沙棘籽提取物配方产品抗氧化作用的研究

谭志超

（北京宝得瑞健康产业有限公司，北京 101117）

沙棘籽提取物配方产品抗氧化作用的研究

谭志超*

（北京宝得瑞健康产业有限公司，北京 101117）

近年国家提出大健康战略，推出了《中国特殊医学用途配方食品》，意在将医疗前置，发挥中国传统医学的优势，使用中药及提取物进行组方治疗未病。随着年龄的增长，人体内源性抗氧化酶的分泌逐渐减少，体内自由基不断积累，从而导致疾病的发生，如糖尿病、心血管疾病、癌症、帕金森和阿尔兹海默症、缺血再灌注损伤等。沙棘原花青素具有很强的抗氧化活性，可以有效清除体内自由基。本研究将沙棘籽提取物和沙棘油、紫苏籽油组方，并以沙棘原花青素为标志性成分，研究组方的抗氧化活性，进而为解决慢性疾病问题提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

沙棘籽提取物，北京宝得瑞健康产业有限公司；沙棘油，北京宝得瑞健康产业有限公司；紫苏籽油，吉林圣基实业有限公司。

1.2 试剂

原花青素对照品，天津尖峰天然产物有限公司；丙二醛（MDA）测定试剂盒、还原型谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒、谷胱肽过氧化物酶（GSH-PX）活力测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.3 试验动物

SPF级昆明种雄性12月龄小鼠60只，生产许可证号为SCXK（鄂）2015-0018，使用许可证号为SYXK（鄂）2012-0065，湖北省实验动物研究中心。试验动物饲料，生产许可证号为SYXK（鄂）2011-0011，武汉万千佳兴生物科技有限公司。动物饲养室温度为20℃～26℃，湿度为40%～70%。

1.4 试验方法

1.4.1 样品处理

样品制备：准确称取配方产品5.0 g、10.0 g、15.0 g，分别用大豆油定容至100 mL，供低、中、高剂量组小鼠灌胃用，称取100 mL大豆油作为溶媒对照组和100 mL纯水作为阴性对照组，各剂量均按0.01 mL/gBW的容量灌胃。各剂量组产品均在试验前配制，临用前摇匀，未用完的样品放入4℃冰箱保存。

1.4.2 原花青素含量测定

1.4.2.1 试样制备

称取50 mg～1 000 mg试样置于小烧杯中，加入30 mL甲醇，转移至50 mL容量瓶中，超声处理20 min，冷却至室温后，加甲醇至刻线，摇匀。取1 mL稀释后的试样，用甲醇定容至10 mL备用。

1.4.2.2 标准曲线绘制

称取原花青素对照品10.0 mg溶于10 mL甲醇中，分别吸取该溶液0.0 mL、0.3 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.7 mL、2.1 mL、2.5 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻线，摇匀，各取1 mL于546 nm波长下测定吸光度值，绘制标准曲线。

1.4.2.3 试样中原花青素含量测定

将正丁醇与盐酸按95∶5的体积比混合后，取出6 mL置于圆底烧瓶中，再加入0.2 mL硫酸铁铵溶液和1 mL试样溶液，混匀，置沸水浴（＞95℃）回流，加热40 min后，立即置于冰水浴中冷却，1 h内于546 nm波长处测定吸光度值，由标准曲线计算试样中原花青素含量。

1.4.3 动物试验

将60只12月龄小鼠按血中丙二醛（MDA）水平随机分为5组，分别为溶媒对照组、阴性对照组、低、中、高剂量组，其中低、中、高剂量组分别以0.50 g/kg BW、1.00 g/kg BW、1.50 g/kg BW剂量连续灌胃30 d，溶媒对照组和阴性对照组分别以等量的大豆油和纯水灌胃30 d。受试动物连续灌胃30 d后，各组动物选择内眦静脉采血，配置成1%的溶血液，分别检测丙二醛（MDA）含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力；处死动物，取肝脏做匀浆，制备10%的肝匀浆，做还原型谷胱甘肽（GSH）测定。

1.4.4 统计分析方法

用SPSS软件进行方差分析，按程序先进行方差齐性检验，若方差齐，计算F值，若F值＜F0.05，表明各组均数间无显著性差异；若F值≥F0.05，P≤0.05，需采用多个试验组和一个对照组间均数的两两比较法进行统计。

对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验统计。

2 结果与分析

2.1 配方产品中沙棘原花青素含量

测定结果表明，配方产品中沙棘原花青素含量为（8.31±0.074）g/kg。

2.2 配方产品对小鼠体重的影响

配方产品对小鼠体重的影响结果见下页表1。由表1可知，配方产品对各剂量组小鼠体重均无明显影响，与阴性对照组和溶媒对照组比较，均无显著性差异P＞0.05。

2.3 配方产品对小鼠1%溶血液中GSH-PX活力和MDA含量的影响

不同试验组小鼠1%溶血液中GSH-PX活力和MDA含量测定结果见下页表2。由表2可知，配方产品高剂量组能显著减少小鼠1%溶血液中MDA含量，能显著升高小鼠1%溶血液中GSH-PX活力，与阴性对照组和溶媒对照组比较，均有显著性差异（P＜0.05）。

表1 配方产品对小鼠体重的影响（n=12）

表2 配方产品对小鼠1%溶血液中GSH-PX活力和MDA含量的影响（n=12）

2.4 配方产品对小鼠肝匀浆中GSH含量的影响

不同试验组小鼠肝匀浆中GSH含量测定结果见表3。由表3可知，配方产品高剂量组能显著提高小鼠10%肝匀浆中GSH含量，与阴性对照组和溶媒对照组比较，均有显著性差异（P＜0.05）。

表3 配方产品对各组小鼠10%肝匀浆中GSH含量的影响（n=12）

3 结论

以SPF级昆明种12月龄小鼠为试验对象，分为溶媒对照组、阴性对照组、低、中、高剂量组，连续灌胃30 d后，检测相关指标，通过计算P值，对试验结果的显著性差异进行判断。试验结果显示，将各剂量组分别与阴性对照组和溶媒对照组比较，高剂量组小鼠10%肝匀浆中还原性GSH含量显著升高，1%溶血液中MDA含量显著减少，1%溶血液中GSH-PX活力显著升高，表明沙棘籽提取物为主体的配方产品具有抗氧化作用。

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Study on antioxidation effect of seabuckthorn seed extract

TAN Zhichao*
（Beijing baoderui health industry co.LTD，Beijing 101117，China）

以沙棘籽提取物为主体，复配沙棘油、紫苏籽油进行组方，以沙棘原花青素为标志性成分，按人群推荐摄入量为每人每天3 g，确定摄入剂量为0.05 g/kg BW（成人体重均值以60 kg计）。按照人群推荐日摄入量的10、20、30倍设置低、中、高3个剂量组（即0.5 g/kg BW、1.0 g/kg BW、1.5 g/kg BW），对SPF级昆明种小鼠连续灌胃30 d，以溶血液中MDA含量、溶血液GSH-PX活力、肝匀浆中GSH含量为评价指标，各剂量组分别与阴性对照组和溶媒对照组比较。结果显示，高剂量组小鼠10%肝匀浆中还原性GSH含量显著升高，1%溶血液中MDA含量显著减少，1%溶血液中GSH-PX活力显著升高。试验表明，以沙棘籽提取物为主体的配方产品具有抗氧化作用。

沙棘籽提取物；抗氧化；沙棘原花青素

With seabuckthorn seed extract as the main body,compound with seabuckthorn procyanidins,perilla seed oil formula,sea buckthorn procyanidins as iconic composition,according to the crowd is recommended intake per day for 3 g,to determine the dosage is 0.05 g/kg BW(adult weight average at 60 kg).In accordance with the recommended daily intake of crowd 10,20,30 times set high,medium and low three dose groups(i.e.,0.5 g/kg BW,1.0 g/kg BW,1.5 g/kg BW),continuous lavage for SPF kunming mice to 30 d,to dissolve the MDA content in blood and dissolving blood gsh-px activity,content of GSH in liver homogenate as evaluation index,each dose group compared with negative control group and solvent control group respectively.The results showed that the reduced GSH content in the high-dose group was significantly higher in 10%of the hepatic homogenate,and the content of MDA in 1%dissolved blood was significantly decreased,and the gsh-px activity in 1%dissolved blood was significantly increased.The experiment shows that the formula with the extract of the seed extract is antioxidative.

seabuckthorn seed extract；antioxidant；seabuckthorn procyanidins

TS225.1+9

A

1673-6044（2017）02-0019-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.02.007

*谭志超，男，1979年出生，2003年毕业于内蒙古农业大学生物技术专业，质量工程师。

2017-05-31