α地中海贫血不同基因型携带(患)者红细胞参数的差异性研究

罗茗月 肖克林 邵聪文 麦光兴

暨南大学医学院附属深圳市宝安区妇幼保健院中心实验室(518102)

*通讯作者：lcxkl@163.com

α地中海贫血不同基因型携带(患)者红细胞参数的差异性研究

罗茗月 肖克林*邵聪文 麦光兴

暨南大学医学院附属深圳市宝安区妇幼保健院中心实验室(518102)

目的：探讨α地中海贫血(简称地贫)不同基因型携带(患)者红细胞参数的差异性。方法：回顾性分析深圳市宝安区妇幼保健院2012～2016年确诊的1610例女性α地贫携带(患)者红细胞参数，对照组为1849例非地贫健康妇女。采用PCR-反向斑点杂交法检测3种非缺失型α地贫，采用Gap-PCR凝胶电泳法检测3种缺失型α地贫，采用Beckman Coulter LH750血细胞分析仪测定红细胞数量(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)。结果：对照组、静止型α地贫、标准型α地贫和HbH病Hb、MCV、MCH和MCHC依次递减(P<0.05)；对照组、静止型α地贫和标准型α地贫RBC依次增高(P<0.05)，但HbH病RBC数量较标准型α地贫降低(P<0.05)。静止型α地贫 αQSα/组较其它4型(αCSα/、αWSα/、-α3.7/和-α4.2/)RBC增高(P<0.05)，MCV和MCH降低(P<0.05)。标准型α地贫 α0-杂合组RBC比α+-纯合或双重杂合组增高(P<0.05)，MCV和MCH降低(P<0.05)。HbH病 αWSα/--SEA、-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA、αCSα/--SEA或αQSα/--SEA3组Hb依次降低(P<0.05)，-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA组MCV和MCH比其他两组降低(P<0.05)，αCSα/--SEA或αQSα/--SEA组RBC比其它两组降低(P<0.05)。 结论：α地贫携带(患)者随着缺失或突变基因数量的增加，Hb、MCV、MHC和MCHC降低，RBC增高，但部分严重贫血的基因型RBC会降低；各组内不同基因型红细胞参数变化各有特点，突变型引起的贫血重于缺失型，但αWSα/--SEA型贫血轻于其他类型HbH病。

α地中海贫血；基因型；红细胞参数

地中海贫血(简称地贫)广泛发生于地中海、中东、印度次大陆、东南亚和中国南方地区[1]。近年来，其在北欧和北美的检出率也呈增长趋势[2]。在地贫高发地区进行有效筛查和遗传咨询是减少重型地贫患儿出生最有效的方法，常用的筛查方法主要有红细胞形态学检查、红细胞参数分析和血红蛋白电泳等[3]。目前对筛查指标相关研究多集中于α地贫、β-地贫或α合并β-地贫携带者[4-6]，对α地贫不同基因型血液学指标的大样本研究相对较少。本研究通过分析育龄女性α地贫不同基因型携带(患)者的红细胞参数特点，为地贫筛查、遗传咨询和产前诊断提供流行病学依据。

1 对象与方法

1.1研究对象

2012年1月～2016年6月在深圳市宝安区妇幼保健院确诊为α地贫(不合并β地贫)的育龄女性共有1610例，年龄27.2±4.5岁；同期确诊为非地贫的育龄妇女(Hb≥110g/L，不携带α和β-地贫基因)1849例，年龄27.9±4.4岁(对照组)。

1.2分类标准及分组

一条染色体上的1个α基因缺失或缺陷，α链的合成部分受抑制为α+-地贫；一条染色体上的2个α基因均缺失或缺陷，该条染色体完全不能合成α链为α0-地贫[7]。静止型仅有1个α基因缺失或缺陷，为α+-地贫杂合子(静止型α地贫组)；标准型有2个α基因异常，为α+-地贫纯合子、双重杂合子或α0-地贫杂合子(标准型α地贫组)；HbH病有3个α基因异常，为α0-合并α+-杂合子(HbH病组)。

1.3诊断及测定

1.3.1样本采集采集受检者静脉血2～3ml，红细胞参数以EDTA-K2抗凝，地贫基因检测以枸橼酸钠抗凝。

1.3.2 α地贫基因诊断按照外周血DNA提取试剂盒说明书提取DNA，然后将目的DNA加入相应反应体系进行PCR扩增，缺失型α地贫基因检测采用gap-PCR法，非缺失型α地贫采用PCR-反向斑点杂交(RDB)方法检测。检测的3种常见缺失型α地贫包括-α3.7/、-α4.2/和--SEA/，3种非缺失型包括αCSα/、αQSα/和αWSα/。

1.3.3测定方法采用Beckman Coulter LH750血细胞分析仪测定红细胞参数：红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)，使用原厂配套试剂和质控品，严格按照说明书操作。

1.4统计学分析

2 结果

2.1不同基因型α地贫携带(患)者红细胞参数比较

对照组、静止型α地贫、标准型α地贫和HbH病组RBC、Hb、MCV、MHC和MCHC比较，差异有统计学意义(F=593.47、753.79、2914.67、3234.11、406.01，均P<0.05)。进一步两两比较，4组Hb、MCV、MHC和MCHC均有统计学差异(P<0.05)，对照组、静止型α地贫和标准型α地贫组间RBC依次增高(P<0.05)；HbH病组RBC比标准型α地贫组降低(P<0.05)，但与对照组和静止型α地贫组比较均无统计学差异(P>0.05)。见表1。

表1 α地贫不同基因型携带(患)者与对照组红细胞参数比较

*与对照组比较#与静止型α地贫组比较$与标准型α地贫组比较P<0.05

2.2静止型α地贫5种基因型红细胞参数比较

5种静止型α地贫RBC、MCV和MHC均数有统计学差异(F=6.64、16.65、12.18，均P<0.05)，Hb和MCHC均数无统计学差异(F=0.20、1.22，均P>0.05)。对有差异的RBC、MCV和MHC进一步两两比较，αCSα/、αWSα/、-α3.7/和-α4.2/基因型间均无统计学差异(P>0.05)，αQSα/组与其他4组相比差异有统计学意义(P<0.05)，RBC高于其他4型，MCV和MCH均低于其他4型，见表2。

表2 静止型α地贫5种基因型组红细胞参数比较

*与αQSα/αα组比较P<0.05

2.3标准型α地贫两种基因型红细胞参数比较

α0-地贫杂合子即--SEA/型，α+/α+包括α+-双重杂合子(α3.7/-α4.2，α3.7/αCSα-α3.7/αWSα-α4.2/αCSα和-α4.2/αWSα)和α+-纯合子(-α3.7/-α3.7，-α4.2/-α4.2和αWSα/αWSα)。α0-杂合组(α0/αα)与α+-纯合或双重杂合组(α+/α+)相比，Hb和MCHC差异均无统计学意义(t=0.80、0.93，P均>0.05)，RBC、MCV和MCH差异有统计学意义(t=3.60、4.41、4.83，P均<0.05)，α0-杂合组RBC增高、MCV和MCH均减低(P<0.05)，见表3。

表3 标准型α地贫两种基因型红细胞参数比较

*与α0/αα组比较P<0.05

2.4 HbH病3组基因型红细胞参数比较

3组HbH病RBC、Hb、MCV、MHC和MCHC均数有统计学差异(F=22.58、38.16、22.24、18.34、10.74，P均<0.05)。进一步两两比较，αWSα/--SEA组、-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA组和αCSα/--SEA或αQSα/--SEA组Hb依次降低(P<0.05)，αCSα/--SEA或αQSα/--SEA组RBC比其它2组降低(P<0.05)，-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA基因型MCV和MCH比其它2型降低(P<0.05)，见表4。

表4 HbH病3种基因型红细胞参数比较

*与αWSα/--SEA组比较$与-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA组比较P<0.05

3 讨论

本研究回顾性分析了对照组、静止型α地贫、标准型α地贫和HbH病组的红细胞常用参数，发现这4组Hb、MCV、MHC和MCHC依次降低，此结果与张永良[8]的研究结果一致，但与Akhavan-Niaki[9]的报道不同，其发现静止型和标准型α地贫仅MCV和MCH有差异，这可能与样本人种来源不同有关，且此报道中伊朗人常见的静止型和标准型与中国人也不同。本研究中发现RBC在对照组、静止型α地贫和标准型α地贫组依次增高，HbH病组降低，与张永良[8]的研究结果一致；且进一步发现HbH病组贫血最重的αCSα/--SEA或αQSα/--SEA/型RBC也下降。所以，α地贫基因携带(患)者随着缺失或突变基因数量的增加，Hb、MCV、MHC和MCHC降低，RBC增高，但部分严重贫血的基因型RBC降低。

徐湘民等[1]报道αCSα/与αQSα/型血液学表型变化较-α3.7/、-α4.2/和αWSα/型变化严重，但本研究中静止型α地贫组内仅αQSα/型MCV和MCH降低，RBC增高，α3.7/、-α4.2/、αQSα/和αWSα/间无差异。张永良等[8]比较了-α3.7/、-α4.2/和-αT/型α地贫的红细胞参数无明显差异，可能是因为未对差异较大的3种-αT/进行分类研究。蔡稔等[10]发现-α3.7/或-α4.2/型的MCV和MCH低于αCSα/型，但样本例数较少。α2基因表达量是α1基因的2～3倍，所以α2基因异常引起基因产物下降更明显，导致的贫血更严重[11]；发生在α2基因的点突变比缺失型更严重是因为当α2基因缺失时，α1基因的表达量代偿性增高，而当α2基因发生点突变时α1基因未发生补偿表达[2，12]。但不同类型突变型表型也有差异，其详细调控机制还有待进一步研究。标准型α地贫组内不同基因型红细胞参数比较相关报道很少，本研究中，α0-杂合子组比α+-纯合子或双重杂合子组RBC增高、MCV和MCH均降低。α+-纯合子(0.5%)和α+-双重杂合子(1.0%)比例虽然很低，但共检出8种基因型，其表型也不同。曾有报道非缺失型αCSα/纯合子与HbH病临床症状相似[14]，但本研究中样本例数较少未进行具体比较，所以后续研究中可继续收集样本，进一步探讨其血液学参数变化特点及发生机制。

HbH病不同基因型的临床表型差异非常大，有的终生无需治疗，有的需要定期输血，有的甚至出现水肿胎，但机理尚不清楚[13-14]。本研究中，突变型αCSα/--SEA或αQSα/--SEA组比缺失型-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA组RBC和Hb降低，MCV和MCH增高。有报道αCSα/--SEA型HbH病因无效造血和红细胞凋亡更加明显，所以RBC和Hb降低，而MCV增高是因为细胞内有大量HbCS过度水化而引起的[15]。虽然αCSα/与αQSα/这两种静止型α地贫表型很轻，但其引起的突变型HbH病比缺失型更依赖于输血治疗[15]，所以在临床筛查及产前诊断中应予以重视。朱凌等[16]分析了15例αWSα/--SEA型HbH病中只有6例有贫血，且均较轻本研究中αWSα/--SEA型HbH病Hb高于其他两组，均值为104 g/L，属轻度贫血，MCV和MCH高于-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA组。所以说，突变型引起的HbH病贫血程度重于缺失型，但突变型中αWSα/--SEA型HbH病轻于其他类型。

本研究探讨了α地贫不同基因型女性携带(患)者血液学参数特点，有助于指导同类基因型中表型更重或表型较轻，但仍有生出重型患儿风险的患者的准确诊断，对一些症状较重的基因型如HbH病不同基因型特征的了解，将有利于临床生育风险评估，从而避免不必要的引产或重型患儿出生。

(志谢：本研究得到深圳市科技创新委出生缺陷研究重点实验室的支持)

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Studyofdifferencesonhemoglobinconcentrationanderythrocyteparametersofpatientsorcarrieswithdifferentgenotypesofα-thalassemia

LUO Mingyue, XIAO Kelin, SHAO Congwen, MAI Guangxing

Centrallaboratory,ShenzhenBao’anMaternalandChildHealthHospitalAffiliatedtoMedicalCollegeofJinanUniversity,Shenzhen,Guangdong, 518102

Objective: To analyze the differences of hemoglobin concentration and erythrocyte parameters of patients or carries with different genotypes of α-thalassemia. Methods：In study group, the red blood cell parameters of 1610 women with α-thalassemia alpha from Shenzhen Bao’an Maternal and Child Health Hospital during 2012 to 2016 were retrospectively analyzed. And in control group, the red blood cell parameters of another 1849 women without thalassemia were also analyzed. Three nondeletional mutations of α-thalassemia were detected by reverse dot-blot hybridization. Three deletional mutations were carried out by gap polymerase chain reaction (Gap-PCR). Red blood cell (RBC), hemoglobin(Hb), mean corpuscular volume (MCV), mean corpuscular hemoglobin (MCH) and mean corpuscular Hb concentration (MCHC) were analyzed using Beckman Coulter LH750. Results：The values of Hb, MCV, MCH and MCHC decreased in the order of women in control group, women with silent thalassemia, women withα-thalassemia trait, and women in HbH diease group(P<0.05). The RBC value increased in the order of women in contorl group, women with silent thalassemia, and women withα-thalassemia trait(P<0.05), but the RBC value of women with HbH diease was significant lower than that of women withα-thalassemia trait(P<0.05). In silent thalassemia group, the value of RBC of women withαQSα/ genome was higher than that of women withαCSα/、αWSα/、-α3.7/ and -α4.2/ genic(P<0.05),but value of MCV and MCH were lower than those of women with the other four genome(P<0.05). As for women withα-thalassemia trait orα0-heterozygote genome, the value of RBC were higher(P<0.05), but MCV and MCH were lower(P<0.05)than those of women with α+- homozygote or double heterozygote. In women with HbH diease，the value of Hb decreased in the order of αWSα/--SEA, -α3.7/--SEAand-α4.2/--SEA, αCSα/--SEAand αQSα/--SEA(P<0.05).The values of MCV and MCH of women with -α3.7/--SEAand -α4.2/--SEAwere lower(P<0.05), and the value of RBC of women withαCSα/--SEAor αQSα/--SEAgenic group were also lower(P<0.05)。Conclusion：The values of Hb, MCV, MHC and MCHC of patients and carries with α-thalassemia decrease and value of RBC increases along with the number of deletion or mutation of α-globin genes increasing, however, value of RBC will decrease for some patients with severe genotypes anemia. There were different characteristics in erythrocyte parameters among patients with various genotypes. Patients with α-thalassemia caused by mutation genotypes have more severe anemia than those patients withα-thalassemia caused by deletion genotypes, but anemia of patients with αWSα/--SEAis alleviate than that of patients with HbH.

α- thalassemia；Genotype；Erythrocyte parameter

10.3969/j.issn.1004-8189.2017.07.011

2017-03-31

2017-05-09

*Correspondingauthor：lcxkl@163.com

[责任编辑：张 璐]