黄芪总皂苷对脾虚大鼠胃黏膜损伤的抑制作用和血流量的改善作用研究*

张 厚 ，宋延秋 ，陈广军

1.南阳医学高等专科学校第二附属医院(南阳 473000)，2.南阳医学高等专科学校第三附属医院(南阳 473000)

黄芪总皂苷对脾虚大鼠胃黏膜损伤的抑制作用和血流量的改善作用研究*

张 厚1，宋延秋1，陈广军2

1.南阳医学高等专科学校第二附属医院(南阳 473000)，2.南阳医学高等专科学校第三附属医院(南阳 473000)

目的:探讨黄芪总皂苷对脾虚大鼠胃黏膜损伤的抑制作用和黏膜血流量的改善作用研究。方法:随机将60只SPF级SD雄性大鼠分为5组：正常组、模型组和黄芪总皂苷小、中、高剂量组。除正常组之外，其余各组建立大鼠脾虚模型，待造模4周后，小、中、高剂量组给予黄芪总皂苷灌胃，剂量分别为25、50、100 mg/kg，正常组、模型组给予相同体积的生理盐水灌胃。各组持续灌胃2周。观察各组大鼠的指标。结果: 与正常组对比，模型组的黏膜血流量、肠道灌流液IgA和血清NO、SOD、IgG均明显的降低，血清MDA升高(P<0.01)；与模型组对比，黄芪总皂苷各剂量组的黏膜血流量、肠道灌流液IgA和血清NO、SOD、IgG均升高，黏膜损伤指数和血清MDA降低(P<0.05或P<0.01)。结论: 黄芪总皂苷能抑制脾虚大鼠黏膜损伤，改善黏膜血流量，这可能与提高机体免疫功能和抑制脂质过氧化作用有关。

黄芪是中医方剂中最常用的中药之一，其中黄芪总皂苷是黄芪的活性组分，属于从中药黄芪提取的皂苷类成分[1]。黄芪总皂苷在抗氧化、抗炎、抗菌、抗衰老、增加免疫功能等方面有较大的作用[2]。中医认为，脾虚证是指脾气不足，失其健运，主要表现为腹胀纳呆、倦怠乏力、面色萎黄、少气懒言、消瘦、大便溏薄、舌淡苔白、脉缓弱等。黄芪能补肺健脾，实卫敛汗，用于气虚乏力、食少便溏等，有研究表明[3]，黄芪总皂苷对大黄脾虚大鼠胃黏膜胃泌酸具有调节作用。因此，本文以脾虚模型大鼠为实验对象，观察了黄芪总皂苷对大鼠黏膜损伤的抑制作用及改善黏膜血流量的作用。

材料与方法

1 动 物 60只SPF级SD雄性大鼠，体质量为180～220 g，由河北省实验动物中心提供，合格证编号0003677。

2 主要仪器 BIO-RAD酶标仪Xmark(美国BIO-RAD伯乐公司)；LD-5M立式低速冷冻离心机(四川蜀科仪器有限公司)；ABM-6L型冷冻包埋机(湖北安立信医疗实业有限公司)；CUT6062全自动旋转式石蜡切片机(德国slee公司)；KD-P漂烘片机(上海隆拓仪器设备有限公司)；ZYJ-1000型金相显微镜(上海兆仪光电科技有限公司)。

3 药品及试剂 黄芪总皂苷(分光光度法纯度95.8%，自制)。

4 方 法

4.1 分组、模型建立及给药方法:随机将60只SPF级SD大鼠分为正常组、模型组和黄芪总皂苷小、中、高剂量组。除正常组之外，其余各组建立大鼠脾虚模型[4]：参照破气苦降加饥饱失常法，将大黄、枳实、厚朴以2∶3∶3的比例，水煎，制成1kg/L药液，隔日灌胃，同时隔日喂食，持续4周。正常组隔日给予0.9%生理盐水灌胃，同时隔日喂食。在造模后，小、中、高剂量组给予黄芪总皂苷灌胃，剂量分别为25、50、100 mg/kg，正常组和模型组给予相同体积的0.9%生理盐水灌胃。各组持续灌胃2周，每天2次，早晚各一次。

4.2 观察指标: ①一般形态：观察大鼠的外观行为学；②黏膜损伤：采用Guth标准[5]评价黏膜损伤程度；③免疫球蛋白A(Ig A)：待最后一次灌胃给药后，禁食不禁水24 h，肠灌洗液灌胃4次，2 ml/次，收集肠灌洗液，采用ELISA法测定其中Ig A的含量；④黏膜血流量：麻醉大鼠，采用激光多普勒微循环血流仪测定胃体大弯、小弯、胃窦的血流量，取各处的平均值作为黏膜血流量；⑤血清一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、免疫球蛋白G (IgG)：取大鼠腹主动脉血，采用ELISA法测定血清NO、MDA、Ig G的含量及SOD活性；⑥黏膜病理学：取同一部位的病变胃黏膜组织，采用甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色等步骤，在光镜下观察黏膜病理学情况。

结 果

1 对一般形态的影响 正常组精神状态好，行动灵活，食欲佳，皮毛光泽，大小便正常，体重增加，未见异常；余各组出现以下变化：排便次数增多，便形稀溏，肛门污秽；少动、扎堆、悬空拉尾抵抗力减弱；毛发枯乱、无光泽，皮肉瘦削，食欲较差，进食量明显减少；鼻、眼有血性分泌物。黄芪总皂苷各剂量组在治疗后上述症状和体征逐渐消失，绝大多数大鼠基本恢复正常。

2 对胃黏膜形态学的影响 正常组大鼠胃组织细胞排列紧密、有序，细胞结构清晰，腺体完整，未见明显异常；模型组大鼠黏膜组织遭到破坏，上皮细胞脱落、坏死，腺体排列紊乱，黏膜下层水肿，炎性细胞浸润，腺体扩张，有红细胞外渗；高剂量组可见少量上皮细胞脱落，损伤情况均轻于模型组，中剂量组与低剂组可见上皮细胞局部脱落，黏膜损伤稍重于高剂量组，均轻于模型组,见图1。

图1 黄芪总皂苷对脾虚大鼠胃黏膜病理学影响(HE染色×200)

3 对胃黏膜损伤、黏膜血流量及免疫功能的影响 与正常组对比，模型组的黏膜血流量明显降低 (P<0.01)；与模型组对比，各剂量组的黏膜损伤指数降低，黏膜血流量升高 (P<0.05或P<0.01),与正常组对比，模型组的血清IgG、肠道灌流液IgA均明显的降低 (P<0.01)；与模型组对比，各剂量组的血清IgG、肠道灌流液IgA均升高 (P<0.01)，见表1。

表1 黄芪总皂苷对脾虚大鼠胃黏膜损伤、黏膜血流量及免疫功能的影响

注：与正常组对比，#P<0.01；与模型组对比，△P<0.05，▲P<0.01

4 对血清的NO、SOD及MDA的影响 与正常组对比，模型组的血清的NO、SOD降低，MDA升高 (P<0.01)；与模型组对比，各剂量组的血清的NO、SOD升高，MDA降低(P<0.01)，见表2。

讨 论

脾虚证以消化吸收功能障碍为主要表现，正常大鼠的胃黏膜损伤可自我修复，若脾气不足，致使黏膜防御机能低下，最终导致黏膜损害，黏膜的坏死往往伴有微血管的损伤、黏膜的高渗。有研究报道[6]，破气苦降加饥饱失常法造模形成的脾虚模型症状与临床脾虚证表现非常类似。大黄因其性苦寒，损伤脾胃，因此，在大黄苦寒泻下基础上改进的破气苦降加饥饱失常法是目前较普遍运用的一种造模方法，且简单易行。在造模期间，正常组大鼠未见异常，其余各组出现排便次数增多、毛发枯乱、无光泽、食欲较差等症状少，这结果说明造模后大鼠的症状与脾虚证临床表现非常吻合。

表2 黄芪总皂苷对脾虚大鼠血清NO、SOD及MDA的影响

注：与正常组对比，*P<0.05，#P<0.01；与模型组对比，△P<0.05，P<0.01

黄芪总皂苷对黏膜保护及损伤后修复具有重要作用[7]。各剂量组的黏膜损伤指数较模型组降低，表明黄芪总皂苷有降低黏膜损伤指数作用，能减轻脾虚大鼠黏膜损伤程度。各剂量组可见上皮细胞脱落，损伤情况均轻于模型组，这提示黄芪总皂苷能保护黏膜上皮细胞，减轻黏膜损伤。

黏膜微循环障碍可能是组织坏死的主要原因之一，脾虚大鼠的黏膜表层微循环血液灌注不足，导致黏膜微血管损伤[8]。模型组的黏膜血流量较正常组明显降低，与文献报道一致[9]。与模型组对比，各剂量组的黏膜血流量升高，黄芪总皂苷能改善黏膜微循环状况，促进黏膜表层微循环正常的血液灌注。刘芬等[10]研究报道，脾虚证大鼠黏膜血流量发生显著性的改变，电镜下可见毛细血管内皮细胞结构遭到破坏。黄芪总皂苷通过改善微循环状况，保证氧和其他营养物质的供给充足，为上皮细胞的再生和修复提供了物质基础[11]。

黏膜损伤和微血管损伤的病理过程中产生大量的自由基，损伤内皮细胞[12]。SOD是氧自由基清除因子，在维持氧化和抗氧化的平衡中发挥作用[13]。MDA可以对血管壁造成直接的损伤，形成黏膜损伤。模型组的血清的SOD较正常组降低，MDA较正常组升高，提示脾虚大鼠自由基增多，清除能力减弱。与模型组对比，各剂量组的血清的SOD升高，MDA降低，说明黄芪总皂苷减少自由基，保护内皮细胞的损伤，抗黏膜损伤的作用。NO是一种内源性活性物质，既具有保护作用，又有杀伤毒性与促炎的作用；NO在黏膜损伤后的修复及愈合过程中发挥着非常重要的作用，特别是对急性黏膜损伤具有急性保护作用[14]。本文中模型组的血清NO较正常组降低，而经过黄芪总皂苷干预后，NO在血清中的含量又升高，这说明黄芪总皂苷能促进NO分泌，促进黏膜损伤后的修复。

脾为后天之本，气血生化之源，气主防御与胃肠道黏膜的免疫系统存在这一定的关联。lgG、IgA免疫系统中的重要分子。黄芪总皂苷对脾虚大鼠血清IgG、肠道灌流液IgA升高作用明显，说明黄芪总皂苷对脾虚大鼠的免疫功能具有促进作用，这与黄芪总皂苷能调节机体免疫系统的研究结果一致[15]。

综上所述，黄芪总皂苷能抑制脾虚大鼠黏膜损伤，改善黏膜血液循环，这可能与提高机体免疫功能和抑制脂质过氧化作用有关。

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StudyontheinhibitoryeffectofgastricmucosalinjuryandimprovingroleofgastricmucosalbloodflowinspleendeficientratbytotalsaponinsofAstragalus

Zhang Hou， Song Yanqiu，Chen Guangjun

The Second Affiliated Hospital of Nanyang Medical College(Nanyang473000)

Objective: To explore inhibitory effect of gastric mucosal injury and improving role of gastric mucosal blood flow in spleen deficient rat by total saponins of Astragalus. Methods: 60 SPF SD male rats were randomly divided into normal group, model group, and total saponins of Astragalus of small, medium and high dose group. In addition to normal group, the rest were established model of spleen deficient, after 4 weeks, total saponins of Astragalus of small, medium and high dose group was given total saponins of Astragalus, with dose of 25, 50 and 100 mg/kg, respectively, normal group and model group was given same volume of physiological saline lavage. Each group was continued to fill stomach for 2 weeks. Each index of rats were observed. Results: Compared with normal group, model group of gastric mucosal blood flow, IgA intestinal perfusion fluid and serum NO, SOD, IgG were significantly reduced, serum MDA increased (P<0.01); Compared with model group, gastric mucosal blood flow, IgA intestinal perfusion fluid and serum NO, SOD and IgG of total saponins of Astragalus each dose group rise, gastric mucosal damage index and serum MDA lower (P<0.05 orP<0.01). Conclusion: Total saponins of Astragalus can inhibit rat gastric mucosal injury, and improve gastric mucosal blood flow, this may be related with improving body's immune function and inhibition of lipid peroxidation.

Spleen deficient Total saponins of Astragalus Mucosal injury Immune function Animal experimentation Rats

*河南省教育厅科学技术研究重点项目(15A360023)

脾虚 黄芪总皂苷 黏膜损伤 免疫功能 动物，实验 大鼠

R96

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.10.081

(收稿：2017-02-18)