金丝桃苷对诱导骨肉瘤细胞成骨分化的影响*

谢跃鹏 周志虹 张孝静

浙江中医药大学附属第三医院 浙江 杭州 310005

金丝桃苷对诱导骨肉瘤细胞成骨分化的影响*

谢跃鹏 周志虹#张孝静

浙江中医药大学附属第三医院 浙江 杭州 310005

金丝桃苷 骨肉瘤 成骨分化

骨肉瘤是一种恶性结缔组织肿瘤，据统计其发病率在原发性恶性骨肿瘤中占据首位。该肿瘤恶性程度甚高，预后极差，特点是肺部转移早[1]。金丝桃苷（Hyperoside）又名槲皮素[2]，属于黄酮醇苷类化合物，广泛存在于各种植物体内。研究发现，金丝桃苷能够抑制多种肿瘤细胞。本研究进一步探讨金丝桃苷在抑制骨肉瘤细胞增殖后对骨肉瘤诱导分化的影响。

1 资料与方法

1.1 细胞和试剂：人骨肉瘤U2OS和MG63细胞株购自上海生物化学与细胞生物学研究所。细胞株在RPMI-1640或DMEM培养基中加10%加热去活化的胎牛血清，并在5%CO2、37℃环境下培养。同时加入青霉素（100U/ml）和链霉素（100U/ml）。金丝桃苷从泽朗生物科技有限公司购买，并且溶解在二甲基亚砜（DMSO）中。

1.2 实验方法和观察指标：采用体外细胞培养技术，将C50浓度金丝桃苷分别加入U2OS和MG63两组细胞中，采用蛋白质印记（Western blotting）法测定骨桥蛋白、RUNX2蛋白在两组细胞培养第3、5、7天的表达水平。

1.3 统计学方法：采用SPSS16.0软件录入数据并进行统计学分析，所有计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组细胞中骨桥蛋白表达水平：加入C50浓度的金丝桃苷后，两组细胞在开始和培养第3、5、7天骨桥蛋白表达均有明显增长，且随着时间的延长，U2OS组表达量呈上升趋势，而MG63组在第5天之后表达量达到峰值并出现下降趋势。两者相比较，U2OS组中骨桥蛋白增长趋势明显优于MG63组（P＜0.05）。见图1。

2.2 两组细胞中RUNX2蛋白表达水平：加入金丝桃苷后，两组在上述4个时段RUNX2蛋白表达均有明显增长，U2OS组在第7天时达到峰值，MG63组在第5天时已达到峰值并到第7天时维持稳定水平。两组比较，RUNX2蛋白最终表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。见图2。

图1 两组骨桥蛋白表达水平

图2 两组RUNX2蛋白表达水平

3 讨论

低分化是骨肉瘤最主要的特征之一，针对这一特性，基于细胞非毒性诱导骨肉瘤细胞成骨分化的途径可能是一个治疗的新方向。骨桥蛋白存在于正常体液以及软骨内化骨、膜内化骨区域。有研究表明，成骨细胞的分化和矿化组织的重建可被骨桥蛋白诱导和促进[3]。Enomoto等[4]发现RUNX2缺陷的小鼠膜内和软骨内骨化成骨均不能发生，证实RUNX2是成骨细胞分化所必需的因子。本实验结果表明，金丝桃苷能够在多层次调控骨肉瘤增殖分化的信号调节网络中发挥作用，可能是通过显著激活骨桥蛋白和RUNX2蛋白的表达，从而诱导骨肉瘤向成骨方向分化。

[1]Tang N,Song W X,Luo J Y，et al.Osteosarcoma development and stem celldifferentiation[J].Cl in Or thop Relat Res,2008,466(9)：2114-2130.

[2]Li Z L,Hu J,Li Y L,et al.The effect of hyperoside on the functional recovery of the ischemic/reper fused isolated rat hear t:potential involvement of the ext racel lular signal-regulated kinase 1/2 signaling pathway[J].Free Radic Biol Med,2013，57（4）：132-140.

[3]王立平,党耕町.骨桥蛋白在骨愈合过程中的基因表达[J].北京医科大学学报,1998,30(4)：355-357.

[4]Enomoto H,Furuichit T,Zanma A,et al.Runx2 def iciency in chondrocytes causes adipogenic changes in vit ro[J].J CellSci,2004,117(3)：417-425.

2017-06-28

浙江省公益性技术应用研究计划建议项目金丝桃苷抗骨肉瘤细胞增殖的作用及其机制研究，编号：2014C33218

# 通讯作者：周志虹，E-mai l：421522908@qq.com