嘉兴地区102例非小细胞肺癌组织标本EGFR基因突变与临床分析

张军 张凡 周礼湘 徐立栋 高军

嘉兴地区102例非小细胞肺癌组织标本EGFR基因突变与临床分析

张军 张凡 周礼湘 徐立栋 高军

目的观察嘉兴地区非小细胞肺癌（NSCLC）中生长因子受体（EGFR）基因突变与临床特点相关性。方法采用探针扩增阻滞突变系统（ARMS）检测102例手术后组织标本的EGFR基因突变情况。结果102例NSCLC组织中EGFR突变率为50.98%，外显子19、21突变率为67.31%。男性和女性的突变率分别为33.33%和64.91%，吸烟与不吸烟患者的EGFR基因突变率分别为37.50%、59.68%，中高度分化和低分化患者的EGFR基因突变率分别为59.02%、39.02%，腺癌和鳞癌中的突变率分别为59.04%、6.25%，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。＞60岁患者与≤60岁患者的EGFR基因突变率分别为44.93%、63.64%，术后临床分期Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ期的EGFR基因突变率分别为49.32%、55.17%，淋巴转移和无淋巴结转移者的突变率分别为43.90%、55.74%（均P＞0.05）。结论EGFR基因突变与性别、吸烟、腺癌、分化程度有关。

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变

肺癌目前仍是中国人死亡率最高的恶性肿瘤，而且死因构成比例持续增加[1]。非小细胞肺癌（NSCLC）占全部肺癌的80%～85%，5年生存率不足15%[2]。目前NSCLC主要药物治疗是化疗和分子靶向药物治疗。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因状态是EGFR酪氨酸激酶抑制剂疗效的预测因子，也能作为化疗的预测因素。有效的EGFR基因突变检测对优化治疗方案非常重要，国内多地已对本地区NSCLC的EGFR基因状态进行了相关研究，研究表明不同地区NSCLC患者中EGFR基因表达有一定的差异[3-4]，为进一步研究嘉兴地区的手术患者组织标本中EGFR基因表达的情况及患者的临床特点，以便于更精准地选择EGFR基因突变检测对象，笔者对102例手术治疗的NSCLC患者的肺部组织标本EGFR基因表达进行检测并分析其临床特点，以此协助指导本地区相关EGFR检测指标的临床应用。

1 资料和方法

1.1 一般资料收集本院2014年6月至2016年6月102例NSCLC患者手术标本。纳入标准：（1）所有患者均行肺癌根治术；（2）患者术前未行化疗或免疫治疗；（3）无其他部位的恶性肿瘤。排除标准：（1）临床材料不齐全；（2）术前接受了化疗或免疫治疗；（3）多个部位的原发癌；（4）不愿接受该项检测。吸烟定义为曾吸烟支数大于100支。对所选择的标本均常规进行固定、包埋、切片和染色，所有标本分别由2位高年资病理医师读片诊断。

1.2 EGFR检测采用探针扩增阻滞突变系统（ARMS）法。使用人EGFR基因突变检测试剂盒（北京亚康博生物科技有限公司）检测石蜡包埋组织标本DNA的EGFR基因18、19、20、21外显子的突变。参照说明书进行EGFR基因突变的检测，首先在超净工作台完成加样操作，在PCR单管加入3μlTaq酶至管底，再加入27μl的样本稀释液并离心，然后将配置好的混合液分装入已常温融化离心的8联管，并短暂离心，接着在扩增区进行上机检测操作，反应条件为：95℃10min，1个循环；95℃15s，60℃60s，40个循环，采集荧光，最后结果判读；18外显子点突变G719S、G719C、G719A；19外显子缺失2235-2249DEL、2236-2250DEL；21外显子点突变L858R、L861Q；20外显子突变T790M、S768I点突变和插入突变。检测结果判断依据说明书所提供的原则，扩增呈典型的S型曲线。

1.3 统计学处理应用SPSS18.0统计软件，计数资料以例数和百分比表示，EGFR基因突变在不同性别、年龄、有无吸烟、临床分期、病理类型中的差异比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 患者临床资料分析102例NSCLC患者均行开放或胸腔镜下肺癌根治手术并取得病理组织标本。患者男性45例（44.11%），女性57例（55.88%）；年龄41～81岁，平均63.19岁，年龄＞60岁69例（67.65%），年龄≤60岁33例（32.35%）；吸烟者40例（39.22%），不吸烟患者62例（60.78%）；病理分型：腺癌83例（81.37%），鳞癌16例（15.69%），其他病理类型3例（2.94%）；有淋巴转移41例（40.20%），无淋巴结转移61例（59.80%）；分化程度：中高分化61例（59.80%），低分化41例（40.20%）；术后TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期73例（71.57%），Ⅲ期29例（28.43%）。2.2EGFR检测结果结果显示共52例标本有EGFR基因突变（50.98%）。其中EGFR基因外显子21突变率最高44.23%（23/52），19外显子突变率23.08%（12/52），20外显子突变率15.38%（8/52），18外显子突变率13.46%（7/52），外显子20和21同时突变（3.84%，2/52）。

2.3 不同临床特点者EGFR基因突变率的比较男性患者和女性患者、吸烟与不吸烟患者、中高度分化和低分化的患者、腺癌和鳞癌中的EGFR基因突变率均有统计学差异（均P＜0.05），其余不同临床特点的EGFR基因突变率比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。见表1。

表1 不同临床特点者EGFR基因突变率的比较[例（%）]

3 讨论

目前NSCLC的治疗主要是手术、化疗、放疗、分子靶向治疗等的综合疗法。分子靶向治疗以表皮生长因子受体和肿瘤血管生成作为靶点，达到抑制癌细胞生长、浸润和转移的目的，如表皮生长因子受体-酪氨酸激酶拮抗剂（EGFR-TKI）。部分NSCLC术后患者或术后转移患者对化疗的耐受性降低，而分子靶向治疗相对于传统放化疗毒副反应较低，增加了患者的耐受性，在小鼠中敲除EGFR基因并不出现严重的缺陷，这表明EGFRTKI阻断EGFR后的不良反应不会很大[5]。EGFR-TKI使晚期NSCLC的患者生存期显著延长[6]。研究表明EGFR基因在43%～89%的NSCLC中表达上调，参与细胞增殖、血管生成、抵抗凋亡和组织侵袭，在肿瘤形成以及介导癌细胞的生物学行为上发挥重要作用，是目前NSCLC治疗的重要靶点[7]。初始的EGFR-TKI如吉非替尼应用于化疗无效的患者，有10%～19%的NSCLC患者出现显著疗效[5]，这部分患者基因检测后发现EGFR激酶域外显子18-21存在缺失或错义突变，目前检测EGFR基因突变主要在18、19、20、21外显子，这几种突变与吉非替尼治疗的反应性相关。在本研究中嘉兴地区外科手术后组织标本的EGFR基因突变的阳性率达到50.98%，与临床疗效相关的主要是外显子19和外显子21的突变占67.31%，与相关报道相一致[8]。20外显子突变率15.38%（8/52），18外显子突变率13.46%（7/52），外显子20和21同时突变3.84%（2/52），与其他地区的相关研究结果相近[3，9]。

多项研究中显示，在胃癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤疾病中EGFR存在着过度表达，并多数预示肿瘤预后不良[10-11]。EGFR突变状态作为重要的肺癌驱动基因是一个有显著临床意义的预后因子[12]。目前认为EGFR突变在不同的NSCLC中不同，在女性、腺癌及不吸烟患者中突变率高[13]，但是与年龄、淋巴转移、分化程度、临床分期等相关性国内各项研究结果显示存在地区差异[14-15]。本研究发现，男性患者和女性患者、吸烟与不吸烟患者、中高度分化和低分化的患者、腺癌和鳞癌中的EGFR基因突变率均有统计学差异（均P＜0.05），其余不同临床特点的EGFR基因突变率比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

有研究显示EGFR基因突变检测直接测序法和ARMS相比较在手术标本检测上阳性率为18.8%和25.0%，灵敏度分别为71.4%和95.2%，无明显差异[16]。在本研究中EGFR基因突变的检测方法采用了ARMS法，这种检测方法根据不同的基因突变设计相应的探针，适用于病理组织，缺点是不能对具体突变类型进行测序，优点是对样本大小要求不高而且灵敏度高，而且操作方法简便，脱离了传统的凝胶电泳技术，减少检验过程的毒性反应，更适于临床的筛查及进一步广泛应用。

随着对EGFR基因突变研究的深入和广泛开展，这种突变在NSCLC治疗中的价值得到认可，EGFR基因突变与临床特点的相关性对选择检测病例和治疗群体具有指导意义。但在指导制定化疗和靶向治疗方案以及对疗效预测的相关性尚需进一步研究。

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EGFR mutations and clinicopathological features in patients with non-small cell lung cancer

ZHANG Jun,ZHANG Fan,ZHOU Lixiang,et al.

Department of Thoracic Surgery,Jiaxing Second Hospital,Jiaxing 314000,China

Objective To investigate the correlation of epidermal growth factor receptor(EGFR)gene mutations and clinicopathological characteristics in patients with non-small cell lung cancer(NSCLC).MethodsOne hundred and two surgical specimens were collected from patients with NSCLC.The EGFR gene mutations were detected by scorpion amplification refractory mutation system(ARMS).ResultsThe mutation rate of EGFR was 50.98%and that of exon 19/21 was 67.31%.The mutation rates of male and female were 33.33%and 64.91%,smokers and non-smokers were 37.50%and 59.68%,medium to high differentiated NSCLC and poorly differentiated NSCLC were 59.02%and 39.02%,adenocarcinoma and squamous cell carcinoma were 59.04%and 6.25%(allP＜0.05).The mutation rates of patients aged＞60 years and≤60 years were 44.93%and 63.64%,clinical stagesⅠ+Ⅱand clinical stagesⅢwere 49.32%and 55.17%,lymphatic metastasis and no lymphatic metastasis were 43.90%and 55.74%(allP＞0.05).Conclusion The EGFR gene mutations are correlated with sex,smoking status,pathological type and differentiation of NSCLC patients.

Non-small cell lung cancers Epidermal growth factor Receptorgenes mutation

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.20.2017-1281

嘉兴市科技局立项课题（2013AY21060）

314000嘉兴市第二医院胸外科

张军，E-mail：18967383559@189.cn

2017-06-05）

（本文编辑：严玮雯）