清咽喉口服液中主要成分的鉴别实验研究

2017-11-06王庆学韩琳

中国当代医药 2017年27期

王庆学+韩琳

[摘要]目的建立清咽喉口服液中黄芩、连翘和生地黄中有效成分的鉴别方法。方法采用薄层色谱法对清咽喉口服液中黄芩、连翘的有效成分进行鉴别，采用高效液相色谱法对生地黄的有效成分进行鉴别。结果在薄层色谱中，黄芩中的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素及连翘中的连翘苷的斑点清晰，分离度好。生地黄中毛蕊花糖苷和梓醇通过高效液相色谱法在不同波长处被检出。结论所建立的方法可用于清咽喉口服液中有效成分的鉴别，并纳入清咽喉口服液的质量标准正文中。

[关键词]清咽喉口服液；薄层色谱法；高效液相色谱法；鉴别

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）09（c）-0008-04

[Abstract]Objective To establish a identifition method for the major components of Forsythiae Fructus，Scutellariae Radix and Rehmanniae Radix in Qingyanhou Oral Solution.Methods The major components of Forsythiae Fructus and Scutellariae Radix in Qingyanhou Oral Solution were determined by TLC.The major components of Rehmanniae Radix in Qingyanhou Oral Solution were determined by HPLC.Results The results showed that Baicalin，Baicalein，Wogonin and Forsythia Glycosides in Forsythiae Fructus and Scutellariae Radix were clearly detected and were well separated by TLC.Acteoside Kusaginin and Catalpa Alcohol in Rehmanniae Radix were detected at different wavelengths by HPLC.Conclusion The method can be readily utilized as a identifition method for the major components in Qingyanhou Oral Solution.It can be a quality standard of Qingyanhou Oral Solution.

[Key words]Qingyanhou Oral Solution；TLC；HPLC；Identifition

清咽喉口服液中含有多種成分，如生地黄、连翘、黄芩、麦冬、玄参等，该中药口服液主要用于治疗小儿急慢性咽喉炎、扁桃体炎、咽喉炎等。其中起到主要治疗作用的是黄芩、连翘及生地黄。为了更好地控制该制剂的质量，保证临床治疗效果，本研究通过查阅2015年版中国药典及相关文献[1-16]，研究了黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素，连翘中连翘苷的薄层鉴别方法，生地黄中毛蕊花糖苷和梓醇的高效液相色谱鉴别方法，从而建立清咽喉口服液新的质量标准，现报道如下。

1仪器与试药

安捷伦1260型高效液相色谱仪（安捷伦1260型DAD检测器）；Dimonsil C18色谱柱（250×4.6 mm，5 μm）；电子分析天平（Mettler Toledo AB265-S）；ZF7B三用紫外分析仪（上海康华仪器制造厂），超声清洗仪（SB-5200D 宁波新芝生物技术股份有限公司）。清咽喉口服液（批号分别为：20160224、20160526、20160707）。黄芩对照药材（120955-201309）、连翘对照药材（120908-201216），均购自中国食品药品检定研究院。毛蕊花糖苷、梓醇、黄芩苷、连翘苷、黄芩素、汉黄芩素对照品（批号分别为：11530-201310、110808-201210、110715-201318、110821-201213、111595-201308、111514-201308，购自中国食品药品检定研究院）；硅胶G薄层板预制板、GF254预制板、硅胶H预制板（批号分别为20140506、20140506、20140408，购自青岛海洋化工厂分厂）。高效液相色谱仪所用试剂均为色谱纯，其它实验试剂均为分析纯，水为纯化水。

2方法与结果

2.1黄芩

2.1.1供试品溶液的制备取本品5 ml，加 5 ml甲醇使溶解，超声5 min，离心10 min，取上清液蒸干，加5 ml水使溶解，分别用5 ml水饱和正丁醇提取两次，将两次提取液合并蒸干，残渣加1 ml甲醇使之溶解，作为供试品溶液。

2.1.2对照药材溶液的制备另取1 g黄芩对照药材，加乙酸乙酯-甲醇（3：1）混合溶液30 ml，加热回流30 min后放冷并过滤，将滤液蒸干，残渣加2 ml甲醇使之溶解，取上清液作为对照药材溶液。

2.1.3对照品溶液的制备再取适量的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品加入容量瓶中，分别加入适量甲醇，制成每1 ml含1 mg黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品的对照品溶液。

2.1.4阴性对照溶液的制备除不加入黄芩外，其余按本制剂处方，采用相同的制备工艺，制得缺黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的空白样品，取该空白样品，按“2.1.1”项下方法制备阴性对照溶液。

2.1.5测定方法按照2015年版中国药典（四部）通则0502的薄层色谱法，各吸取10 μl的供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液、5 μl的对照药材溶液，分别点于同一薄层板上（硅胶G板、硅胶H板、GF254板及中性氧化铝板），以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10：3：1：2）为展开剂，预饱和30 min后放入薄层板展开，样品点跑到薄层板一半以上时将薄层板取出，晾干，置365 nm的紫外灯光下检视结果。endprint

2.1.6测定结果与对照药材和对照品的色谱斑点比较，在相应的位置上，供试品色谱中有5个斑点相同；阴性对照溶液无此斑点，中性氧化铝板在同等条件下无法达到分离效果（图1）。

2.2连翘

2.2.1供试品溶液的制备取本品5 ml，加 5 ml甲醇使溶解，超声5 min，离心10 min，取上清液蒸干，加5 ml水使溶解，分别用5 ml水饱和正丁醇提取两次，将两次提取液合并蒸干，残渣加1 ml甲醇使之溶解，作为供试品溶液。

2.2.2对照药材溶液的制备另取1 g连翘对照药材，加甲醇20 ml并加热回流20 min后，离心10 min，取上清液，浓缩至5 ml作为对照药材溶液。

2.2.3对照品溶液的制备再取适量连翘苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg连翘苷对照品的对照品溶液。

2.2.4阴性对照溶液的制备除不加入连翘外，其余按本制剂处方，并采用相同的制备工艺，制得缺连翘苷的空白样品，取该空白样品，按“2.1.1”项下方法制备阴性对照溶液。

2.2.5测定方法按照2015年版中国药典（四部）通则0502的薄层色谱法，各吸取15 μl的供试品溶液、对照品溶液、对照药材溶液及阴性对照溶液，分别点于同一薄层板上（硅胶G板、硅胶H板、GF254板及中性氧化铝板），以三氯甲烷-甲醇（8：1）为展开剂并放入薄层板展开，样品点跑到薄层板一半以上时将薄层板取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇试液，105℃加热至斑点清晰，置365 nm的紫外灯光下检视结果。

2.2.6测定结果与对照药材和对照品的色谱斑点比较，在相应位置上，供试品有相同斑点；阴性对照溶液无此斑点，中性氧化铝板在同等条件下无法达到分离效果（图2）。

2.3生地黄中毛蕊花糖苷

2.3.1供试品溶液的制备精密量取清咽喉口服液1 ml置10 ml容量瓶中，分别加各流动相稀释至刻度，摇匀，离心取上清液，即得供试品溶液。

2.3.2对照品溶液的制备精密称定适量毛蕊花糖苷对照品，加入适量甲醇制成每1 ml含1 mg毛蕊花糖苷对照品的对照品溶液。

2.3.3阴性对照溶液的制备除不加入生地黄外，其余按本制剂处方，并采用相同的制备工艺，制得缺毛蕊花糖苷的空白样品，取该空白样品，按“2.1.1”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3.4色谱条件以乙腈-0.1%磷酸水（16：84）为流动相；流速为1.0 ml/min；检测波长为334 nm；柱温为30℃。

2.3.5测定法分别精密吸取20 μl的对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，注入液相色谱仪中测定，即得。

2.3.6测定结果按照“2.3.4”项下的色谱条件，取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液分别进样测定。结果表明，供试品溶液中毛蕊花糖苷达到基线分离，与毛蕊花糖苷对照品溶液在相同保留时间处的色谱峰重叠，阴性对照溶液在同一保留时间处无色谱峰出现，不干扰测定，理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应符合药典规定（图3）。

2.4生地黄中梓醇

2.4.1供试品溶液的制备精密量取清咽喉口服液1 ml置10 ml容量瓶中，分别加各流动相稀释至刻度，摇匀，离心取上清液，即得供试品溶液。

2.4.2对照品溶液的制备精密称定适量梓醇对照品，加入甲醇制成每1 ml含1 mg的梓醇对照品的对照品溶液。

2.4.3阴性对照溶液的制备按本制剂处方比例及制备工艺，按“2.3.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.4.4色谱条件以乙腈-0.1%磷酸水（3：97）为流动相；流速为1.0 ml/min；检测波长为210 nm；柱温为30℃。

2.4.5测定法分别精密吸取20 μl对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，注入液相色谱仪中测定，即得。

2.4.6测定结果按照“2.3.4”项下的色谱条件，取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液分别进样测定。结果表明，供试品中梓醇达到基线分离，理论板数按梓醇峰计算均应不低于5000，供试品溶液与梓醇对照品溶液在相同的保留时间处的色谱峰重叠，阴性对照溶液在同一保留时间处无色谱峰出现，不干扰测定（图4）。

3讨论

清咽喉口服液是我院中医科主任刘和义、周伟留下的经验处方，多年来作为儿童医院的院内制剂，并申请了江苏省医院制剂的批准文号，在治疗小儿咳嗽方面疗效显著，作为中药制剂，减少了化学药品的许多毒副作用，而且由于改善了制备工艺，与成人中药口服液相比，口感更好，得到家长及临床医师的一致好评。

随着社会的发展，人民群众更加关注用药安全，国家也相应出台了相关政策及法令，要求进一步加强医院制剂的管理，提高医院制剂的质量标准。清咽喉口服液的原质量标准中仅对制剂中的生物碱等成分进行了粗略鉴别，不能达到国家及江苏省食品药品监督管理局提出的相应标准，因此本研究对清咽喉口服液中各种有效成分进行鉴别，并在后续实验中进一步研究了各种有效成分的含量检测，从而制定新的、更加严谨有效的质量标准。

由于清咽喉口服液为含糖制剂，进行薄层及高效液相色谱法鉴别时，样品的处理方法非常关键，否则会影响成分在薄层板上的分離，使迁移值（Rf）达不到要求，同时目标成分与杂质也不能很好地在色谱柱上分离。本实验的样品处理方法简单，试剂毒性相对较小，各成分分离效果良好。

本实验采用了对照药材及各主要成分的对照品作为阳性对照，详细研究了清咽喉口服液中的主要治疗成分，参照中国药典，制剂薄层鉴别时仅需要采用对照药材作为阳性对照。考虑到制剂的生产成本，我们仅将对照药材纳入清咽喉口服液的鉴别实验中。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2]王国海，郭耀武，黄艳.金嗓开音片中连翘苷的质量控制方法研究[J].包头医学院学报，2015，31（1）：12+19.

[3]周欢，王小平，白吉庆.连翘薄层鉴别方法的改进[J].中国现代中药，2015，17（4）：338-340.

[4]刘艳新，王力.一种伪品连翘的鉴别方法研究[J].黑龙江医药，2015，28（4）：731-732.

[5]林林，刘广桢，尹宁宁.HPLC法测定金匮肾气丸中马钱苷、芍药苷、毛蕊花糖苷和丹皮酚[J].中成药，2012，34（11）：2137-2140.

[6]肖凌，张飞.黄芩与滇黄芩鉴别研究[J].中药材，2016，39（10）：2412-2416.

[7]范金钊，白林，黄晓舞.TLC法鉴别复方连翘软膏中的连翘和黄芩[J].解放军药学学报，2015，31（4）：360-361.

[8]王丹，蒋亚杰，梁艳，等.黄芩不同规格与化学成分及内在质量相关性的研究[J].中国中药杂志，2012，37（4）：426-433.

[9]魏可雄.不同产地黄芩药材的鉴别[J].中国卫生产业，2013， 17（26）：1-2.