人乳头瘤病毒E6/E7蛋白在宫颈病变筛查中的应用

魏彩平

(广西科技大学附属柳州市人民医院妇科,广西 柳州 545006)

人乳头瘤病毒E6/E7蛋白在宫颈病变筛查中的应用

魏彩平

(广西科技大学附属柳州市人民医院妇科,广西 柳州 545006)

目的探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)E6/E7蛋白在宫颈癌筛查中的作用。方法选取宫颈疾病患者70例，行宫颈病理学检查及新柏氏液基细胞学(TCT)检测，比较高危型HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA分型检测宫颈癌病变及非典型鳞状细胞(ASC-US)患者高级别宫颈癌病变的敏感度、特异度。结果高危型HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA分型检测宫颈病变总检出率分别为60.0% (42/70)、67.1%(47/70)；两种方法检测慢性宫颈炎及CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宫颈癌检出率差异均无统计学意义(P>0.05)；宫颈病变的敏感度、阳性预测值及阴性预测值差异无统计学意义(P>0.05)，高危型HPV E6/E7 mRNA检测的特异度明显高于HPV DNA分型检测(P<0.05)；ASC-US患者高危型HPV E6/E7 mRNA检测的特异度明显高于HPV DNA分型检测(P<0.05)。结论与HPV DNA分型检测方法相比，高危型HPV E6/E7 mRNA检测对预测宫颈病变特异度更强，特别是对TCT检测为ASC-US患者的分流意义更为明确。

人乳头瘤病毒;宫颈病变;非典型鳞状细胞;新柏氏液基细胞学

宫颈癌发病率仅次于乳腺癌，1/3宫颈癌患者最终死亡。人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是诱发宫颈癌的关键因子，高危型HPV DNA存在于近90%的宫颈癌组织中，其中高危型HPVE6/E7蛋白与高危型HVP的转化密切相关[1]。目前，宫颈癌、乳腺癌的筛查是国家重大公共卫生项目，宫颈癌的预防关键在于筛查出更多的癌前病变，以便于早期治疗。本研究旨在探讨高危型HPV E6/E7 mRNA在宫颈癌疾病筛查中的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2012年9月至2014年10月在柳州市人民医院妇科就诊的初步筛查疑存在宫颈疾病患者70例为研究对象，多以接触性出血、阴道异常出血、白带异常及下腹隐痛就诊。排除具有子宫或宫颈切除术史、盆腔放射治疗史及妊娠患者。纳入研究患者年龄20～70岁，平均(38.0±7.2)岁，取标本前禁性生活>3 d，且阴道无冲洗、放药。

1.2方法

对患者行宫颈TCT、阴道镜下活检组织病理学检查及HPV E6/E7 mRNA检测。(1)宫颈样本采集：分别采集每例患者宫颈细胞标本各2份，细胞采集器的中央刷毛部位插入宫颈管内，顺时针方向转动采样器，将收集的细胞保存于细胞保存液中，室温放置待测。(2)宫颈TCT检查：TCT专门采样器收集宫颈细胞样本，获得的脱落细胞浸入细胞处理试剂中，获得的有效细胞制备成细胞悬液，再制成细胞薄片，黏液对制片会造成干扰，可经过滤离心解决，采用巴氏染色或其他免疫组织化学染色细胞薄片，显微镜下观察分析宫颈细胞形态。(3)活检组织病理学检查：对于TCT检查结果显示异常的患者行阴道镜下检查取活检，送至病理科行组织病理学检查。(4)HPV E6、E7 mRNA bDNA检测：严格按照试剂盒操作，检测结果以光子数表示，检测仪器为QuantiVirus TM 冷光仪。(5)HPV DNA分型检测：严格按照试剂盒操作。

1.3统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，计数资料及不同方法检测灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值的比较均采用χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1活检组织病理学检查结果

结果显示：慢性宫颈炎20例；宫颈上皮内瘤变(CIN)患者40例，其中CINⅠ 10例，CINⅡ 10例，CIN Ⅲ 20例；宫颈癌10例。合并为慢性宫颈炎及CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宫颈癌3类。

2.2宫颈病变检出率比较

高危型HPVE6/E7 mRNA与HPV DNA分型检测宫颈病变总检出率分别为60.0%(42/70)、67.1%(47/70)，差异无统计学义(P>0.05)；应用于慢性宫颈炎及CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宫颈癌的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.3宫颈病变诊断分析

以病理学检查结果为金标准，高危型HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA分型检测宫颈病变的敏感度、阳性预测值及阴性预测值比较差异无统计学意义(P>0.05)，高危型HPV E6/E7 mRNA检测的特异度明显高于HPV DNA分型检测(P<0.05)。见表2、表3。

表1 宫颈病变的检出率比较[n(%)]

表2高危型HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA分型检测与病理学方法检测宫颈病变的比例(n)

项目病理学检查阳性阴性合计高危型HPVE6/E7mRNA检测阳性40242阴性52330HPVDNA分型阳性389阴性1013

表3高危型HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA分型检测宫颈病变的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值的比较(%)

项目敏感度特异度阳性阴性高危型HPVE6/E7mRNA检测88.992.095.282.1HPVDNA分型79.259.180.956.5χ2值0.6195.3530.0790.287P值0.4310.0200.7790.591

2.4 ASC-US患者高级别宫颈病变诊断分析

25例患者的宫颈TCT结果为非典型鳞状细胞(ASC-US)，高危型HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA分型检测ASC-US患者高级别宫颈病变的敏感度、阳性预测值、阴性预测值比较，差异无统计学意义(P>0.05)；两组特异度比较差异具有统计学意义(P<0.05)。见表4、表5。

表4高危型HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA分型检测与病理学方法检测ASC-US高级别宫颈病变比较(n)

项目病理学检查阳性阴性合计高危型HPVE6/E7mRNA检测阳性11213阴性21012高危型HPVE6/E7mRNA检测阳性10717阴性358

表5高危型HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA分型检测ASC-US高级别宫颈病变的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值的比较(%)

项目 敏感度 特异度 阳性 阴性高危型HPVE6/E7mRNA检测84.683.384.683.3HPVDNA分型76.941.758.862.5χ2值0.37705.04203.13711.0461P值0.53920.02510.07720.3060

3 讨论

宫颈癌是全球女性最常见的生殖系统恶性肿瘤，通过HPV DNA分型检测判定感染的病毒类型[2]，但HPV DNA检测方法不能判定宫颈HPV感染后是否发生病变[3]。高危型HPV是宫颈癌的首要致病因素已得到世界范围内的公认，HPV 16、18型的感染是最常见的，其中E6/E7起关键作用[4]。许多研究者[5-7]认为HPV E6/E7蛋白表达过程中反映其转录活性的E6/E7 mRNA能预测病情的发展。E6/E7蛋白协同导致人类细胞发生永生化，使中心体复制与细胞周期解偶联，纺锤体功能受损，基因组缺失，促进细胞恶变[8-9]。E6蛋白与细胞内的E6相关蛋白形成复合物降解抑癌基因产物，E7蛋白则通过与过磷酸化的抑癌基因pRb结合，使pRb失活，影响G1期至S期的监控点[10]。国外研究[11-13]发现，高危型HPV E6/E7的细胞存在异常中心体，而低危型HPV E6/E7的细胞中则无，可见高危型HPV E6/E7蛋白共同作用诱导中心体异常，导致多倍体细胞发生，促进细胞恶变向肿瘤发展。

本研究旨在探讨HPV E6/E7蛋白在宫颈病变筛查中的应用，结果显示高危型HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA分型检测慢性宫颈炎及CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ及宫颈癌的检测率无明显差异，总检出率分别为60.0%、61.7%。且这两种方法检测宫颈病变的灵敏度、阳性预测值、阴性预测值差异无统计学意义，但高危型HPV E6/E7 mRNA检测特异度为83.3%，明显高于HPV DNA分型检测的41.7%。对于宫颈TCT显示为ASC-US的患者，临床多对其进行HPV DNA分型检测。既往研究[14]显示HPV DNA分型检测ASC-US患者亦会导致多数患者进行不必要的阴道镜下宫颈活组织检查。本研究将高危型HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA分型检测分别应用于25例ASC-US患者，结果显示高危型HPV E6/E7 mRNA检测的特异度为83.3%，明显高于HPV DNA分型检测的41.7，与Matah等[15]研究结果一致。可见高危型HPV E6/E7 mRNA检测具有更强的排除可疑或低度病变的能力，避免过度治疗给患者带来生理痛苦及精神负担。而高危型HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA在灵敏度、阳性预测值、阴性预测值方面的比较无差异，保证了对ASC-US高级病变的高识别能力，降低漏诊率。

综上所述，高危型HPV E6/E7 mRNA检测有助临床指导阴道镜的合理使用，尤其对于ASC-US高级病变患者。但本选取的样本量偏小，选取的样本均为宫颈疾病患者，会导致高危型HPV E6/E7 mRNA检出率较健康人群高，需要进一步大样本健康对照研究。

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ApplicationofhumanpapillomavirusE6/E7proteininscreeningcervicallesions

WEI Cai-ping

(DepartmentofGynecology,LiuzhouGeneralHospital,Liuzhou545006,Guangxi,China)

Objective：To explore the effect of human papilloma virus (HPV) E6/E7 protein in screening cervical lesions.MethodsA total of 70 patients with cervical lesions were selected and given cervical pathological examinations and ThinPrep liquid-based cytology (TCT) detection.The sensitivity and specificity of high-risk HPV E6/E7 mRNA detection and HPV DNA subtype detection were compared in detecting cervical cancer lesions and the high-degree cervical cancer lesions in patients with atypical squamous cells (ASC-US).ResultsThe total detection rates of high-risk HPV E6/E7 mRNA detection and HPV DNA subtype detection in detecting cervical lesions were 60.0%(42/70) and 67.1%(47/70),respectively.There was no significant difference between two methods in the detection rates of chronic cervicitis,cervical intraepithelial neoplasm (CIN) Ⅰ,CINⅡ～Ⅲ and cervical cancer (P>0.05).There was no significant difference in sensitivity,positive predictive value and negative predictive value between two methods in detecting cervical lesions (P>0.05),but high-risk HPV E6/E7 mRNA detection was notably higher than HPV DNA subtype detection in the specificity (P<0.05).In patients with ASC-US,high-risk HPV E6/E7 mRNA detection was notably higher than HPV DNA subtype detection in the specificity (P<0.05).ConclusionCompared with HPV DNA subtype detection,high-risk HPV E6/E7 mRNA detection is stronger in specificity in predicting cervical lesions,which is especially more definite in the distribution management of patients diagnosed as ASC-US by TCT.

Human papilloma virus;Cervical lesion;Atypical squamous cell;ThinPrep liquid-based cytology

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.05.006

2017-01-05

魏彩平(1981-)，女，主治医师。E-mail：alym41@sina.com

时间： 2017-10-10 02∶27

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171010.0227.014.html

1005-3697(2017)05-0670-03

R373.9

A

(学术编辑李均)

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