子宫内膜癌中孕激素与雌激素受体、Ki-67与C-erbB-2的表达及与病理的相关性分析

张鹏，刘海瑛，林慧，黄煜

(青岛大学附属青岛妇女儿童医院妇科，山东 青岛 266010)

子宫内膜癌中孕激素与雌激素受体、Ki-67与C-erbB-2的表达及与病理的相关性分析

张鹏，刘海瑛，林慧，黄煜

(青岛大学附属青岛妇女儿童医院妇科，山东 青岛 266010)

目的探讨子宫内膜癌中孕激素受体(progesterone receptor,PR)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、增殖细胞核抗原67(proliferating cell nuclear antigen 67,Ki-67)与表皮生长因子受体2(epidermal growth factor receptor 2,C-erbB-2)的表达及与病理的相关性。方法选择77例子宫内膜癌患者的病灶组织蜡块，检测其中PR、ER、Ki-67与C-erbB-2的表达。结果本组Ⅲ～Ⅳ期病灶PR、ER阳性率低于Ⅰ期与Ⅱ期(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期与Ⅱ期病灶Ki-67与C-erbB-2阳性率高于Ⅰ期(P<0.05)。本组G3类型病灶PR、ER低于G1类型(P<0.05)，Ki-67与C-erbB-2的阳性率高于G1类型(P<0.05)；G2类型病灶Ki-67阳性率高于G1类型(P<0.05)。本组浸润程度≤1/2的病灶PR、ER阳性率高于浸润程度>1/2病灶(P<0.05)，Ki-67阳性率低于浸润程度>1/2病灶(P<0.05)；浸润程度≤1/2病灶与>1/2病灶的C-erbB-2阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05)。本组有淋巴结转移的病灶PR、ER阳性率低于无淋巴结转移的病灶(P<0.05)，Ki-67阳性率高于无淋巴结转移的病灶(P<0.05)；有淋巴结转移者与无淋巴结转移者C-erbB-2阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05)。本组77例子宫内膜癌患者的Ki-67与C-erbB-2表达呈正相关性(P<0.05)。结论PR与ER阳性，Ki-67与C-erbB-2阴性的子宫内膜癌患者恶性程度相对较低，分化较佳，4项指标联合检测对评价子宫内膜癌的治疗、诊断及预后具有一定的指导意义。

子宫内膜癌；孕激素受体；雌激素受体；增殖细胞核抗原67(Ki-67)；表皮生长因子受体(C-erbB-2)；病理

子宫内膜癌是指子宫内膜上所发生的一组上皮性恶性肿瘤，多见于绝经后与围绝经期女性，且随着近年来人们生活水平的提高及医学检验技术的完善，该病的发病率也呈显著上升的趋势，给女性的生殖健康、生活质量及生命安全带来了巨大的影响。有研究发现，子宫内膜癌的形成、发展与预后不仅与女性体内孕激素与雌激素水平相关，同时也与细胞异常增殖、原癌基因异常激活有关[1]。为了进一步完善子宫内膜癌患者的诊疗与预评估方案，本研究采用免疫组织化学法测定77例子宫内膜癌患者组织内孕激素受体(progesterone receptor,PR)、增殖细胞核抗原67(proliferating cell nuclear antigen 67,Ki-67)与表皮生长因子受体2(epidermal growth factor receptor 2,C-erbB-2)的表达，以及分析与病理的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选择2015年1月至2016年12月本院77例子宫内膜癌患者的病灶组织蜡块，患者年龄：36～75岁，平均(50.6±5.6)岁；分化类型：低分化(G3)30例，中分化(G2)22例，高分化(G1)25例；FIGO临床病理分期：Ⅲ～Ⅳ期34例，Ⅱ期18例,Ⅰ期25例；浸润深度：≥1/2者34例，<1/2者43例；淋巴结转移情况：有33例，无44例；绝经情况：绝经50例，绝经年限1～22年(5.8±2.3)年；产次：0～5次(3.0±0.5)次；合并症：冠心病11例，糖尿病12例，高血压10例，高血脂5例。入组标准：(1)经病理检查证实；(2)本次研究内容均告知患者，并已取得其知情同意书。排除标准：(1)3个月内有孕激素与雌激素治疗史；(2)放化疗治疗史；(3)病理资料不完整。

1.2方法

1.2.1 治疗方法 本组77例子宫内膜癌患者均根据中华妇科学会妇科肿瘤学组[2]制定的规范实施全子宫切除术+盆腔淋巴结切除术或广泛子宫切除术治疗。

1.2.2 标本采集与处理 采用4%甲醛常规固定77例患者的组织标本，并以石蜡包埋。试剂：Ki-67试剂盒、C-erbB-2试剂盒、单克隆抗体PR、ER试剂均由上海超研生物科技有限公司提供，且为即用型。

1.2.3 免疫组织化学检测 子宫内膜癌组织切除后先经甲醛固定再由石蜡包埋。选择4 μm石蜡标本连续切片后，先确认病理情况再行脱蜡到水。采用3%双氧水进行10 min温孵育、水洗，热修复(pH 7.4，乙二胺四乙酸，0.01 mol/L)后恢复室温水洗，将其浸泡在磷酸盐缓冲液(0.05 mol/L)内5 min，以血清A封闭。通过免疫组织化学S-P法检测，滴加一抗1∶50的PR、ER、Ki-67与C-erbB-2工作液，放置在4 ℃冰箱内存储过夜，之后升至室温。采用磷酸盐缓冲液(0.05 mol/L)3次，5 min/次，滴加二抗并在37 ℃条件下孵育35 min，磷酸盐缓冲液(0.05 mol/L)3次，5 min/次，二氨基联苯胺显色5 min，之后充分水洗，给予10 min的苏木素对比染色，30 min水洗反蓝，脱水后封片。

1.3观察指标

对比不同病理分期、分化类型、浸润程度、淋巴结转移情况下PR、ER、Ki-67与C-erbB-2的表达，以及Ki-67与C-erbB-2相关性。研究结果均由2名具有丰富临床工作经验的病理医师评定，在意见不同的情况下由第3名病理医师评定，以2名相同意见为准。阳性信号呈棕褐色或棕黄色颗粒。Ki-67、PR与ER阳性表达呈棕黄色，位于细胞核，C-erbB-2定位在细胞膜，阳性呈棕黄色颗粒状；Ki-67定位在细胞核，阳性呈棕黄色颗粒状。阳性百分比为平均阳性细胞比例值。半定量分级[3]：阳性细胞在50%以上为强阳性，阳性细胞在26%～50%之间为阳性，阳性细胞在10%～25%之间为弱阳性，阳性细胞低于10%为阴性。阳性=(强阳性+阳性)。

1.4统计学分析

2 结果

2.1本组病灶不同病理分期下PR、ER、Ki-67与C-erbB-2的表达

本组Ⅲ～Ⅳ期病灶PR、ER阳性率低于Ⅰ期与Ⅱ期(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期与Ⅱ期病灶Ki-67与C-erbB-2阳性率高于Ⅰ期(P<0.05)。见表1。

表1本组病灶不同病理分期下PR、ER、Ki-67与C-erb B-2的表达[n(%)]

病理分期nPR阳性ER阳性Ki-67阳性C-erbB-2阳性Ⅲ～Ⅳ期346(17.65)*#6(17.65)*#25(73.53)*20(58.82)*Ⅱ期1814(77.78)16(88.89)12(66.67)*14(77.78)*Ⅰ期2514(56.00)19(76.00)9(36.00) 6(24.00) χ2值11.85615.1607.65211.325P值<0.05<0.05<0.05<0.05

*P<0.05，与Ⅰ期比较；#P<0.05，与Ⅱ期比较。

2.2本组病灶不同分化类型下PR、ER、Ki-67与C-erbB-2的表达

本组病灶G3类型PR、ER低于G1类型(P<0.05)，Ki-67与C-erbB-2的阳性率高于G1类型(P<0.05)；G2类型Ki-67阳性率高于G1类型(P<0.05)。见表2。子宫内膜分化越差，PR、ER表达越低。见图1及图2。

表2本组病灶不同分化类型下PR、ER、Ki-67与C-erbB-2的表达[n(%)]

分化类型nPR阳性ER阳性Ki-67阳性C-erbB-2阳性G3306(20.00)*6(20.00)*24(80.00)*24(80.00)*G22210(45.45)15(68.18)16(72.73)*10(45.45) G12518(72.00)20(80.00)6(24.00) 6(24.00) χ2值12.52314.52310.5967.526P值<0.05<0.05<0.05<0.05

*P<0.05，与G1类型比较。

2.3本组病灶不同浸润程度下PR、ER、Ki-67与C-erbB-2的表达

本组病灶浸润程度≤1/2的PR、ER阳性率高于浸润程度>1/2的病灶(P<0.05)，Ki-67阳性率低于浸润程度>1/2的病灶(P<0.05)；浸润程度≤1/2与>1/2的的病灶C-erbB-2阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3本组病灶不同浸润程度下PR、ER、Ki-67与C-erbB-2的表达[n(%)]

浸润程度nPR阳性ER阳性Ki-67阳性C-erbB-2阳性>1/2438(18.60)11(25.58)27(62.79)21(48.84)≤1/23426(76.47)*30(88.24)*19(55.88)*19(55.88)χ2值8.82613.5666.5232.563P值<0.05<0.05<0.05<0.05

*P<0.05，与浸润程度>1/2的病灶比较。

2.4本组病灶不同淋巴结转移情况下PR、ER、Ki-67与C-erbB-2的表达

本组有淋巴结转移的病灶PR、ER阳性率低于无淋巴结转移(P<0.05)，Ki-67阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.05)；有淋巴结转移与无淋巴结转移者C-erbB-2阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4本组病灶不同淋巴结转移情况下PR、ER、Ki-67与C-erbB-2的表达[n(%)]

淋巴结转移nPR阳性 ER阳性 Ki-67阳性 C-erbB-2阳性有336(18.18)*5(15.15)*30(90.91)*12(36.36)无4428(63.64)36(81.82)16(36.36)28(63.64)χ2值14.5237.8964.8561.640P值<0.05<0.05<0.05<0.05

*P<0.05，与无淋巴结转移病灶比较。

2.5本组病灶Ki-67与C-erbB-2的相关性分析

本组77例子宫内膜癌患者的Ki-67与C-erbB-2表达呈正相关性(P<0.05)。见表5。

表5 本组病灶Ki-67与C-erbB-2的相关性分析

3 讨论

子宫内膜癌是女性生殖系统最为常见的肿瘤之一，每年新发病例约20万例，现已成为仅次于宫颈癌与卵巢癌的第三大妇科恶性肿瘤[4]。据相关调查显示，子宫内膜癌在女性全身恶性肿瘤中的发病率为7%，在生殖系统恶性肿瘤中为20%～30%，且发病率呈逐渐上升的趋势[5]。

研究发现，至1968年学者Tenson等在阴道、子宫与垂体组织内发现大量激素受体后，近年来对孕激素与雌激素的研究也越发明确[6]。雌激素与孕激素主要存在于女性生殖系统内，是一种重要的调节物质。然而，细胞癌变后损伤了雌激素与孕激素的受体产生与作用，若癌变程度超过一定指标，则生殖系统内性激素受体即会降低，甚至消失。有学者认为，子宫内膜癌属于激素依赖性疾病，其临床病理特点与患者体内孕激素与雌激素水平密切相关[7]。本研究结果发现，本组Ⅲ～Ⅳ期病灶PR、ER阳性率低于Ⅰ期与Ⅱ期(P<0.05)，G3类型病灶PR、ER低于G1类型(P<0.05)，有淋巴结转移的病灶PR、ER阳性率低于无淋巴结转移者(P<0.05)，本组浸润程度≤1/2的病灶PR、ER阳性率高于浸润程度>1/2者(P<0.05)。结果可见，PR与ER缺失与子宫内膜癌细胞恶性程度、分化程度、有无淋巴转移及浸润程度密切相关，PR与ER水平越低，其恶性程度越高，这与部分学者的研究结果相符[8-9]。此外，PR与ER的存在说明肿瘤细胞对激素具有一定的反应，是抗雌激素治疗方案的理论依据，同时激素失表达亦是评估肿瘤激素治疗效果的重要标志，所以检测PR与ER则对子宫内膜癌患者术后综合治疗具有重要的指导意义。

Ki-67主要存在于组织增殖核基内的核蛋白，它是由分子质量为395 000与345 000的两条多肽链构成，在10号染色体上定位基因，普遍存在于除G0期外细胞周期内的任何阶段[10]。Ki-67的半衰期较短，当与细胞周期脱离后能够快速降解，所以现已广泛应用于肿瘤细胞增殖活性的检测中。本研究结果显示，Ⅲ～Ⅳ期与Ⅱ期病灶Ki-67阳性率高于Ⅰ期(P<0.05)，G3、G2类型病灶Ki-67阳性率高于G1类型(P<0.05)，浸润程度≤1/2的病灶Ki-67阳性率低于浸润程度>1/2者(P<0.05)，Ki-67阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.05)。结果可见，Ki-67高表达可能提示着细胞增生活跃，易发生转移，侵袭性强，预后不良。Ki-67抗原可作为评估子宫内膜癌分化状态、增殖状态的重要指标，利于识别肿瘤侵袭力，且对子宫内膜癌恶化、复发及治疗效果评估具有重要的预测价值[11]。

C-erbB-2是在17号染色体长臂上的蛋白基因，其表皮因子受体与结构相似。有研究指出，C-erbB-2蛋白基因物质的降低可以有效阻断肿瘤细胞的分化与增殖。本研究结果显示，Ⅲ～Ⅳ期与Ⅱ期病灶C-erbB-2阳性率高于Ⅰ期(P<0.05)，G3类型C-erbB-2的阳性率高于G1类型(P<0.05)。C-erb

B-2是高表达说明肿瘤侵袭作用更强，这可能与肿瘤的形成、演变及预后有关。然而，浸润程度≤1/2与>1/2的病灶、有淋巴结转移与无淋巴结转移者C-erbB-2阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05)，此结果与部分研究有所差异，有待扩大研究样本进一步验证[12-13]。同时，子宫内膜癌是一个多步骤、多基因的发展过程，主要包括癌基因被激活，细胞凋亡或受阻、细胞增殖活跃及异型变化等，继而形成肿瘤[14]。本组77例子宫内膜癌患者的Ki-67与C-erbB-2表达呈正相关性(P<0.05)。可见，Ki-67表达与C-erbB-2表达相关，二者均有可能参与了子宫内膜癌的发病、进展过程，并可影响疾病预后[15]。

总之，PR与ER阳性，Ki-67与C-erbB-2阴性的子宫内膜癌患者恶性程度相对较低，分化较佳，反之则恶性程度高、分化差，术后需要密切随访并行辅助治疗。同时，PR、ER、Ki-67与C-erbB-2联合检测对评价子宫内膜癌的治疗、诊断及预后具有一定的指导意义。

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Expressionofprogesteronereceptor,estrogenreceptor,Ki-67andC-erbB-2inendometrialcarcinomaandcorrelationwithpathology

ZHANG Peng,LIU Hai-ying,LIN Hui,HUANG Yu

(DepartmentofGynecology,AffiliatedQingdaoWomenandChildren’sHospitalofQingdaoUniversity,Qingdao266010,Shandong,China)

Objective：To investigate the expression of progesterone receptor (PR),estrogen receptor (ER),proliferating cell nuclear antigen 67(Ki-67) and epidermal growth factor receptor 2(C-erbB-2) in endometrial carcinoma and correlation with pathology.MethodsThe expression of PR,ER,Ki-67 and C-erbB-2 were detected in 77 patients with endometrial carcinoma.ResultsGroup Ⅲ～Ⅳ stage PR,ER positive rate were lower than Ⅰ with Ⅱ period (P<0.05),the positive rate of Ki-67 and C-erbB-2 in the stage Ⅲ～Ⅳ and Ⅱwere higher than that inⅠperiod (P<0.05).In this group,PR and ER of G3 type were lower than that of G1 (P<0.05),and the positive rate of Ki-67 and C-erbB-2 were higher than that of G1 (P<0.05).Ki-67 positive rate of G2 type was higher than that of G1 type (P<0.05).In this group,the PR and ER positive rate of degree of invasion≤1/2 were higher than that of degree of invasion>1/2,and the positive rate of Ki-67 was lower than that of degree of invasion>1/2 (P<0.05).There was no statistically significant difference between degree of invasion≤1/2 and>1/2 in the positive rate of C-erbB-2 (P>0.05).In this group,PR and ER positive rate with lymph node metastasis was lower than that without lymph node metastasis (P<0.05),and Ki-67 positive rate was higher than that with no lymph node metastasis (P<0.05).There was no statistically significant difference between lymph node metastasis and without lymph node metastatic C-erbB-2 positive rate (P>0.05).The expression of Ki-67 was positively correlated with the expression of C-erbB-2 (P<0.05) in the patients with intrauterine carcinoma.ConclusionThe malignancy of PR and ER positive,Ki-67 and C-erbB-2 negative endometrial carcinoma is relatively low,and the differentiation is better.The combination of four indicators for diagnosis and prognosis of endometrial carcinoma has a certain guiding significance.

Endometrial carcinoma;Progesterone receptor;Estrogen receptor;Ki-67;C-erbB-2;Pathology

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.05.005

2017-04-14

张鹏(1978-)，男，硕士，主治医师。E-mail:dafutong@126.com

黄煜，E-mail:huangyuqd@126.com

时间： 2017-10-10 02∶27

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171010.0227.012.html

1005-3697(2017)05-0666-04

R737.33

A

(学术编辑张科荣)

本刊网址：http：//www.nsmc.edu.cn作者投稿系统http：//noth.cbpt.cnki.net邮箱xuebao@nsmc.edu.cn