HPLC法测定雪梨止咳糖浆中苦杏仁苷的含量

秦宇芬 陈宗良 施丽霞

1 浙江省湖州市中医院 浙江 湖州 313000 2 浙江省金华市食品药品检验所 浙江 金华 321000

中药研究

HPLC法测定雪梨止咳糖浆中苦杏仁苷的含量

秦宇芬1陈宗良2施丽霞1

1 浙江省湖州市中医院 浙江 湖州 313000 2 浙江省金华市食品药品检验所 浙江 金华 321000

目的：建立雪梨止咳糖浆中苦杏仁苷的含量测定方法。方法：采用Zorbax SB-C18（250×4.6，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；检测波长为207nm；柱温35℃。结果：苦杏仁苷进样量在0.1536～3.072μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9996），样品平均回收率为98.36%，RSD=0.91%。结论：此方法操作简便，准确可靠，可用于雪梨止咳糖浆中苦杏仁苷的含量控制。

HPLC法 雪梨止咳糖浆 苦杏仁苷 含量测定

雪梨止咳糖浆收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十五册》，由桔便、苦杏仁、前胡、紫菀等7味中药组成，具有润肺、止咳、化痰的作用，用于支气管炎、咳嗽、咳痰等，临床上用于气逆咳嗽、肺虚久咳等症，方中苦杏仁为止咳平喘要药，能宣发肺气、止咳平喘[1]。原标准中只有前胡与桔梗的薄层色谱鉴别，文献只有关于紫菀酮含量的报道[2]，苦杏仁中指标成分苦杏仁苷的含量测定未见报道。本文建立了雪梨止咳糖浆中苦杏仁苷的含量测定方法，为更好地控制雪梨止咳糖浆的质量提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器：Agi lent 1200高效液相色谱仪（带DAD检测器），梅特勒XS105DU分析天平，密里博DQ5超纯水制水机。

1.2 试药：苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为110820-201004，含量按93.6%计算）；雪梨止咳糖浆（标示为湖北武当金鼎制药有限公司生产）。水为超纯水，甲醇为色谱纯（默克公司），其余为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：色谱柱为Zorbax SB-C18（250×4.6，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；检测波长为 207nm[3]；柱温 35℃。流速 1.0ml/min，理论板数按苦杏仁苷峰计算大于5000。

2.2 对照品溶液的制备：精密称取苦杏仁苷对照品0.01641g，置100ml量瓶中，加50%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备：取本品混匀，精密量取20ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇约30ml，超声处理30min，放冷，滤过，用甲醇20ml分次洗涤滤器，合并滤液，蒸干，残渣加50%甲醇溶液溶解，移至10ml量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.4 线性关系考察：精密量取上述对照品溶液1、2、5、10、15、20μl，分别注入液相色谱仪（每份重复进样2次），按上述色谱条件测得峰面积。以峰面积为纵坐标，以苦杏仁苷对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=963.9X－10.78（r=0.9996），表明进样地量在0.1536～3.072μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度：以重复性试验考察，分别量取同一供试品6份，按“2．3”项下方法制备并测定含量，结果RSD=2.02%；再分别精密吸取对照品贮备液1μl重复进样5次，结果其峰面积RSD=0.77%，表明精密度良好。

2.6 稳定性：取供试品溶液于制备后2、4、8、16、48h分别进样5μl，峰面积值的RSD=1.14%，表明样品溶液在48h内稳定。

2.7 回收率：精密量取已知苦杏仁苷含量（0.044mg/ml）的供试品6份，每份10ml，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液 1、1、3、3、5、5ml，加甲醇约30ml，超声处理30min，放冷，滤过，用甲醇20ml分次洗涤滤器，合并滤液，蒸干，残渣加50%甲醇溶液溶解，移至10ml量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。按上述色谱条件测定含量，计算样品加样回收率（结果见表1）。平均加样回收率为98.36%，RSD=0.91%。

2.8 阴性空白试验：取处方中缺苦杏仁的另外药味按制法制成阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液，并按上述色谱条件测定。结果在苦杏仁苷对照品峰相应的位置未见其它的干扰峰（见图1）。

图1 雪梨止咳糖浆HPLC色谱图

表1 回收率试验结果

2.9 样品的含量测定：3批样品按“2．3”项下方法和上述色谱条件，以峰面积计算苦杏仁苷的含量，结果见表2。

表2 样品中苦杏仁苷的含量测定结果（n=4）

3 讨论

3.1 检测波长的选择：用DAD检测器采集苦杏仁苷对照品溶液在200～400nm波长范围数据，光谱显示在268、258nm波长处有最大吸收，与《植物药有效成分手册》[4]中记载的一致，但吸收较弱。文献报道有210、225、215nm为检测波长测定苦杏仁苷[5-6]，参照药典苦杏仁和桃仁项下的检测波长[3]，实验采用207nm，结果显示供试品溶液在此波长下苦杏仁苷峰响应值最佳，干扰峰最少，得到较大的峰面积，故选此波长为检测波长。

3.2 流动相的选择：曾选用甲醇－水系统、乙腈－水系统及乙腈－0.1%磷酸溶液系统的不同比例进行分离比较。由于采用207nm检测，小于甲醇的截止吸收波长，所以甲醇－水系统出现基线噪声偏大、杂峰较多等现象。参照药典苦杏仁项下乙腈—0.1%磷酸溶液，因为供试品溶液干扰峰较少，比例改为（14∶86）为作为流动相，苦杏仁苷分离效果良好，可得到较对称的峰形，且保留时间适中，故采用本流动相。

3.3 提取方法的选择：根据苦杏仁苷极溶于沸水，溶于水、乙醇，几乎不溶于乙醚的特征，比较了乙醚脱脂前后的效果，结果几无影响，与制备过程中苦杏仁等用70%乙醇浸渍提取有关，脂溶性成分较少；比较了不同浓度甲醇提取效果，由于糖浆剂含糖量高，故首先加甲醇使其含醇量达60%以上，超声提取，过滤除去析出的糖等成分，最后用50%甲醇溶解样品效果最佳，无溶剂效应产生。考察了超声提取时间以30min为宜。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典临床用药须知（中药饮片卷）[M].北京：中国医药科技出版社，2011：879.

[2]韩建国，郭迎霞，宋俊丽，等.雪梨止咳糖浆质量标准研究[J].中国药房，2008，19（12）：931-933.

[3]国家药典委员会.中国药典一部[M].北京：化学工业出版社，2010：187，260.

[4]国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册[M].北京：人民卫生出版社，1986：50.

[5]苏广珠，路向阳.HPLC法测银拗合剂中苦杏仁苷的含量[J].中国现代药物应用，2009，3（7）：27-28.

[6]覃丽郦，熊佐章.RP-HPLC法测定复方百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量[J].中国药事，2009，23（6）：573-574.

2017-03-09