疫水平良好，对鸡群具有较好的保护能力。

新城疫病毒；规模化蛋鸡场；抗体滴度；免疫效果

新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的鸡和火鸡的急性高度传染性疫病，也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，主要表现呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血等症状。该病于1926年首次在印尼发生，同年在英国新城被确定，故而命名为新城疫[1]。本病在世界各地均有发生，我国有关本病的最早记载在1928年。在国际动物卫生法典中，本病与高致病性禽流感同属A类疫病[2]。虽然已投入了大量的人力、物力来研究鸡新城疫的各个方面, 并采取普遍预防接种和其他综合性防控措施,大大减少了该病所造成的损失, 但是鸡新城疫仍然是我国家禽的头号疫病[3]。

在目前养殖条件下，很多养禽场免疫程序不合理、免疫失败和免疫带毒现象经常出现。同时，不合理的免疫程序往往导致免疫抑制和免疫耐受的产生，反过来又干扰和抑制免疫应答。免疫接种是控制ND的重要措施，而科学合理的免疫程序是确保免疫效果的关键。随着疫苗的广泛应用，近年来ND的流行已得到明显控制。但由于我国养殖模式多样，生物安全水平不一且鸡群免疫程序混乱，免疫鸡群仍经常发生ND[4-6]。疫苗接种是目前预防鸡新城疫的主要方法[7]，对疫苗免疫后抗体水平的监测则是了解免疫效果的有效方法。条件允许的情况下，需对新城疫疫苗的免疫效果进行监测与评估，并根据鸡群免疫抗体水平的高低，决定何时需要加强免疫或者对免疫程序进行相应调整[8]，因此及时对疫苗免疫效果进行准确检测尤为必要。本研究从2013年6月—2015年12月共采集湖北省规模化蛋鸡场蛋鸡血清样本6 989份，采用血凝抑制试验检测样本的NDV抗体效价，分析鸡群的ND整体防疫水平，为蛋鸡养殖场对ND的防疫提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 材料

NDV血凝抑制试验标准抗原和阳性血清,购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所；8.5 g/L生理盐水， PBS液，38 g/L柠檬酸钠抗凝剂，自制。2013年6月—2015年12月在湖北省武汉、荆州、荆门、宜昌、襄阳、仙桃、黄冈等市选择规模化蛋鸡养殖场随机检测样本6 989份，其中2013检测样本1 892份数据，2014检测样本2 335份，2015年检测样本2 762份。

1.2 方法

1.2.1 血液采集及血清制备 对湖北省规模化蛋鸡场的鸡只进行随机采血，每只翅下静脉采血2 mL，共采集血样6 989份。采集血样静置1 h，待血清析出后，3 000 r/min离心5 min，取上层血清待检。

1.2.2 10 mL/L红细胞悬液制备 无菌采集健康非免疫公鸡血液，放入抗凝剂混匀。混合液放入离心机3 000 r/min离心5 min，吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜后，在离心管中加生理盐水，慢慢混合均匀，3 000 r/min离心5 min，弃去上清液，按照上述方法反复操作4次～5次，直到上清液透明，最后一次离心后的红细胞，弃去上清液，用红细胞泥配制10 mL/L红细胞悬液。

1.2.3 4单位抗原配制 取出冻干的浓缩抗原，加入2 mL～3 mL生理盐水稀释融化后，测其抗原效价，以能够完全引起血凝的病毒最高稀释度视作抗原的效价，此稀释度为1个HA单位抗原，以此稀释度配制4个HA单位抗原。

1.2.4 待检样品测定 根据血凝抑制试验的方法及操作规范对血清样品进行检测，同时设置阴性血清和阳性血清对照[9]。

1.2.5 结果判定 在红细胞对照出现完全沉淀、病毒对照出现完全凝集的情况下，将反应板作45°倾斜，从反应板背侧进行读数[10]。

2 结果

2.1 2013年—2015年湖北省规模化蛋鸡场整体NDV抗体滴度分析

对2013年—2015年湖北省规模化蛋鸡场血清样本NDV平均抗体滴度进行统计分析显示，2013年样本的抗体平均滴度最低，为9.2log2；2014年最高，为10.0log2，2015年为9.8log2。2013年样本的平均抗体滴度均大于9log2，说明2013年疫苗免疫后对鸡群具有较好的保护能力。

2.2 2013年—2015年不同月份湖北省规模化蛋鸡场鸡群NDV抗体滴度

对2013年6月—12月共7个月时间采集的1 892份样本检测数据进行分析显示，8月份样本的NDV平均抗体滴度最高，为9.8log2,9月份最低，为8.5log2。7月、9月的平均值较低，低于7个月所有样本的平均值9.2log2，9月、11月和12月的样本中有少量样本的抗体滴度低于6log2，其中11月份的最多(表1)。

对2014年的2 335份样本的抗体滴度检测数据进行分析显示，1月份的最低，平均值为8.3log2，5月份最高，平均值为12.3log2。其中1、2、7、8、10月样本的抗体平均滴度低于10.0log2，部分样本的低于6log2(表2)。

对2015年的2 762份样本的抗体滴度检测结果分析显示，以12月份样本的抗体平均滴度最低，为8.9log2，以11月份样本的抗体平均滴度最高，为12.7log2，1、3、6、7、8、12月份样本的平均值低于12个月所有样本的平均值9.8log2，少部分样本的低于6log2(表3)。

表1 2013年不同月份蛋鸡NDV抗体滴度Table 1 The antibody titers of NDV in different months in 2013

表2 2014年不同月份蛋鸡NDV抗体滴度Table 2 The antibody titers of NDV in different months in 2014

表3 2015年不同月份蛋鸡NDV抗体滴度Table 3 The antibody titers of NDV in different months in 2015

对2013年—2015年3年间共6 989份样本NDV抗体滴度分析显示，2013年7个月的数据平均值9.2log2,整体低于2014年和2015年，2014年1、2、7月份的数据与全年的相比偏低。2015年除去11月份，整体呈波动较为平缓。2013年在8月和9月的数据偏低，2013年较2014年和2015年略低(图1)。

2.3 2013年—2015年湖北省规模化蛋鸡场不同阶段蛋鸡ND抗体滴度分析

2013年—2015年间，日龄小于300 d鸡只的抗体滴度小于6log2的较多，数值差异较大；日龄大于300 d的鸡群，NDV的抗体滴度几乎都大于6log2。2014年，处于300日龄以下的鸡群的抗体滴度小于6log2的偏多，2015年，处于120日龄～300日龄鸡群的抗体滴度小于6log2的偏多(表4)。

图1 2013年—2015年不同月份NDV平均抗体滴度分布图Fig.1 The average antibody titers of NDV in different months from 2013 to 2015

对2013年—2015年间不同日龄蛋鸡的NDV抗体滴度检测结果分析发现，2013年—2015年，在日龄小于120 d的阶段，抗体平均滴度呈现递增现象；在120日龄～200日龄阶段，2014年抗体平均滴度最高，2015年次之，2013年最低；在200日龄～300日龄阶段，2013年抗体平均滴度最低，2014年和2015年抗体平均滴度无太大差距；在日龄大于300 d的阶段，2013年和2015年抗体平均滴度较2014年有着较为明显的差距。另外还发现，在这3年中，处于120日龄～300日龄的鸡群NDV抗体滴度较为平稳，无太大波动，而在小于120日龄和大于300日龄的时间段，2013年—2015年平均抗体滴度均有较为明显的变化和差异。这3年中，不同阶段样本的抗体平均滴度均在8log2以上，说明了2013年—2015年来湖北省蛋鸡场整体的NDV免疫效果良好(图2)。

表4 2013年—2015年不同阶段蛋鸡NDV抗体滴度Table 4 The antibody titers of NDV in different days of ages from 2013 to 2015

图2 2013年—2015年不同阶段蛋鸡NDV平均抗体滴度Fig.2 The average antibody titers of NDV in different days of ages from 2013 to 2015

3 讨论

为了解2013年—2015年湖北省规模化蛋鸡场ND疫苗的免疫效果，本试验从2013年6月—2015年12月在湖北省规模化蛋鸡场随机采集6 989份样本,从不同年份、蛋鸡日龄和每年不同月份对抗体检测结果进行了统计和分析。

通过对样本检测数据分析可以看出，2013年—2015年3年中，湖北省规模化蛋鸡场NDV平均抗体滴度除个别月份外，均在9log2以上，整体来说疫苗免疫效果良好，说明NDV的防疫工作能够保护鸡群免受该病毒的感染和侵害。在这3年中，2014年和2015年样本的抗体平均水平高于2013年，表明湖北省规模化蛋鸡养殖企业对于NDV的防疫有了更高的认识以及更加科学的免疫程序和防疫措施。

2013和2015年各个月份的抗体平均滴度虽有起伏，但整体偏差较小，2014年12个月之间的数据起伏较大，最大值的5月份抗体平均滴度为12.3log2，而最小值的1月份的仅为8.3log2，偏差较大，这表明2014年鸡群NDV的免疫效果不稳定，造成这种情况的原因可能是气候突变、温度变化或者是疫苗选取不当等。气候变化容易引起鸡群产生强烈的应激反应，而且NDV对于低温的抵抗力较高，另外湿度和通风在寒冷的1月份控制难度较大，也有可能成促成该种情况。所以，养殖企业一方面要做好保温措施，控制好养殖环境，降低鸡体的应激反应，另一方面，要严格执行科学的免疫程序[11]，从而保护好鸡群不受NDV的侵害，影响到生产。

对不同日龄蛋鸡的NDV抗体滴度分析显示，湖北省蛋鸡场在2013年—2015年3年中不同阶段的NDV抗体平均滴度普遍高于9log2 ，这表明不同阶段的鸡群都得到了保护，ND的免疫取得了良好的效果。但是，数据分析显示，日龄大于300 d的鸡只抗体平均滴度均大于6log2，而在小于300日龄的时间段中，存在着部分不可忽视的抗体滴度低于6log2的样本，这些样本抗体水平离散程度大，整齐度差。这表明有少部分鸡群抗体应答能力较差或者是养殖户免疫操作不规范，具体原因值得进一步跟踪调查。

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InvestigationonImmuneEffectofNewcastleDiseaseVaccineinLarge-scaleLayerFarmsfrom2013to2015inHubeiProvince

ZHOU Peng1,ZHENG Hai-hong2,MO Hai-xia2，OUYANG Jin-xu3,YANG Yu-ying1,JIANG Tao1,WANG Zhao-xiong1

(1.CollegeofAnimalScience,YangtzeUniversity,Jingzhou,Hubei,434025,China;2.ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,ChinaAcademyofAgriculturalSciences,Shanghai,200232,China;3.AnimalHusbandryBureauofJingzhouCity,Jingzhou,Hubei,434020,China)

In order to investigate the status of the immune effect,6 989 blood samples were collected randomly form lager-scale layer farms in Hubei province from June 2013 to December 2015.The antibody titers of Newcastle disease virus were measured by hemagglutination inhibition test(HI).With antibody titer analysis of the samples from different years and months,we found that the Newcastle disease virus average antibody titers reached the highest 10.0log2 in 2014,the lowest 9.2log2 in 2013 and 9.8log2 in 2015.In the seven months of 2013,the Newcastle disease virus average antibody titers reached the highest 9.8log2 in October and average antibody titer was the lowest 8.5log2 in August.Analysis on the samples from 2014 revealed that Newcastle disease virus average antibody titers reached the highest 12.3log2 in May and average antibody titer was the lowest 8.3log2 in January.Analysis on the samples from 2015 revealed that Newcastle disease virus average antibody titers reached the highest 12.7log2 in November and average antibody titer was the lowest 8.9log2 in December.The Newcastle disease virus average antibody titers were more stable between 120 and 300 days,but the age less than 120 days or more than 300 days presented a significant fluctuations.The averages of Newcastle disease virus antibody titer values in Hubei Province were greater than 9log2 in the three years holistic data,which explained that the Newcastle disease immune level is good enough to protect the chickens from the Newcastle disease.

Newcastle disease virus;large-scale layer farm;antibody titer;immune effect

2017-01-08

长江大学校基金项目；长江大学青年基金项目

周 鹏(1991-)，男，湖北浠水人，硕士研究生，主要从事畜禽传染病研究。郑海红(1979-)，女，山东泰安人，博士，副研究员，主要从事猪繁殖与呼吸综合征致病机制研究。△同等贡献作者。*

S852.659.5;S852.4

B

1007-5038(2017)10-0122-05