鞭打绣球中黄酮及黄酮苷类成分研究

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1.云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会—教育部重点实验室，云南 昆明 650500； 2.云南白药集团创新中心，云南 昆明 650111

鞭打绣球中黄酮及黄酮苷类成分研究

逯娅1代家猛1李艳红1杨淬1田凯1王韦1杨志2阮榕生1黄相中1*

1.云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会—教育部重点实验室，云南 昆明 650500； 2.云南白药集团创新中心，云南 昆明 650111

目的研究民间传统彝族药鞭打绣球的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、凝胶色谱、高效液相色谱法等分离方法分离纯化鞭打绣球的化学成分，并根据化合物的理化性质及波谱数据鉴定其结构。结果分离得到8个黄酮及黄酮苷类化合物，分别鉴定为：木樨草素(1)，芹菜素(2)，槲皮素 (3)，桑色素 (4)，5,3',4'-三羟基-7-甲氧基黄酮(5)，胡桃宁(6)，山奈酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)，木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷)(8)。结论化合物1-8均为首次从该属植物中分离得到。

鞭打绣球；黄酮；化学成分

鞭打绣球 (HemiphragmaheterophyllumWall)又名羊膜草，红顶珠，红豆草，连线草，地红参等，是玄参科 (Scrophulariaceae)鞭打绣球属植物[1]，为单属种植物，是云南彝族地区常用的一味民间药物，主要用于治疗关节扭伤[2]，胆囊炎，风湿，月经异常，齿龈痛等病症[3]，也可治疗积食、腹胀。但国内外对其化学成分的研究较少。马伟光，田亮等从鞭打绣球中分离得到了苯丙素苷、环烯醚萜苷等类型的化合物[4-6]，何可群等测定了鞭打绣球干燥全草中黄酮的平均含量为9.335%[7]。为了深入了解鞭打绣球的黄酮类化学成分及药理活性，研究对鞭打绣球95%乙醇提取物进行了化学成分研究，从中分离得到了8个黄酮及黄酮苷类化合物(如图1所示)。

1 实验部分

1.1 仪器 1260型高效液相色谱仪、半制备色谱柱(Eclipse XDB-C18; 9.4mm× 250 mm, 5μm，美国安捷伦科技公司)；Bruker AV-400核磁共振仪(TMS为内标，瑞士布鲁克公司)。

1.2 材料 柱层析硅胶(100～200目，200～300目，由青岛海洋化工厂)；羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20；20～150μm)、中压色谱分离凝胶(MCI，瑞典Pharmacia精细化工有限公司)。试剂为工业级石油醚、氯仿，乙醇，甲醇；甲醇和乙腈(GR，赛默飞世尔科技有限公司)；水为自制超纯水；显色剂为10%硫酸乙醇溶液。鞭打绣球样品于2014年9月采自云南保山市腾冲县，由云南民族大学杨青松副教授鉴定为鞭打绣球(HemiphragmaheterophyllumWall.)

1.3 提取与分离 将鞭打绣球干燥全草 (10.00kg)粉碎，用 95% 的乙醇回流提取得到浸膏 (1.09kg). 浸膏分散在水中，依次用石油醚、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取。将醋酸乙酯萃取部分 (270.00g)通过氯仿:甲醇 (50:1～2:1)硅胶柱层析，得到8个组分Fr.1～Fr.8。将组分Fr.6 (13.60 g)进行MCI色谱柱层析，用10%～100%甲醇溶液梯度洗脱，得到6个组分Fr.6.1～Fr.6.6。将组分Fr.6.2经过Sephadex LH-20柱层析，以甲醇为流动相纯化后，经硅胶柱色谱，以氯仿:甲醇 (30:1～5:1)为流动相反复分离纯化得到化合物1 (16.3 mg)，2 (12.3 mg)，3 (21.1 mg)；将组分Fr.6.3通过Sephadex LH-20纯化和半制备高效液相色谱仪制备分离得到化合物4 (11.7 mg), 5 (13.5mg), 6 (11.0 mg)；将组分Fr.6.4通过Sephadex LH-20柱层析，以氯仿:甲醇 (2:1)为流动相，分离得到化合物7 (10.6 mg) 和8 (13.1 mg)。

2 结构鉴定

化合物1: 黄色粉末(甲醇), ESI-MS m/z: 287 [M+H]+，分子式为C15H10O6; 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH12.9 (1H, s,5-OH), 9.95 (1H, s,7-OH), 9.64 (1H, s, 4'-OH)，9.34 (1H, s, 3'-OH),7.35 (1H, s, H-2'), 7.09 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'), 6.88 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'),6.64 (1H, s, H-3), 6.42 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.18 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6);13C NMR (100 MHz, CD3OD) δC: 164.2(C-2), 102.4(C-3), 181.2 (C-4), 161.2 (C-5),98.1(C-6), 164.3 (C-7), 94.0 (C-8), 157.4 (C-9), 103.3 (C-10), 121.3 (C-1'), 113.1 (C-2'), 146.0 (C-3'), 150.0 (C-4'), 115.8(C-5'), 120.6 (C-6')。以上数据与文献[8]对照基本一致，因此鉴定该化合物为木樨草素(luteolin)。

化合物2:黄色粉末(甲醇), ESI-MS m/z: 271 [M+H]+，分子式为C15H10O5；1H NMR (400 MHz, CD3OD):δH 13.90 (1H, s, 5-OH), 10.29 (1H, s, 7-OH), 9.92 (1H, s, 4'-OH), 7.96 (2H,d, J = 8.2 Hz, H-2', H-6'), 6.80 (2H, d, J= 8.2 Hz, H-3', H-5' ), 6.78 (1H, s, H-3), 6.52 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.21 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δC: 164.2 (C-2), 102.4 (C-3), 181.2 (C-4), 161.6 (C-5), 98.3 (C-6), 164.2 (C-7), 93.2 (C-8), 156.9 (C-9), 102.4 (C-10), 121.3 (C-1'), 126.8 (C-2'), 115.3 (C-3'), 160.5 (C-4'), 115.3 (C-5'), 126.8 (C-6')。以上数据与文献[9]对照基本一致，因此鉴定该化合物为芹菜素(apigenin)。

化合物3: 黄色粉末(甲醇), ESI-MS m/z: 303 [M+H]+，分子式为C15H10O7；1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH 12.17 (1H, s, 5-OH), 10.56 (1H, s,7-OH), 9.80 (1H, s, 4'-OH),9.17 (1H, s, 3-OH), 9.06 (1H, s, 3'-OH),7.46(1H, s, H-2'),7.32 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'), 6.97 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'),6.56 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.21 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6);13C NMR (100 MHz, CD3OD): δC 147.3 (C-2), 137.5 (C-3), 176.9 (C-4), 162.0 (C-5), 98.8 (C-6), 165.1 (C-7), 93.9 (C-8), 157.0 (C-9), 104.0 (C-10), 123.2 (C-1'),116.2 (C-2', C-5'),146.7 (C-3'), 149.5 (C-4'), 120.6 (C-6')。以上数据与文献[10]对照基本一致，因此鉴定该化合物为槲皮素(quercetin)。

化合物4:黄色粉末(甲醇), ESI-MS m/z: 303 [M+H]+，分子式为C15H10O7；1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH 12.27 (1H, s, 5-OH), 10.56 (1H, s,7-OH), 9.80 (1H, s, 4'-OH),9.23 (1H, s, 2'-OH), 8.17 (1H, s, 3-OH),8.13(1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'), 7.41 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'),6.76 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.35 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6);13C NMR (100 MHz, CD3OD):δC 156.2 (C-2), 136.7 (C-3), 176.1 (C-4), 161.2 (C-5), 98.0 (C-6), 164.3 (C-7), 93.1 (C-8), 163.2 (C-9), 103.2 (C-10), 119.8 (C-1'), 145.9 (C-2'), 115.5 (C-3'), 146.5 (C-4'), 115.5 (C-5'), 122.4 (C-6')。以上数据与文献[11]对照基本一致。因此鉴定该化合物为桑色素(morin)。

化合物5: 黄色粉末(甲醇), ESI-MS m/z: 287 [M+H]+，分子式为C15H10O6；1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH 12.8 (1H, s,5-OH), 9.84 (1H, s,3'-OH), 9.39 (2H, s, 4'-OH),7.25 (1H, s, H-2'), 7.21 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'), 6.93 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'),6.84 (1H, s, H-3), 6.51 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.32 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 3.79 (3H, s,7-OCH3); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δC: 164.6 (C-2), 102.4 (C-3), 182.4 (C-4), 161.7 (C-5), 98.7 (C-6), 164.9 (C-7), 93.5 (C-8), 157.9 (C-9), 104.5 (C-10), 122.6 (C-1'), 113.7 (C-2'), 145.7 (C-3'), 149.5 (C-4'), 115.3 (C-5'), 118.8 (C-6'), 55.4 (7-OCH3)。以上数据与文献[12]对照基本一致，因此鉴定该化合物为5,3',4'-三羟基-7-甲氧基黄酮(5,3',4'-trihydroxy-7-methoxyflavone)。

化合物6:黄色粉末(甲醇), ESI-MS m/z: 419 [M+H]+，分子式为C20H18O10；1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH 13.90 (1H, s, 5-OH), 10.29 (1H, s, 7-OH), 9.92 (1H, s, 4'-OH), 7.96 (2H,d, J = 8.3 Hz, H-2', H-6'), 6.92 (2H, d, J= 8.3 Hz, H-3', H-5' ), 6.41 (1H, s, H-8), 6.19 (1H, s, H-6); 5.47 (1H, brs, H-1''); 13C NMR (100 MHz, CD3OD): δC 158.7 (C-2), 135.1 (C-3), 180.1 (C-4), 163.3 (C-5), 100.0 (C-6), 166.2 (C-7), 94.9 (C-8), 159.6 (C-9), 105.8 (C-10), 122.9 (C-1'), 132.1(C-2', C-6'), 116.7 (C-3', C-5'), 161.7 (C-4'), 109.8 (C-1''), 83.5 (C-2''), 78.8 (C-3''), 88.2 (C-4''), 62.7 (C-5'')。以上数据与文献[13]对照基本一致，因此鉴定该化合物为胡桃宁(juglanin)。

化合物7:黄色粉末(甲醇), ESI-MS m/z: 433 [M+H]+，分子式为C21H20O10；1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH 12.17 (1H, s, 5-OH), 9.80 (1H, s, 4'-OH),9.17 (1H, s, 3-OH),8.60 (2H,d, J = 8.0 Hz, H-2', H-6'), 7.05 (2H, d, J= 8.0 Hz, H-3', H-5' ), 6.79 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-8), 6.34 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-6), 5.41 (1H, d, J = 7.2 Hz, H-1''); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δC: 147.8 (C-2), 137.7 (C-3), 176.7 (C-4), 163.7 (C-5), 98.5 (C-6), 162.6 (C-7), 94.5 (C-8), 155.6 (C-9), 104.7 (C-10), 121.5 (C-1'), 131.7 (C-2', 6'), 115.4 (C-3', 5'), 159.8 (C-4'), 99.8 (C-1''), 72.9 (C-2''), 76.2 (C-3''), 69.4 (C-4''), 77.3 (C-5''), 60.4 (C-6'')。以上数据与文献[14]对照基本一致，因此鉴定该化合物为山奈酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol-7-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物8: 黄色粉末(甲醇), ESI-MS m/z: 611 [M+H]+，分子式为C27H30O16；1H NMR (400 MHz, CD3OD):δH 12.2 (1H, s,5-OH), 9.54 (1H, s, 4'-OH)，9.21 (1H, s, 3'-OH), 7.46 (1H, s, H-2'), 6.93 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'), 7.45 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'), 6.71 (1H, s, H-3), 6.84 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.59 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 5.07 (1H, d, J = 7.2 Hz, H-1''), 4.39 (1H, s, H-1''');13C NMR (100 MHz, CD3OD):δC 163.9 (C-2), 102.0 (C-3), 182.1 (C-4), 161.6 (C-5), 100.3 (C-6), 162.6 (C-7), 95.1 (C-8), 157.6 (C-9), 104.9 (C-10), 121.8 (C-1'), 114.5 (C-2'), 145.6 (C-3'), 149.8 (C-4'), 116.2 (C-5'), 119.7 (C-6'), 100.3 (C-1''), 73.8 (C-2''), 75.8 (C-3''), 71.0 (C-4''), 75.8 (C-5''), 69.4, (C-6''), 104.3 (C-1'''), 73.9 (C-2'''),76.0 (C-3'''), 70.1 (C-4'''), 76.9 (C-5'''), 61.4 (C-6''')。以上数据与文献[15]对照基本一致，因此鉴定该化合物为木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-gentiobioside)。

3 结果与讨论

对鞭打绣球95%乙醇提取物进行了化学成分研究，分离并鉴定得到8个黄酮和黄酮苷类化合物，根据化合物的理化性质及波谱数据分析，将其分别确定为木樨草素(1),芹菜素(2),槲皮素(3),桑色素(4), 5,3',4'-三羟基-7-甲氧基黄酮(5), 胡桃宁(6), 山奈酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7), 木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)，这8个黄酮类化合物均为首次从该属植物中分离得到。

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StudyontheFlavonoidsfromHemiphragmaheterophyllumWall

LU Ya1DAI Jiameng1LI Yanhong1YANG Cui1TIAN Kai1WANG Wei1YANG Zhi2RUAN Rongsheng1HUANG Xiangzhong1*

1.Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicinal Resources, State Ethnic Affairs Commission and Ministry of Education, Yunnan Minzu University, Kunming 650504,China; 2.Yunnan Baiyao Group Innovation Research and Development Center, Kunming 650111,China

ObjectiveTo investigate the phytochemical constituents from ethanol extractions ofHemiphragmaheterophyllumWall, a traditional Yi medicine, widely used by Yi people.MethodsChemical constituents were isolated by silica gel column, Sephadex LH-20, HPLC,et al, identified by physiochemical and spectral analysis.ResultsEight flavonoids were isolated from ethanol extract ofHemiphragmaheterophyllumWall. These compounds were elucidated as luteolin (1), apigenin(2), quercetin(3),morin(4), 5,3',4'-trihydroxy-7-methoxyflavone(5), juglanin(6), kaempferol 7-O-β-D-glucopyranoside(7), and luteolin-7-O-β-D- gentiobioside(8).ConclusionIt is deserved to be mentioned that all of the compounds were obtained from this plant for the first time.

HemiphragmaheterophyllumWall; Flavonoids; Chemical Constituents

R284.1

A

1007-8517(2017)18-0021-04

2017-07-28 编辑：梁志庆)

国家自然科学基金项目(81460535)；云南民族大学研究生创新基金科研项目(2016YJCXS16)；云南民族大学大学生创业创新训练计划项目(16000416)。

逯娅(1992-)，女，硕士研究生，研究方向为天然药物化学。E-mail:18230118273@163.com

黄相中(1974-)，男，博士研究生，教授，研究方向为天然药物化学。E-mail:xiangzhong@126.com