脑心舒口服液中蜂王浆的质量分析研究

郑艳青，张静，任菲菲，闫雪，刘德丽

（山东省德州市食品药品检验检测中心，山东 德州 253015）

脑心舒口服液中蜂王浆的质量分析研究

郑艳青，张静，任菲菲，闫雪，刘德丽

（山东省德州市食品药品检验检测中心，山东 德州 253015）

目的：以脑心舒口服液中的蜂王浆为研究对象，建立脑心舒口服液中蜂王浆的质量评价方法。方法：采用薄层色谱法（TLC）对样品中的蜂王浆进行定性鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC）测定样品中蜂王浆的10-羟基-2-癸烯酸含量。结果：样品的薄层色谱斑点不一，10-羟基-2-癸烯酸含量在0.029mg/支～1.969mg/支。结论：各厂家生产所投药材质量和数量差异较大。

脑心舒口服液；蜂王浆；10-羟基-2-癸烯酸；薄层色谱法；高效液相色谱法

脑心舒口服液由蜜环菌浓缩液和蜂王浆两味药组成，具有滋补强壮，镇静安神之功效，用于身体虚弱，心神不安，失眠多梦，神经衰弱，头痛眩晕属上述证候者[1]。脑心舒口服液为常用中成药，生产企业共有109家，涉及批准文号109个[2]。质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册，《国家中成药标准汇编经络肢体脑系分册》，国家药品监督管理局国家药品标准WS3-B-3975-98-2002和WS-11356（ZD-1356）-2002。处方制法均一致，但各标准均不相同。各个标准都有10-羟基-2-癸烯酸的薄层鉴别项，但大部分企业执行的国家药品标准WS3-B-3975-98-2002无成分含量测定项，不能够保证产品质量。

蜂王浆中含有丰富的脂肪酸，具有活化细胞、促使伤口愈合、促进内分泌、增加食欲、增强体力、防治骨质疏松、延缓衰老、安神、抗菌、抗癌、抗辐射等多种生理活性，具有极高的医药和保健价值[3-7]，在本方中对药品的疗效起着至关重要的作用。蜂王浆的功效成分是10-羟基-2-癸烯酸[8]，至今未在自然界其他物质中发现此化合物[9]。本实验对13个厂家生产的33批脑心舒口服液中的蜂王浆质量进行系统的研究，为标准的提高提供一定的依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Mettler XS105DU电子天平；LC-20A岛津高效液相色谱仪、Kromasil C18色谱柱、SPD-20A紫外检测器；Agilen1200高效液相色谱仪、Kromasil C18色谱柱、G1314B VWD检测器。

1.2 试药

10-羟基-2-癸烯酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110812-200506，纯度97.6%），10-羟基-2-癸烯酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110812-201507，纯度99.2%）；甲醇、乙腈为色谱纯；无水乙醇、石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、冰醋酸、三氯甲烷、环己烷、磷酸为分析纯，水为超纯水。脑心舒口服液33批样品，均为山东省17地市市售品种，来自13个不同生产企业。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 标准所用方法取样品20 mL，加正丁醇10 mL、乙酸乙酯15 mL，密塞，振摇，静置。取上清液，蒸干，加乙酸乙酯0.5 mL，溶解，作为供试品溶液。另取10-羟基-2-癸烯酸对照品适量，加乙酸乙酯制成每1 mL约含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（5∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰[1]。结果见图1。

2.1.2 修订后所用方法将展开剂和显色剂稍作调整，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯-冰醋酸(3∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2%高锰酸钾溶液[10]。薄层色谱图见图2。

2.2 10-羟基-2-癸烯酸成分测定

2.2.1 色谱条件C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（22∶78），体积流量1.0 mL/min，柱温30℃；检测波长207 nm；进样量10 µL。对照品、样品及阴性对照的色谱图见图3。

图1 标准方法-不同批次样品色谱图

图2 修订方法-不同批次样品色谱图

图3 10-羟基-2-癸烯酸对照品、样品及阴性对照色谱图

2.2.2 溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取10-羟基-2-癸烯酸对照品10.02mg（纯度97.60%），置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含97.80 µg的贮备液（10℃以下保存）。‚供试品溶液的制备：取本品2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至近刻度，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）10 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 µm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 线性关系与检出限精密量取10-羟基-2-癸烯酸对照品贮备液0.5，1，2，3，4 mL,分别置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 µL，在色谱条件下依次进样，以峰面积为纵坐标，对照品的浓度（µg/mL）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程，

Y＝44.175X－1.8902，r＝1.0000，线性范围为1.9559～15.6472 µg/mL。按信噪比3∶1计，检出限为78.2362 ng/mL。

2.2.4 精密度试验精密吸取同一对照品溶液10 µL，按“2.2.1”项下色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，RSD为0.16%，表明仪器精密度良好。

2.2.5 重复性试验取同一批次样品6份，按“2.2.2”项下制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样，测定10-羟基-2-癸烯酸峰面积，结果RSD值为0.58%。

2.2.6 稳定性试验取同一供试品溶液，分别在制备后0，2，4，8，12，24 h进行测定，10-羟基-2-癸烯酸峰面积的RSD值为0.22%。表明样品溶液在24 h内稳定。

2.2.7 加样回收率试验分别精密吸取已知含有量的样品1 mL，共6份，置25 mL量瓶中，分别加入质量浓度为97.80 µg/mL的对照品溶液1 mL。按“2.2.2”项下制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样，结果见表1。

2.2.8 样品测定

取33批脑心舒口服液样品，分别按“2.2.2”项下制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表2。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）

表2 脑心舒口服液测定结果

续表

3 讨论

本实验采用薄层色谱法（TLC），对33批脑心舒口服液进行蜂王浆主成分10-羟基-2-癸烯酸的鉴别，按照标准规定的鉴别方法，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（5∶1∶0.5）为展开剂，以5%香草醛硫酸溶液为显色剂[1]，展开效果不理想，将展开剂和显色剂稍作调整，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯-冰醋酸（3∶1∶0.1）为展开剂，以0.2%高锰酸钾溶液为显色剂[10]，样品主斑点清晰可见，含量由低到高，斑点的大小也由小到大，1批肉眼看不到主斑点，说明1个厂家蜂王浆的投料存在问题。有报道原卫生部颁标准第二十册的TLC，在10-羟基-2-癸烯酸对照品上方有一大斑点，与10-羟基-2-癸烯酸的Rf值接近，极易视其为边缘效应而认为是10-羟基-2-癸烯酸[11]。综上所述，按照国家药品标准WS-11356（ZD-1356）-2002标准的规定，展开后的色谱图斑点清晰，分离效果较好。

本实验采用HPLC对33批脑心舒口服液进行蜂王浆主成分10-羟基-2-癸烯酸的考察，根据测定结果，企业间含量差异较大，参照国家药品标准WS-11356（ZD-1356）-2002标准中含量测定的规定，每支含10-羟基-2-癸烯酸不得少于2.0mg，仅有一个厂家的样品是合格的，说明药材质量差异较大或者部分企业未按规定处方量投料。15号样品与26号样品是同厂家同批号，但是含量结果差别较大，分别进行了人员比对和仪器比对，含量结果与原检验结果一致，含量仍差别较大。查阅文献，一直以来人们认为10-羟基-2-癸烯酸具有一定的热稳定性[12]，在高温下含量变化不明显[13]，但近年来研究发现，10-羟基-2-癸烯酸在蜂王浆产品中不稳定，如蜂王浆口服液中的10-羟基-2-癸烯酸稳定性差[14]，有研究表明，蜂王浆成品冷藏时的含量稳定[15]，这也与药品说明书的贮藏（密封，置阴凉处）一致。同厂家同批号含量不同可能与运输过程或者经营单位的贮存环境有关。

脑心舒口服液现行质量标准有多个，大部分企业执行的质量标准太低，基本不能控制药品质量。国家食品药品监督管理局标准参差不齐，无法有效地控制脑心舒口服液的质量。建议将现行的脑心舒口服液质量标准进行整合统一，提高后收入《中华人民共和国药典》，切实可行地来保证脑心舒口服液的安全、有效。

[1] 国家药品监督管理局国家药品标准.WS3-B-3975-98-2002,脑心舒口服液[S].2002.

[2] 国家食品药品监督管理总局.[EB/OL]http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0001/.

[3] Izuta H,Shimazawa M,Tsuruma K,et al.Bee products prevent VEGF-induced angiogenesis in human[J].BMC Complement Altern Med,2009,9:45.

[4] Nakajima Y,Tsuruma K,Shimazawa M, et al.Comparison of bee products based on assays of antioxidant capacities[J]. BMC Complement Altern Med,2009,9:4.

[5] Hidaka S,Okamoto Y,Uchiyama S, et al.Royal jelly prevents osteoporosis in rats beneficial effects in ovariectomy model and in bone tissue culture model[J]. Evid Based Complement Alternat Med,2006,3(3):339-348. [6] Kim J, Kim Y, Yun H, et al.Royal jelly enhances migration of human dermal fi brolasts and alters the level[J].Nutr Res Pract,2010,4(5):362-368.

[7] Honda Y,Fujita Y, Maruyama H,et al.Lifespanextending effects of royal jelly and its related substances on the nematode coenorhabditis elegans[J].PLoS One,2011,6(8):e23527.

[8] 李维,刘伟,张大辉.蜂王浆10-羟基-2-癸烯酸热稳定性的探讨[J].黑龙江医药,2005,18(3): 203-204.

[9] 倪辉,杨远帆,彭莺.蜂王浆中10-HAD的研究进展[J].中国蜂业,2006,57(3):9-10.

[10] 国家药品监督管理局国家药品标准.WS-11356(ZD-1356)-2002,脑心舒口服液[S].2003.

[11] 吴活龙,胡剑.对脑心舒口服液质量标准中鉴别(2)的修改建议[J].中国药师,2003,6(4):251.

[12] 刘晓华,孙文基.王浆酸的研究进展概况[J].中国药品标准,2004,5(1):9-10.

[13] Chen C,Chen SY.Change in protein components and storage slubility of royal jelly under various conditions[J]. Food chemistry, 1995,54(2):195-200.

[14] 王兰霞,冯祥瑞,张伯崇.蜂王浆及其制剂的质量研究[J].兰州科技情报,1995,24(2):2-4.

[15] 和健,彭涛,戴美玲,等.冻干蜂王浆软胶囊的制备及稳定性影响因素研究[J].中成药,2008,30(12): 1757-1762.

The Analysis of the Quality of Naoxinshu Oral Liquid in Toyal Jelly

Zheng Yan-qing, Zhang Jing, Ren Fei-fei,Yan Xue,Liu De-li
(Dezhou Food and Drug Control/Testing Center, Shangdong Province, Shandong Dezhou 253015, China)

Objective：Royal jelly in naoxinshu oral liquid was used as the research object, and the quality evaluation method of royal jelly in naoxinshu oral liquid was established.Methods：Thin layer chromatography (TLC) was used for quality identi fi cation of royal jelly, and high performance liquid chromatography (HPLC) was used to detect the content of 10- hydroxy -2- acid in royal jelly .Results：The spots of TLC is different in size, the content of 10- hydroxy -2- acid of the samples were between 0.029mg pev vial～1.969mg pev vial.Conclusion：The quality and quantity of the medicinal materials produced in each manufacturer are quite different.

Naoxinshu Oral Liquid; Royal Jelly; 10-hydroxy-2-decenoic Acid; TLC; HPLC

R286

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.09.007

2017 - 05 - 02

郑艳青，女，副主任中药师。研究方向：中药及中成药的检验。通讯作者E-mail：zhengqujin@126.com

本文编辑：鲁守琴