青海地区胃癌组织中P53、P21、PTEN 的表达及临床意义 ※

薛晓红，王亚平，朱智勇，李晓林，马颖才

(青海省人民医院消化内科，西宁 810007)

青海地区胃癌组织中P53、P21、PTEN的表达及临床意义※

薛晓红，王亚平§，朱智勇，李晓林，马颖才

(青海省人民医院消化内科，西宁 810007)

目的通过检测青海地区胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中P53、P21、PTEN蛋白表达水平并分析其相互关系，为青海地区胃癌的诊断和预后的评估提供依据。方法使用免疫组织化学法检测78例胃癌组织、癌旁组织及30例正常胃组织中P53、P21、PTEN的蛋白表达水平并行相关分析。结果胃癌组织中P53蛋白表达阳性率为44.87%，P21蛋白表达阳性率为52.56%，PTEN蛋白表达阳性率为47.44%。与正常胃组织相比，差异均有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中，P53表达与患者年龄、性别、淋巴结转移、浸润深度及PTNM分期无关(P>0.05)，与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。P21表达与患者年龄、性别、浸润深度无关，与肿瘤分化程度、淋巴结转移及PTNM分期有关(P<0.05)。PTEN表达与患者年龄、性别、分化程度、浸润深度无关，与肿瘤淋巴结转移和PTNM分期有关(P<0.05)。胃癌组织中P53与P21表达存在关联，其列联系数为0.323(P<0.05)。P53与PTEN，P21与PTEN之间均存在一定的相关性，但无统计学意义(P>0.05)。结论青海地区患者胃癌组织中P53与P21表达存在关联。P53与PTEN、P21与PTEN相关，但无统计学意义。

P53 P21 PTEN 青海 胃癌

胃癌的发生与癌基因、抑癌基因及多阶段累积等均密切相关。抑癌基因P53、P21、PTEN被认为是细胞周期调控的重要负性调控因子，与肿瘤的发生、发展有关。本研究应用免疫组化方法检测青海地区P53、P21和PTEN三种蛋白在胃癌中的表达水平及其相互关系，为青海地区胃癌的诊断和预后评估提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集青海省人民医院外科自2015年6月至2015年12月经病理学证实且仅接受手术治疗的胃癌患者胃癌组织、癌旁组织。患者中男42例、女36例，年龄29～80岁(62.2±14.3)岁；高中分化腺癌28例、低分化腺癌50例；其中无淋巴结转移者49例，有淋巴结转移者29例；PTNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期13例，Ⅲ期31例，Ⅳ期28例。并取同期行胃切除术非癌患者的正常胃黏膜组织30例作为正常对照。

1.2 检测方法

运用免疫组化(EnVision二步法)。P53、P21、PTEN单抗均为罗氏公司提供的鼠抗人单抗，免疫组织化学试剂盒由上海生工生物公司提供。对照组以PBS代替一抗，已知阳性的胃癌切片作为P53、P21、PTEN蛋白的阳性对照片。P53、P21的阳性染色主要定位于癌细胞腺体细胞核，呈黄色至棕褐色颗粒，PTEN的阳性染色主要定位于癌细胞腺体细胞质，呈黄色至棕褐色颗粒。将染色程度分级和染色细胞百分比分级相乘，表达阳性者乘积≥4 。其中，染色程度：基本不着色为0级，呈淡黄色着色为1级，呈黄色着色为2级，呈棕褐色着色为3级。分级：阳性着色细胞占计数细胞百分比≤5%为0级，6%～25%为1 级，26%～50%为2级，≥51%为3级。

1.3 统计学方法

采用SPSS17.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验或Fisher确切概率法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 P53、P21、PTEN蛋白在青海地区胃癌组织中的表达

胃癌组织中P53、P21蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织和正常组织，PTEN表达率明显低于癌旁组织和正常组织(P<0.05)。见表1、图1-3。

表1 P53、P21、PTEN蛋白在胃癌组织中的表达

Table 1 The Expressions of P53， P21 and PTEN Protein in Gastric Carcinoma

a：与胃癌组织比较，P<0.05，b：与癌旁组织比较，P≤0.05.

图1 P53蛋白在胃癌组织中的表达图(SP×200)

图2 P21蛋白在胃癌组织中的表达图(SP×200)

图3 PTEN蛋白在胃癌组织中的表达图(SP×200)

2.2 P53、P21、PTEN表达与青海地区胃癌临床病理特征的关系

青海地区胃癌组织中，P53表达与患者年龄、性别、淋巴结转移、浸润深度、PTNM分期无关(P>0.05)，与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。P21表达与患者年龄、性别、浸润深度无关，与肿瘤分化程度、淋巴结转移、PTNM分期有关(P<0.05)。PTEN表达与患者年龄、性别、分化程度、浸润深度无关，与肿瘤淋巴结转移及PTNM分期有关(P<0.05)。见表2。

表2 P53、P21、PTEN表达与胃癌临床病理特征的关系

Table 2 The Clinical Significance of P53， P21 and PTEN Protein in Gastric Carcinoma

续表：

病理特征例数P53阳性数(%)χ2PP21阳性数(%)χ2PPTEN阳性数(%)χ2P分化程度中高分化5520(36．4)5．4580．01934(61．8)6．4060．01126(47．3)0．0020．964低分化2315(65．2)7(30．4)11(47．8)淋巴结转移无4921(42．9)0．2160．64230(61．2)3．9640．04630(61．2)10．0490．002有2914(48．3)11(37．9)7(24．1)浸润深度未达浆膜218(38．1)0．5330．46514(66．7)2．2920．1309(42．9)0．2420．623侵入浆膜5727(47．4)27(47．4)28(49．1)PTNM分期Ⅰ期62(33．3)0．687∗5(83．3)<0．001∗6(100．0)<0．001∗Ⅱ期136(46．2)12(92．3)10(76．9)Ⅲ期3112(38．7)17(54．8)16(51．6)Ⅳ期2815(53．6)7(25．0)5(17．9)

*：fisher确切概率值.

2.3 青海地区胃癌组织中P53、P21、PTEN表达关联分析

青海地区胃癌组织中P53与PTEN的表达相互独立，无关联(χ2=0.033，P=0.856)，P21与PTEN表达相互独立，亦不存在关联(χ2=2.453，P=0.117)。见表3。本研究发现青海地区胃癌组织中P53与P21表达相互关联(χ2= 9.061，P=0.003)，其列联系数C=0.323。见表4。

表3胃癌组织中P53、P21与PTEN表达的比较

Table 3 The comparison of P53， P21 and PTEN Protein expression in Gastric Carcinoma

表4胃癌组织中P53与P21表达的比较

Table 4 The comparison of P53 and P21 Protein expression in Gastric Carcinoma

3 讨论

本研究通过检测青海地区胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中P53、P21、PTEN蛋白表达水平并分析其相互关系，为青海地区胃癌的诊断和预后的评估提供依据。结果显示：青海地区胃癌患者P53、P21表达水平显著增高、PTEN表达水平显著降低，与平原地区报道的表达水平一致：程智勇等[1]报道，60例胃癌组织中P53蛋白阳性表达率为48.33%，癌旁正常组织中P53蛋白阳性表达率为5.00%，两者比较差异显著(P<0.05)。张凤艳等[2]报道，胃癌组织中，P53和P21蛋白表达显著高于正常胃黏膜组织(P<0.01)。刘雷等[3]报道，P21蛋白在130例胃癌组织中阳性表达率为70.0%，在248例癌旁组织中为37.1%，组间差异均有统计学意义(P<0.05)。且P21蛋白阳性表达率从正常胃组织—慢性非萎缩性胃炎—慢性萎缩性胃炎—肠上皮化生—异型增生至胃癌，大致呈上升趋势。罗文等[4]报道，PTEN 在正常组织的阳性表达率为85.94%显著高于癌前病变(51.85%)和胃癌(20.71%)(P<0.05)。谭莉莉等[5]报道胃癌组织中PTEN 阳性率(8.82%)显著高于癌旁组织(61.9%)，亦显著低于萎缩性胃炎组织(100%)(P<0.01)。

青海地区地处高原，地域相对封闭，当地居民养成特有的饮食习惯，具体表现为多饮酒、多食肉、多食腌制品、少食植物纤维等，加之受到高海拔、低压、低氧的气候条件影响，导致胃癌P53、P21、PTEN蛋白表达水平及其相互关系可能存在特异性。本研究显示：青海地区胃癌组织中，P53表达与肿瘤分化程度显著相关；P21表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、PTNM分期显著相关；PTEN表达与肿瘤淋巴结转移、PTNM分期显著相关。检测P53、P21、PTEN蛋白水平对青海地区胃癌的诊断及预后可提供较好针对性依据。

目前的研究发现，P53基因是最为广泛的抑癌基因之一，也是突变率最高的抑癌基因之一[6]。P53基因的异常表达和胃黏膜细胞的癌变关系密切，突变型 P53 蛋白表达与胃癌的分化、转移和浸润等相关。Muller等报道[7]，正常胃粘膜、萎缩性胃炎及肠上皮化生组织等非癌组织中，未发现P53蛋白的表达；发生癌变后，P53表达水平显著增高，且阳性表达率和病程恶化程度密切相关。刘晓文[8]等报道，在中国P53阳性表达和胃癌患者的性别、年龄、Borrmann 分型、肿瘤部位、淋巴结转移、组织学进展无显著相关性，与本研究结果一致，但相关数据存在差异。

P21作为重要的细胞周期调控蛋白，能够广泛抑制激酶活性，限制细胞进入S期[9]，从而抑制细胞的增殖。如果P21基因突变，则会使细胞增殖与分化受到影响，从而引起组织恶变。仰丽丽等报道[10]P21阳性表达率在高中分化胃癌中明显高于低分化胃癌，在高TNM分期和发生淋巴结转移的病例中，P21表达亦显著下降。张宏等[11]证实胃癌RasP21蛋白表达越强，恶性程度越高，转移风险越大，预后越差。均与本研究结果一致。

PTEN存在于人10号染色体上，是一种肿瘤抑制基因，抑制特异性磷酸酶活性，不仅参与细胞周期调控，还可作用于细胞膜参与细胞间的交互与黏附功能[12，13]。PTEN 与多种恶性肿瘤发生、发展关系密切，能够显著调控细胞凋亡和迁移[14]。孙晓春等[15]发现，PTEN不与性别、年龄、分化程度、肿瘤浸润、淋巴结转移等显著相关。甘伟平等[16]发现，不同分化程度、分期、预后及有无淋巴结转移者癌组织中PTEN表达水平差异有统计学意义。贾海江[17]等发现，PTEN的表达均与胃癌的浸润深度、有无淋巴结转移密切相关。结果与本研究均有差异，这可能与研究病例数及操作方法不尽相同有关。

本研究经χ2配对检验发现，胃癌组织中P53与P21表达呈正相关，P53与PTEN，P21与PTEN之间均存在一定的相关性。张凤艳等[2]报道，P21蛋白表达水平与P53蛋白表达呈正相关，其相关系数为0. 213(P<0．01)；谢智惠等[18]报道，P53与PTEN共同表达阳性为24.62%，共同表达阴性为12.3%，两者间差异有统计学意义(P<0.05)，胃癌中P53与PTEN表达呈负相关关系(r=-0.251，P=0.044)；邓昊等[19]研究发现PTEN和p21ras呈正相关关系。均与本研究一致。以上结果提示P53、P21和PTEN蛋白表达在评价胃癌的发生发展上具有协同作用，其具体作用机制有待进一步研究。

综上所述，检测青海地区P53、P21、PTEN蛋白在胃癌组织中的表达及相互关系，可为青海地区胃癌的诊断及预后评估提供针对性解决方案。

[1]程智勇，杨雁鸿，李桃.Tip30和P53蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义[J].疑难病杂志，2016，15(8)：813-816.

[2]张凤艳，张金子，邹树彪.胃癌组织中p21、p27、p53和Rb 的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2011，27(6)：586-589.

[3]刘雷，陈国昌，宋振云.Runx3、Smad4、Cdk2、p21在胃癌中的表达及其临床意义[J].胃肠病学，2015，20(10)：597-601.

[4]罗文，周娟，夏红.PTEN蛋白在胃癌中的表达及临床病理意义[J].中南医学科学杂志，2017，45(2)：109-112.

[5]谭莉莉，魏亚飞，张烨.AKT2、PTEN在胃癌组织中的表达及临床意义[J].中国老年学杂志，2014，34(24)：7009-7011.

[6]Yamashita K，Waraya M，Katoh H，et al.Epigenetic conversion on p53 pathway in human cancer：the clinical potential of p53mution status as a predictive biomarker for drug sensitivity bye pigenetic treatment[J].Cancer Res，2013，73(8Supplement)：4662-4671.

[7]Muller PA，Vousden KH.p53 mutations in cancer[J].Nat Cell Bio，2013，15(1)：2-8.

[8]Liu X，Cai H，Huang H，et al.The prognostic significance of apoptosis-related biological markers in Chinese gastric cancer patients[J].PLoS One，2011，6(12)：e29670.

[9]Beier I，Düsing R，Vetter H，et al.Epidermal growth factor stimulates Rac1 and p21-activated kinase in vascular smooth muscle cells[J].Atherosclerosis，2008，196(1)：92-97.

[10]仰丽丽，文剑.p21和Survivin在胃癌组织中的表达及临床意义[J].实用癌症杂志，2013，28(5)：483-485.

[11]张宏，刘晓伟，苏秀兰.胃癌CyclinD 1及RasP21蛋白的表达与分化程度及预后关系的探讨[J].内蒙古医科大学学报，2015，37(5)：441-444.

[12]Li J，Yen C，Liaw D，et al.PTEN，a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain，breast，and prostate cancer[J].Science，1997，275：1943-1947.

[13]Steck PA，Pershouse MA，Jasser SA，et al.Identification of a candidate tumour suppressor gene，MMAC1，at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancers[J].NatGenet，1997，15：356-362.

[14]Banadakoppa M，Goluszko P，Liebenthal D，et a1.P13K/Akt pathway restricts epithelial adhesion of Dr + Escherichia coli by down-regulating the expression of decay accelerating factor[J].Exp Boil Med(Maywood)，2014，239(5)：581-594.

[15]孙晓春，孙镇江，吴乐乐，等.p53，PTEN和VEGF在胃癌组织中的表达及意义[J].山东医药，2012，52(7)：18-20.

[16]甘伟平，罗陈飘，陈喜志，等.抑癌基因PTEN和p53在胃癌中的表达及意义[J].中华实用诊断与治疗杂志，2016，30(1)：68-70.

[17]贾海江，戴林.p53、PCNA和PTEN在胃癌组织中的表达及其临床意义[J]. 国际消化病杂志，2012，32(5)：302-305.

[18]谢智惠，王蕾，陈进.Cyclin E、P53与PTEN在胃癌组织中的表达及临床意义[J].重庆医学，2012，41(35)：3710-3712.

[19]邓昊，吴人亮，陈莹.应用组织芯片技术检测胃癌组织中PTEN、Survivin和p21ras蛋白的表达[J].华中科技大学学报(医学版)，2006，35(3)：284-287.

ExpressionsandClinicalSignificanceofP53，P21andPTENinGastricCarcinomainQinghaiArea※

XUE Xiao-hong，WANG Ya-ping§，ZHU Zhi-yong，LI Xiao-lin，MA Ying-cai

(Digestive Department of Qinghai Provincial People′s Hospital，Xining，Qinghai 810007)

ObjectiveTo support clinical diagnosis of gastric carcinoma by examining the protein levels of P53，P21 and PTEN in gastric carcinoma tissues，the tissues adjacent to carcinoma and normal gastric tissues in Qinghai Area.Methods78 cases of protein levels of P53，P21 and PTEN in gastric carcinoma tissues，the tissue adjacent to carcinoma and normal gastric tissues were detected by immunohistochemical method，and analyzed their correlations.ResultsThe protein expressions of P53，P21 and PTEN in gastric carcinoma were all higher than those of normal gastric tissues，the positive rates were 44.87%，52.56% and 47.44%，respectively，and the difference was statistically significant(P<0.05).The positive expressions rate of P53 protein in gastric cancer was correlated with differentiation，the difference was statistically significant(P<0.05).The positive expressions rate of P53 protein in gastric cancer has no correlation with age，gender，lymph node metastasis，invasion depth and the PTNM staging，the difference was not statistically significant(P>0.05).The positive expressions rate of P21 protein in gastric cancer was correlated with lymph node metastasis，invasion depth and the PTNM staging，the difference was statistically significant(P<0.05).The positive expressions rate of P21 protein in gastric cancer has no correlation with age，gender，differentiation，the difference was not statistically significant(P>0.05).The positive expressions rate of PTEN protein in gastric cancer was correlated with lymph node metastasis and the PTNM staging，the difference was statistically significant(P<0.05).The positive expressions rate of PTEN protein in gastric cancer has no correlation with age，gender，differentiation，invasion depth，the difference was not statistically significant(P>0.05).The expression of P53 was correlated with P21，the coefficient of contingency was 0.323 (P<0.05)，the expression of P53 and PTEN，P21 and PTEN has no statistical correlation(P>0.05).ConclusionThe expression of P53 was correlated with P21，the expression of P53 and PTEN，P21 and PTEN has no statistical correlation in Qinghai Area.

P53 P21 PTEN Qinhai Gastric Carcinoma

R741

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2017.03.008

2016-9-8

※：青海省科学技术厅科技促进新农村计划(2013-N-526)；§：通信作者，博士，副主任医师，Email-rose19820721@126.com 薛晓红(1984～)，女，汉族，青海籍，硕士，主治医师