MIC基因多态性与解脲脲原体感染的易感关联性研究

李 瑜 陈 恩 陈纯静 曾凡胜 周 琳 曾 威

(益阳医学高等专科学校，益阳 413000)

MIC基因多态性与解脲脲原体感染的易感关联性研究

李 瑜 陈 恩①陈纯静②曾凡胜 周 琳 曾 威③

(益阳医学高等专科学校，益阳 413000)

目的研究MIC等位基因多态性与解脲脲原体感染易感性之间的关联性。方法采用PCR-SSP和PCR-SBT方法对样本MIC等位基因的多态性进行检测。结果解脲脲原体患者中检出12种MICA、5种MICA-STR和14种MICB等位基因；和对照组相比较，解脲脲原体患者组中MICA* 010和MICB*009N等位基因分布频率更高(MICA* 010:OR=3.85，95%CI：2.12-6.99，Pc<0.05;MICB*009N:OR=3.22，95%CI：1.33-7.80，Pc<0.05)，MICA-A5.1和MICB*00502等位基因分布频率更低(MICA-A5.1：OR=0.61，95%CI：0.40-0.94，Pc<0.05；MICB*00502：OR=0.58，95%CI：0.40-0.83，Pc<0.05)，差异均具有统计学意义；基因型方面，MICA*010/010、MICA*01201/01201纯合子分布频率更高(MICA*010/010：OR=14.84，95%CI：1.90-115.9，Pc<0.05；MICA*01201/01201：OR=10.83，95%CI：1.35-86.79，Pc<0.05)，差异均具有统计学意义；解脲脲原体患者中MICB*00502/00502纯合子分布频率较高，但差异不具有统计学意义(Pc>0.05)。结论MIC等位基因多态性与解脲脲原体的易感性间存在关联性。

MIC 基因；基因多态性；解脲脲原体

解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum，UU)亦称溶脲脲原体，是常见的性传播性疾病病原体，虽然解脲脲原体感染的常规应对方案为抗生素治疗，但由于感染后症状不明显，易被忽视而延误诊治，常导致持续感染；持续感染时可导致组织进行性破坏和形成组织瘢痕，引起严重的并发症和后遗症，如男性的附睾炎、尿道炎、女性的子宫内膜炎、盆腔炎、异位妊娠、输卵管性不孕等多种疾病[1,2]。

MIC是主要组织相容性复合体 Ⅰ 类相关基因(Major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related gene，MIC)，MIC基因家族又称PERB11，毗邻HLA-B基因，属非经典的MHC Ⅰ 类基因家族，1994年由美国西雅图大学研究中心Spies教授领导的研究队伍报道[3]。MIC基因位于人类第6号染色体短臂，具有广泛的多态性[4]。MIC基因家族包括MICA、MICB、MICC、MICD、MICE、MICF和MICG 7个基因，其中只有MICA、MICB是有功能的基因，具有编码、转录、表达蛋白的功能，MICA/MICB编码产物与HLA Ⅰ类分子极其相似，包括信号肽、胞外α1、α2和α3结构，跨膜区和胞浆尾巴，但不与β2球蛋白结合。MICA/MICB是NK细胞表面NKG2D分子的配体，MICA/MICB与NK细胞表面NKG2D分子结合后，可以通过调节NK细胞功能来发挥重要的作用。

研究表明，MIC基因的多态性与多种疾病易感性相关，但暂无与中国南方人群解脲脲原体患者易感性相关的报道[5-7]。因此本研究以南方汉族解脲脲原体人群为研究对象，以健康人群作为正常对照，对MIC基因多态性及解脲脲原体易感性之间的关联性进行研究。

1 材料与方法

1.1研究对象 122名解脲脲原体患者来自于湖南省益阳市中心医院2012年10月至2016年2月的就诊患者，且根据病史及相关检测，排除有其他病原体感染的患者。患者平均年龄34.5岁(23～61岁)，其中女性81例(66%)，男性41例(34%)。137 例健康人群作为对照，年龄33.0岁(18～65岁)，其中女性95例(69%)，男性42例(31%)。研究对象相互间无亲缘关系，均知情同意，并符合伦理委员会的相关要求。

1.2方法

1.2.1外周血基因组DNA 的提取 收集新鲜的EDTA抗凝静脉血2 ml，采用WHO推荐的标准盐析法提取gDNA[8]，测定波长260 nm和280 nm 的OD 值，A260 /A280值在1.6～1.8范围内为宜。

1.2.2MIC基因分型方法 采用PCR-SSP(PCR sequence-specific primers)[9,10]与PCR-SBT(PCR sequence-based typing)[11,12]两种不同的方法对样本进行MIC基因分型。大部分样本采用PCR-SSP方法进行分型，考虑到部分罕见MIC等位基因型别无法用PCR-SSP方法分析，采用PCR-SBT方法分析。PCR-SBT方法参照文献[13,14]，采用Chromas Lite 2.01 软件对测序结果进行分析，扫描MIC多态位点，进行人工判读并与MIC序列数据库中的标准序列进行比对，获得相应的MIC等位基因型别。

1.3统计学分析 MIC等位基因频率、MIC基因型频率、Hardy-Weinberg equilibrium(HWE)采用SHESIS软件进行计算获得。关联性分析采用Logistic回归进行统计分析，显著性检验采用Fisher精确概率检验进行，对P值采用Bonferroni校正后得到的Pc值在5%水平上进行检验。

2 结果

2.1Hardy-Weinberg 平衡吻合度检验 所选择的健康对照经Hardy-Weinberg平衡吻合度检验分析表明，各等位基因的分布理论频率与观察频率之间无显著性差异，表明本实验所选样本是符合Hardy-Weinberg 平衡的随机婚配群体。

2.2MICA 等位基因多态性与解脲脲原体相关性分析 解脲脲原体患者中共检出12 种MICA 等位基因，其中MICA*019、MICA*010、MICA*00201是患者组中分布频率最高的3种等位基因，分别占20.1%、19.3%、19.3% 。和对照组相比较，解脲脲原体患者组中MICA* 010等位基因分布频率显著偏高(20.1% vs 5.8%)，MICA*010等位基因可能对解脲脲原体易感(OR=3.85，95%CI：2.12-6.99，Pc<0.05)，见表1。

2.3MICA-STR基因多态性与解脲脲原体关联性分析 解脲脲原体患者中共检出 5种MICA-STR等位基因，其中MICA-A5在解脲脲原体患者组中分布频率最高，占39.3%。与对照组比较，解脲脲原体患者组中MICA-A5.1等位基因分布则显著降低(16.8% vs 24.8%，OR=0.61，95%CI：0.40-0.94，Pc<0.05)，可能对解脲脲原体感染不易感，见表2。

2.4MICA 基因型与解脲脲原体相关性分析 和对照组基因型比较，解脲脲原体患者组MICA*010/010、MICA*01201/01201纯合子分布频率显著增高(MICA*010/010：9.8% vs 0.7%；MICA*01201/01201：7.4% vs 0.7%)； MICA*010/010、MICA*01201/01201纯合子可能对解脲脲原体易感(MICA*010/010：OR=14.84，95%CI：1.90-115.9，Pc<0.05；MICA*01201/01201：OR=10.83，95%CI：1.35-86.79，Pc<0.05)，见表3。

2.5MICB 等位基因多态性与解脲脲原体相关性分析 解脲脲原体患者中共检出14 种MICB 等位基因，其中MICB*00502、MICA*002是患者组中分布频率最高的2种等位基因，分别占29.5%、18.4%。和对照组相比较，解脲脲原体患者组中MICB*00502等位基因分布频率显著偏低(29.5% vs 42.0%)，可能对解脲脲原体不易感(OR=0.58，95%CI：0.40-0.83，Pc<0.05)，而MICB* 009N等位基因分布频率显著偏高(7.8% vs 2.6%)，可能对解脲脲原体易感(OR=3.22，95%CI：1.33-7.80，Pc<0.05)，见表4。

2.6MICB 基因型与解脲脲原体相关性分析 解脲脲原体患者中MICB*00502/00502纯合子分布频率较高，与对照组相比较，MICB基因型与解脲脲原体易感性之间不存在相关性，见表5。

表1 MICA等位基因频率在解脲脲原体患者与对照人群中的比较

Note：1)P<0.05.

表2 MICA-STR等位基因频率在解脲脲原体感染患者与对照人群中的比较

Note：1)P<0.05.

表3 MICA基因型频率在解脲脲原体感染患者与对照人群中的比较

Note：1)P<0.05.

表4 MICB等位基因频率在解脲脲原体感染患者与对照人群中的比较

Note：1)P<0.05.

表5 MICB基因型频率在解脲脲原体感染患者与对照人群中的比较

3 讨论

解脲脲原体是常见的性传播性疾病病原体，因感染后症状不明显，易被忽视而延误诊治，导致组织进行性破坏和形成组织瘢痕，引起严重的并发症和后遗症，如输卵管性不孕等多种疾病。现代医学认为，疾病的易感与遗传多态性有关。我们课题组前期研究发现，MICA-A5.1和MICA*008等位基因与沙眼衣原体易感性呈负相关，带有该等位基因的个体不易被沙眼衣原体所感染；何丽等[15]研究发现，中国北方汉族人群HLA-A基因多态性与SARS-Cov易感性相关；Zhao等[16]近来研究表明，功能性的MICA-129基因多态性与溃疡性结肠炎的发病呈正相关。Gissel等[17]发现MICA*008型别为登革热发病的易感基因，这些研究结果提示MICA/MICB在多种疾病感染与转归的过程中发挥了重要的作用，但解脲脲原体感染与MICA/MICB遗传多态性之间的关系还未见报道。

我们采用PCR-SSP及PCR-SBT方法检测了解脲脲原体感染患者组和对照组中MIC等位基因分布的频率，首次报道了MIC等位基因在中国南方人群中解脲脲原体感染患者中的分布。解脲脲原体感染患者组中共检出12种MICA 等位基因和14种MICB等位基因；和正常对照组相比较，MICA*010和MICB* 009N等位基因在解脲脲原体感染组分布频率较高，可能是解脲脲原体易感等位基因(OR均大于1，且Pc<0.05)。解脲脲原体患者组中MICB*00502等位基因分布频率显著偏低，可能对解脲脲原体不易感(OR=0.58，Pc<0.05)。对基因型比较发现，解脲脲原体患者组MICA*010/010、MICA*01201/01201纯合子分布频率显著增高，可能对解脲脲原体易感(OR均大于1，且Pc<0.05)。这些研究结果表明MIC等位基因多态性与解脲脲原体的易感性间存在关联性，推测可能的致病机制是由于某些型别的MIC基因编码的蛋白质分子与NK细胞、CD8+T细胞上的NKG2D受体亲和力低，导致这些免疫细胞不能有效活化，对感染的病原体不能有效清除所致。

在本研究中，解脲脲原体感染患者组中MICA-A5.1等位基因分布则显著降低，可能对解脲脲原体感染不易感(OR=0.61,Pc<0.05)。MICA-A5.1是在其跨膜区第5个GCT重复顺序上再额外插入一个G碱基，形成GGCT序列，导致该基因发生了移码突变，在TM区提早出现了终止密码子，经转录翻译时，蛋白质翻译提前结束从而缺少了胞浆区，形成了短尾的蛋白分子[18,19]；部分型别的MICA-A5.1在氨基酸129位置编码缬氨酸(V)，能降低MICA蛋白与NKG2D受体的结合力，其原因在于129位置的M能够与G136、A139、M140等氨基酸残基之间形成疏水键，而129位置的缬氨酸则会破坏这一结构，从而使得螺旋部位的构象发生变化，最后导致对MICA与NKG2D的结合力产生影响[20]，降低了MICA蛋白与NKG2D的结合能力，导致活化的NK细胞数量偏少，于是NK细胞分泌的抵抗解脲脲原体感染的细胞因子降低，从而引起解脲脲原体的持续感染。

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[收稿2017-03-22 修回2017-05-25]

(编辑 倪 鹏)

StudyonassociationbetweenMICgenepolymorphismandureaplasmaurealyt-icuminfection

LIYu，CHENEn,CHENChun-Jing，ZENGFan-Sheng，ZHOULin，ZENGWei.
YiyangMedicalCollege,Yiyang413000,China

Objective:To investigate the association between MIC allele polymorphism and susceptibility to Ureaplasma urealyticum infection.MethodsPCR-SSP and PCR-SBT were used to analyze the gene polymorphism of every one.ResultsTwelve allele genes of MICA and five MICA-STR and fourteen MICB were found in the participants，the frequency of MICA*010 and MICB*009N were higher in ureaplasma urealyticum infection patients than in healthy controls(MICA* 010:OR=3.85,95%CI:2.12-6.99,Pc<0.05;MICB*009N:OR=3.22,95%CI:1.33-7.80,Pc<0.05);the frequencies of MICA-A5.1 and MICB*00502 were lower in ureaplasma urealyticum infection patients than in healthy controls(MICA-A5.1:OR=0.61,95%CI:0.40-0.94,Pc<0.05;MICB*00502:OR=0.58,95%CI:0.40-0.83,Pc<0.05),the differences were statistically significant;MICA*010/010,MICA*01201/01201 homozygote were higher in ureaplasma urealyticum infection patients than in healthy controls(MICA*010/010:OR=14.84,95%CI:1.90-115.9,Pc<0.05:MICA*01201/01201:OR=10.83,95%CI:1.35-86.79,Pc<0.05)，the differences were statistically significant.The distribution frequency of MICB*00502/00502 in patients with ureaplasma urealyticum was higher,but the difference was not statistically significant(Pc>0.05).ConclusionMIC allele gene polymorphism may be associated with ureaplasma urealyticum infection.

MIC alleles;Gene polymorphism;Ureaplasma urealyticum

①南华大学附属第一医院，衡阳 421001。

②长沙医学院，长沙 410219。

③益阳市中心医院，益阳 413000。

R392

A

1000-484X(2017)10-1478-05

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.10.008

李 瑜(1984年-)，女，硕士，讲师，主要从事遗传免疫学方面研究，E-mail:120819273@qq.com。