冠状动脉粥样硬化斑块稳定性与血清基质金属蛋白酶-9及超敏C反应蛋白浓度的关系△

宋 颖，李晓燕

（济南军区总医院，济南250031）

·实验研究·

冠状动脉粥样硬化斑块稳定性与血清基质金属蛋白酶-9及超敏C反应蛋白浓度的关系△

宋 颖，李晓燕

（济南军区总医院，济南250031）

目的 探讨冠状动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）斑块稳定性与血清基质金属蛋白酶-9（matrix metallo⁃proteinase-9，MMP-9）及超敏C反应蛋白（high sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）浓度的关系。方法 按照随机分组方法将56只大白兔划分为2组：A组为AS研究组40只，A组分为A1亚组（斑块破裂组）、A2亚组（斑块未破裂组）；B组为参照组16只。A组采用（标准颗粒+1%胆固醇）进行喂养+球囊损伤，B组采用标准颗粒喂养。在研究期间，动态监测A、B两组血清MMP-9和hs-CRP浓度及血脂的变化情况。结果 研究期间，B组兔的体质量与A1、A2亚组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。实验开始、实验第14周末，B组血脂指标变化不明显，A2和A1亚组的血脂指标由实验开始时到实验第14周末呈上升趋势；实验第14周末，B组与A1、A2亚组的血脂浓度比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；但是A2亚组和A1亚组血脂浓度比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。在第4周时，B组与A1亚组、A2亚组的血清MMP-9和hs-CRP浓度比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。在第10周时，B组、A2亚组和A1亚组的血清MMP-9和hs-CRP浓度比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；A1亚组血清MMP-9和hs-CRP浓度高于A2亚组，且差异有统计学意义（P＜0.01）。在第14周时，A1亚组和A2亚组的血清MMP-9和hs-CRP浓度均高于B组，差异有统计学意义（P＜0.01）；A1亚组血清MMP-9和hs-CRP浓度高于A2亚组，且差异有统计学意义（P＜0.01）。实验过程中A1、A2两亚组的血清MMP-9、hs-CRP浓度均呈现升高趋势（P＜0.01）。实验兔血清MMP-9浓度和hs-CRP浓度之间为正相关关系（r=0.967，P=0.001）。结论MMP-9和hs-CRP呈正相关关系，且两者的浓度与AS斑块稳定性密切相关，斑块越不稳定，MMP-9和hs-CRP的浓度越高。

基质金属蛋白酶-9；超敏C-反应蛋白；动脉粥样硬化斑块稳定性

随着人们生活水平的提高，其饮食习惯发生了很大变化，随之而来的健康问题越来越多，其中动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）疾病就是常见的一种，它是一种慢性炎症性疾病，主要特点就是造成“稳定斑块”向“不稳定斑块”转变，最终造成如急性心脑血管疾病等严重的后果［1］。本研究探讨AS斑块稳定性与血清基质金属蛋白酶-9（matrix me⁃talloproteinase-9，MMP-9）及超敏C反应蛋白（high sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）浓度的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

按照随机分组方法将56只大白兔划分为2组：A组为AS研究组40只，B组为参照组16只。A组采用（标准颗粒+1%胆固醇）进行喂养+球囊损伤，标准颗粒+1%胆固醇进行喂养14周；球囊损伤采用腹主动脉内膜方案。B组采用标准颗粒喂养。14周后采用组胺触发的方法促使AS斑块破裂，将A组40只兔子杀死后，观察AS斑块破裂情况，将斑块破裂的划入破裂组，即A1亚组，未破裂的划入未破裂组，即为A2亚组。

1.2 药物触发

根据Constantinides等对实验兔药物触发方法：在实验14周后，对A组实验兔在杀死前的24 h和48 h分别注射0.15 mg/kg的中国斑点蝰蛇毒，30 min后再注射0.02 mg/kg的组胺。

1.3 方法

喂养方法：所有实验兔实行单笼饲养，每天密切观察它们的进食情况，并每周记录其体质量和定期检查。血清炎性物质检测：分别在实验开始前、第4周、第10周和第14周对所有实验兔抽取静脉血，并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清MMP-9和hs-CRP的浓度。血液生化指标检测：分别在实验开始前、第4周、第10周和药物触发前对所有实验兔进行血液生化检测。检测血清三酰甘油（triacylglycerol，TG），总胆固醇（total cholesterol，TC），低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C），高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）浓度。

1.4 统计学分析

采用统计软件SPSS 19.0对所有数据进行分析。计量资料以（±s）表示，采用LSD-t检验及采用Oneway ANOVA方差分析检验。两变量的相关分析采用Bivariate过程的Pearson等级相关法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验过程中 3组兔的体质量、血脂浓度比较

如表1所示，实验过程中B组兔的体质量与A1亚组、A2亚组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；A1亚组和A2亚组间兔的体质量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。实验开始、实验第14周末，B组血脂指标变化不明显，A2亚组和A1亚组的血脂指标由实验开始时到实验第14周末呈上升趋势；实验开始时3组血脂指标比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；实验第14周末，B组血脂指标与A1亚组、A2亚组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），但是A2亚组和A1亚组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05），详见表2。

2.2 各时间点 3组血清基质金属蛋白酶- 9及超敏 C反应蛋白浓度比较

在实验开始时B组、A2亚组、A1亚组血清MMP-9和hs-CRP浓度比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。在第4周时，B组与A2亚组、A1亚组血清MMP-9和hs-CRP浓度比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；A1亚组血清MMP-9和hs-CRP浓度和A2亚组对比，差异没有统计学意义（P＞0.05）。在第10周时，B组、A2亚组和A1亚组血清MMP-9和hs-CRP浓度比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；A1亚组血清MMP-9和hs-CRP浓度高于A2亚组，且差异有统计学意义（P＜0.01）。在第14周时A1和A2亚组的MMP-9和hs-CRP浓度均高于B组，差异有统计学意义（P＜0.01）；A1亚组的MMP-9和hs-CRP浓度高于A2亚组，且差异有统计学意义（P＜0.01）。各时间点3组血清MMP-9和hs-CRP浓度比较，详见表3。A1亚组和A2亚组血清MMP-9、hs-CRP浓度从实验开始至第14周呈逐渐升高趋势，且差异有统计学意义（P＞0.05）。

表1 实验过程中3组兔的体质量比较 ［kg，±s］

表1 实验过程中3组兔的体质量比较 ［kg，±s］

注：与B组比较，**P＜0.01

组别B组A2亚组A1亚组n 16 18 22实验开始时1.80±0.22 2.11±0.18**2.22±0.34**第14周末2.18±0.17 2.59±0.23**2.62±0.22**

表2 实验开始时及第14周末3组的血脂指标比较 ［mmol/L，±s］

表2 实验开始时及第14周末3组的血脂指标比较 ［mmol/L，±s］

注：与B组比较，**P＜0.01；与实验开始时同组比较，1）*P＜0.05

时间n实验开始时实验第14周末组别B组A2亚组A1亚组B组A2亚组A1亚组16 18 22 16 18 22 TG 0.75±0.31 0.48±0.18 0.48±0.18 0.68±0.06 1.13±0.09**，1）*1.11±0.80**，1）*TC 1.07±0.06 1.04±0.78 1.08±0.75 1.12±0.13 24.81±2.50**，1）*23.24±3.01**，1）*HDL-C 0.39±0.21 0.42±0.27 0.41±0.22 0.49±0.41 1.10±0.15**，1）*1.04±0.14**，1）*LDL-C 0.44±0.32 0.38±0.03 0.37±0.26 0.50±0.05 20.10±2.70**，1）*19.69±1.28**，1）*

表3 各时间点3组血清MMP-9和hs-CRP浓度比较 ［mmol/L，±s］

表3 各时间点3组血清MMP-9和hs-CRP浓度比较 ［mmol/L，±s］

注：与B组同项比较，**P＜0.01；与A2亚组同项比较，1）**P＜0.01；与实验开始时同组比较，aP＜0.05；与第4周同组比较，bP＜0.05；与第10周同组比较，cP＜0.05

指n MMP-9（ng/mL）hs-CRP（mg/L）组别B组A2亚组A1亚组B组A2亚组A1亚组16 18 22 16 18 22实验开始时11.94±1.91 11.43±1.25 11.54±1.80 8.02±0.34 8.12±0.52 8.06±0.74第4周11.03±2.70 14.56±2.46**，a 17.22±3.95**，a 8.10±0.46 12.03±1.15**，a 12.56±1.33**，a第10周10.97±2.86 33.65±4.15**，a，b 43.89±7.24**，1）**，a，b 8.44±0.83 21.84±1.86**，a，b 26.95±3.49**，1）**，a，b第14周10.84±1.65 40.48±2.99**，a，b，c 51.98±5.60**，1）**，a，b，c 8.23±0.67 26.57±1.40**，a，b，c 33.78±3.19**，1）**，a，b，c

2.3 相关分析结果

血清MMP-9和hs-CRP之间呈正相关关系（r=0.967，P=0.001），见图1。

3 讨论

由于我国社会、经济的快速发展，人们的生活水平得到了很大提高，人们的生活方式和饮食习惯也发生了很大变化，我国的AS患者也随之增多，并有逐年上升的趋势［2］。AS对患者造成最主要的伤害是AS斑块由“稳定”转变为“不稳定”，进而造成一系列的疾病发生，如脑梗死、心脑血管疾病等［3-4］。

MMPs是一类以锌离子为辅助因子的蛋白酶超家族，其主要作用是降解细胞外基质成分，在组织重构过程中起着重要的作用［5］。MMPs的种类很多，有20多种，MMP-9是其中之一，其为明胶酶，如果Ⅳ型、Ⅴ型胶原及明胶被降解，可能造成AS的发生及发展［6］。Galis等发现，与野生型小鼠相比，MMP-9基因缺陷小鼠的血管平滑肌细胞迁移活性和胶原收缩能力均降低，表明MMP-9参与血管壁的基质降解和重构。相关研究表明，和正常动脉壁相比，AS斑块内的MMP-2和MMP-9浓度升高、活性增强，这也预示着MMP-9通过降解细胞外基质参与AS的发生及发展［7］。相关的实验报道也表明，MMP-9浓度和活性强度与斑块的不稳定有很大的关系［8］。Manginas等［9］相关报道称，细胞外基质降解和AS斑块发生破裂都是由MMP-9浓度升高引起。本研究显示，AS斑块形成的第4周、10周及14周末，A1和A2亚组的血清MMP-9浓度在呈上升趋势，A1和A2亚组与B组相比，MMP-9浓度较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

图1 血清MMP-9和hs-CRP之间相关性散点图

AS是一种慢性炎症性疾病，可以通过对血清中的炎症标志物浓度的检测来看出AS斑块的发展程度［9］。正常情况下，C反应蛋白在血清中浓度很低，当在特异或者非特异性炎症发生时，其浓度会增加，因此，其已经在临床中作为炎症性疾病的检测指标［10］。hs-CRP是最敏感的检测慢性炎症反应的指标之一［11］。相关研究显示，AS的发生和发展过程中，hs-CRP发挥了很大的作用，增加了AS斑块的不稳定性［12］。有研究报道称，和稳定型心绞痛患者相比，急性冠脉综合症患者的C反应蛋白浓度明显增加，表明C反应蛋白浓度升高时导致AS斑块破裂，而两者倒置。国内、外研究表明，血清hs-CRP浓度的升高与斑块的炎症反应有关，血清hs-CRP浓度高低可以反映斑块的稳定性［9］。本研究结果显示，兔AS斑块形成过程中的第4、10周和14周末，其hs-CRP浓度呈上升趋势，A1和A2亚组与B组相比，hs-CRP浓度较高，差异有统计学意义（P＜0.01）。

本研究相关分析结果显示，MMP-9和hs-CRP呈正相关关系，且两者的浓度与AS斑块稳定性密切相关，斑块越不稳定，MMP-9和hs-CRP的浓度越高。

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Relationships between coronary atherosclerotic plaque stability with serum concentrations of matrix metalloproteinase-9 and high sensitivity C-reactive protein

SONG Ying，LI Xiao-yan
（General Hospital of Jinan Military Area，Jinan 250031，China）

ObjectivesTo evaluate and the relationships between coronary atherosclerosis（AS）plaque stability with serum concentrations of matrix metalloproteinase-9（MMP-9）and high sensitivity C-reactive protein（hs-CRP）.MethodsAccording to the random grouping method，56 rabbits were divided into two groups：40 rabbits were in A group［including A1 subgroup（plaque broken）and A2 subgroup（plaque not broken）］which was the AS study group，16 rabbits were in B group which was a reference group.Rabbits were treated with standard particle feeding+1%cholesterol+balloon injury in A group and rabbits were treated with standard particle feeding in B group.Serum con⁃centrations of MMP-9，hs-CRP and blood lipids were dynamicly monitored among the 3 groups.ResultsDifferences of body weight of rabbits between B group with A1 subgroup and A2 subgroup were significantly different during the study（P＜0.05）.Blood lipids concentrations in B group were not significantly different but they were uptrend in A1 sub⁃group and A2 subgroup from the beginning to the 14thweek in this study.Blood lipids concentrations in B group were significantly different with those of A1 subgroup and A2 subgroup（P＜0.05）at the 14thweek in this study，but they had no statistic difference between A1 subgroup and A2 subgroup（P＞0.05）.Serum concentrations of MMP-9 and hs-CRPin B group were significantly different compared with those in A1 subgroup and A2 subgroup in the 4thweek（P＜0.05）.Differences of concentrations of MMP-9 and hs-CRP among B group，A1 subgroup and A2 subgroup were significant at the 10thweek（P＜0.01），and concentrations of MMP-9 and hs-CRP in A1 subgroup were obvious higher than those in A2 subgroup（P＜0.01）.Concentrations of MMP-9 and hs-CRP in A1 subgroup and A2 subgroup were significantly higher than those in B group at 14thweek（P＜0.01），and those in A1 subgroup were obviously higher than those in A2 subgroup（P＜0.01）.Concentrations of MMP-9 and hs-CRP in A1 subgroup and A2 subgroup were uptrend during this study.Concentration of MMP-9 positively related with concentration of hs-CRP（r=0.967，P=0.001）.Conclusions Concentration of MMP-9 positively relates with concentration of hs-CRP，and they both closely relate to AS plaque sta⁃bility.The higher the concentrations of MMP-9 and hs-CRP are，the the more unstable the plaques are.

matrix metalloproteinase-9；high-sensitivity C-reactive protein；atherosclerotic plaque stability

R541.4

A

1007-9688（2017）05-0610-04

10.3969/j.issn.1007-9688.2017.05.28

贵州省科技计划课题（项目编号：黔科合SY字【2010】）两院合作项目；山东省自然科学基金项目（项目编号：ZR2010HM202）。

宋颖（1983-），女，住院医师，研究方向为老年病学。

2016-07-14）