前列腺大组织切片技术在生物样本库中的应用

王丽萍，顾学文，丁雪飞，肖芹，关乃富，黄天宝，徐嘉男，金鑫，潘云龙



前列腺大组织切片技术在生物样本库中的应用

王丽萍，顾学文，丁雪飞，肖芹，关乃富，黄天宝，徐嘉男，金鑫，潘云龙

225001 扬州大学临床医学院/江苏省苏北人民医院生物样本库（王丽萍、金鑫、潘云龙），病理科（顾学文、肖芹），泌尿外科（丁雪飞、黄天宝、徐嘉男）；213000 常州市第二人民医院病理科（关乃富）

生物样本库主要是指标准化收集、处理、储存和应用健康和疾病生物体的生物大分子、细胞、组织和器官等样本[5]，包括人体器官组织、全血、血浆、血清、生物体液或经处理过的生物样本（DNA、RNA、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其质量控制、信息管理与应用的系统。江苏省苏北人民医院生物样本库目前存储设备可满足大规模科研样本存储需求，能够为前列腺癌的精准治疗提供强有力的支持[6]。

1 材料与方法

1.1 设施设备

江苏省苏北人民医院生物样本库占地面积约 400 m2，设有标本取材室、体液处理室、组织处理室、核酸提取室、资料室及低温存储室。主要设备–196 ℃液氮罐购自美国 Taylor-wharton 公司；Forma 907 型–86 ℃超低温冰箱购自美国Thermo 公司；VIP6-E2 型全自动组织脱水机和全自动封片染片机购自日本 Sakura 公司；REM-71 型大组织切片机购自日本 Yamato 公司；NDP20 型数字病理扫描仪购自日本 NanoZoomer 公司；U-COOL 24 h 温控系统购自青岛海尔公司；TFA 型室温石蜡切片柜购自南京优赛斯生物技术有限公司。

1.2 标本来源

收集江苏省苏北人民医院泌尿外科 2016 – 2017 年间行前列腺癌手术根治性切除术及根治性膀胱切除术后的完整前列腺样本，进行大组织切片的制作及留存。样本采集已通过江苏省苏北人民医院伦理委员会审核，每日可采集病例由临床医生确定并签署知情同意书。知情同意书直接在原有手术知情同意书加入“我授权医生对手术切除的病变器官、组织或其他标本进行处置，包括病理学检查、细胞学检查、流行病学检查、医疗废物处理和科学研究”，一式三份，由临床科室、生物样本库、患者各执一份留存。

1.3 信息系统

我院采用上海唐颐生物样本库智能信息管理系统，可根据临床资料个性化设置需求模块。能够与院内 HIS、LIS、PACS 接口对接，实时获取临床资料。二维码扫描可显示样本编码、采集日期、类型、存储方式以及存储位置等。例如，PR-1700720-T-P-01，代表前列腺癌组织，2017 年第 720 号入库，癌组织，蜡块存储，第一复份。

1.4 临床资料

我院前列腺癌入库样本临床资料已达到标准化、规范化，其中包括：基本信息（姓名、性别、年龄、身份证号、家庭住址、联系方式等），现病史（尿频、尿痛、尿急、血尿、血精、排尿无力、尿等待、尿线中断、排尿困难、腰酸、腰胀、体重减轻），既往史（高血压病、糖尿病、冠心病、长期服用药物、其他前列腺疾病等），个人史（吸烟史、饮酒史、职业接触史、肿瘤家族史等），必备检验检查（慢性病容、浅表淋巴结肿大、双下肢水肿、腹软、腹部移动性浊音、肾区叩击痛、膀胱区压痛、直肠指诊等），确诊手段（前列腺穿刺活检术），辅助检查（CT、彩超、术中彩超、MRI、骨扫描）等。

1.5 血液标本采集处理流程

符合纳入标准的患者均采集血液标本，血液样本于术前及术后第 1、3、7 天以 8 ml EDTA 抗凝和 5 ml 非抗凝真空采血管采集。详细填写样本采集登记表，室温静置 30 min 后，4 ℃低温离心 10 min，分离血清、血浆，按照每管 300 μl 分装成 5 份，400 ×低温离心 30 min，于白膜层部提取白细胞，按照每管 300 μl 分装成 3 份，所有流程在2 h 内分装完毕，置于–80 ℃保存。

众说纷纭之际，税务部门开始出手。6月3日，国家税务总局发布公告说，针对近日网上反映有关影视从业人员签订“阴阳合同”中的涉税问题，国家税务总局高度重视，已责成江苏等地税务机关依法开展调查核实。如发现违反税收法律法规的行为，将严格依法处理。

1.6 前列腺穿刺标本采集处理流程

符合纳入标准的患者均进行前列腺穿刺标本采集，术中穿刺前列腺左侧、右侧各一条约 1.5 cm，详细填写样本采集登记表，福尔马林固定 24 h，石蜡包埋切片染色，室温保存。

1.7 前列腺大组织标本采集处理流程

标本具体采集计划由临床科室、病理科、样本库工作人员共同制定并确定一名临床协调人员。手术前一天临床医生确认可采集病例，标本离体后由高年资病理医生常规切取四周切缘、输尿管、精囊等组织，并在临床医生的指导下根据穿刺位置进行取材。在满足病理科诊断条件下，样本库人员按照冠状位将组织切片，厚度为 0.4 cm 左右，依次编号置于福尔马林固定。48 h 后，进行大组织脱水，流程分别为 75% 乙醇，90% 乙醇，95% 乙醇，无水乙醇，二甲苯，石蜡。采用二次包埋法使大组织充分浸蜡（石蜡熔点 60 ~62 ℃为宜），冰冻后切片。切片厚度为 3 μm，充分烤片后进行 HE 染色。

2 结果

截至 2017 年 5 月 20 日，我院成功收集百余例前列腺癌血液样本（血清、血浆、白细胞）、穿刺样本（左侧、右侧）及数十例前列腺癌大组织样本。前列腺癌大组织切片 HE 染色结果见图 1。生物样本库工作人员定期随机抽检进行样本质量控制，根据样本核酸提取鉴定结果显示，DNA 完整性、RNA 纯度及总量完全满足科研需求。

图 1 随机抽取前列腺癌大组织切片 HE 染色（A：PR-1700335-N-P-01；B：PR-1700254-T-P-02）

3 讨论

前列腺大组织切片技术在前列腺癌的病理诊断和形态学研究方面具有独特的优势[7]。前列腺癌的病灶多呈现多病性分布[2]，相比于传统病理学检查而言前列腺病理大切片技术可以对前列腺标本进行系统、全面的观察，能够直观地判断癌灶的数量、分化程度、局部及手术切缘的侵袭情况等[8]，进而更加精确地指导进一步的随访和治疗。同时，通过大组织切片技术可以研究癌灶的空间分布情况，进而为前列腺癌的局部精准治疗提供理论依据[9]。

标准化的生物样本库是医院最大的科研优势和竞争力体现，是科学研究的重要基础条件[10]，欧美等发达国家均已建立较为完善的各类组织标本库，我国是一个多民族的人口大国，我们要充分利用生物样本资源，结合临床难题促进其发病机制、分子诊断标记物与药物靶点的发现等转化医学的研究，形成信息化、网络化管理并有效提升临床诊疗水平。生物样本库主要作用：①可提供标准化、规范化样本采集服务[11]。每一例前列腺样本需临床医生、病理医生和样本库人员共同采集，如出现漏诊，样本库第一时间将标本返还病理科。②可提供标准化、规范化样本处理服务[12]。样本库由专职人员分别负责血液样本、穿刺样本及大组织样本处理。③可提供独立、封闭的样本存储服务。样本库人员将前列腺样本按照样本类型统一编码入库，按序存储。临床人员可根据科研计划向样本库提交样本使用申请，审核通过后样本库人员统一安排出库。④可提供标准化、规范化质量控制服务[13]。样本库人员定期对库内样本进行质控，保证库内样本质量。⑤可提供标准化、规范化临床信息资料及随访资料[14]。所有入库样本具有完整的临床信息及随访信息。患者资源是医院最重要的战略资源，对患者进行定期随访管理，使患者得到持续的观察和合理后续治疗，在提高医院服务的同时可以掌握患者第一手资料进行统计分析、积累经验，有利于科研工作的开展和业务水平的提高，能够更好地为病人提供服务。

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10.3969/j.issn.1673-713X.2017.05.015

江苏省卫计委面上科研课题（H201550）；扬州市科技计划项目（YZ2015068）；江苏省苏北人民医院院基金（yzycms201425）

潘云龙，Email：NJPHWLP@163.com

2017-06-12