宫颈癌组织长链非编码RNA XIST、小分子RNA miR-101-3p表达变化及其意义

刘丽丹，黄浩梁

(武汉市第一医院，武汉 430022)

宫颈癌组织长链非编码RNA XIST、小分子RNA miR-101-3p表达变化及其意义

刘丽丹，黄浩梁

(武汉市第一医院，武汉430022)

目的观察宫颈癌组织长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录子(XIST)、小分子RNA miR-101-3p表达变化，并探讨其临床意义。方法选取91例宫颈癌患者的宫颈癌组织标本为观察组，癌旁正常组织(距离宫颈癌组织>5cm且经病例检查证实为正常组织)标本为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组标本中的XIST、miR-101-3p表达，并分析其与宫颈癌临床病理参数的关系。结果观察组、对照组XIST表达量分别为8.97±3.56、7.01±3.82，miR-101-3p表达量分别为8.24±4.22、10.15±3.97。观察组XIST表达量高于对照组(P<0.05)，miR-101-3p表达量低于对照组(P<0.05)。Pearson积矩相关分析结果显示宫颈癌组织miR-101-3p、XIST表达量呈负相关性(r=-0.716，P<0.05)。肿瘤最大径≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-101-3p表达量分别低于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的宫颈癌组织(P均<0.05)，XIST表达量分别高于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO 分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移宫颈癌组织(P均<0.05)。结论宫颈癌组织XIST表达升高、miR-101-3p表达降低。检测宫颈组织XIST、miR-101-3p有助于宫颈癌的病情判断。

宫颈癌；长链非编码RNA；X染色体失活特异转录子；小分子RNA；miR-101-3p

目前对肿瘤发生原因的研究已经涉及小分子RNA(miRNA)和长链非编码RNA(LncRNA)[1,2]。

小分子RNA101(miR-101)广泛存在于真核生物细胞，可作为抑癌因子在乳腺癌[3]、胃癌[4]等恶性肿瘤中异常表达，miR-101-3p是miR-101的一种活性形式[5]。目前尚不清楚宫颈癌组织中miR-101表达变化情况。X染色体失活特异转录因子(XIST)表达异常与肺癌和胰腺癌的发生发展有关[6，7]。目前宫颈癌组织中XIST表达变化也不清楚。本课题组前期研究用ELM数据库分析发现，miR-101和XIST存在4个结合位点，笔者推测二者可能存在相互作用。本研究观察了宫颈癌组织中miR-1-1-3p、XIST的表达变化，并分析了宫颈癌组织中miR-101、XIST表达与宫颈癌临床病理参数的关系，旨在明确miR-1-1-3p、XIST在宫颈癌发生发展中的作用及检测宫颈癌组织miR-1-1-3p、XIST表达的临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2016年1月～2017年1月收治的91例宫颈癌患者的手术切除宫颈癌组织标本为观察组，癌旁正常组织标本(距离宫颈癌组织>5 cm且经病例检查证实为正常组织)为对照组。患者纳入标准：①宫颈癌组织病理检查确定为宫颈癌；②术前未行任何放、化疗治疗；③术前未接受其它可能影响本研究结果的抗肿瘤药物治疗。排除标准：①妊娠期以及哺乳期的妇女；②心脏功能不全者；③肝、肾功能障碍者；④临床病历资料记录不完整者；⑤合并有其它恶性肿瘤的患者。入组患者年龄39～76(63.24±11.87)岁；肿瘤类型为鳞癌55例，腺癌35例；病灶最大径<4 cm者49例，≥4 cm者 42例；国际妇产科联盟(FIGO)分期[8]Ⅰ+Ⅱ期38例，Ⅲ+Ⅳ期53例；分级程度低分化31例，中、高分化60例；有淋巴结转移33例，无淋巴结转移58例。本研究已获我院医学伦理委员会批准。患者或其家属已签署知情同意书。

1.2 miR-101、XIST检测方法 参照RNA提取试剂盒(诺维赞生物公司)说明书操作提取总RNA。按照逆转录试剂盒(诺维赞生物公司)说明书操作进行RNA的反转录。反应体系包括总RNA 1 μg、2×RT mix 10 μL、mix 2 μL、oligo dNTPs 1 μL、引物 1 μL共计20 μL。反应条件25 ℃ 5 min，50 ℃ 15 min，85 ℃ 5 min。按照荧光定量PCR试剂盒(诺维赞生物公司)说明书操作进行荧光定量PCR，反应体系包括反转录产物2 μL、正向引物2 μL、反向引物2 μL、2×mix 10 μL、纯水4 μL，设定38个循环，循环的程序为95 ℃ 30 s、95 ℃ 5 s、60 ℃ 30 s。以GAPDH为内参照。检测XIST所需引物采用Primer Premier 5.0软件设计，并由上海生工生物工程公司合成。XIST上游引物序列5′-AATGGAACGGGCTGAGTTTTAG-3′，下游引物序列5′-TCATCCGCTTGCGTTCATAG-3′；内参GAPDH上游引物序列5′-GGAAGGACTCATGACCACAGTCC-3′，下游引物序列5′-TCGCTGTGAAGTCAGAGGAGACC-3′。检测miR-101-3p所需引物采用TaqMan公司生产的miR-101-3p检测探针。以2-ΔΔCt表示miR-101、XIST表达量。

2 结果

2.1 两组miR-101-3p、XIST表达比较 观察组、对照组XIST表达量分别为(8.97±3.56)、(7.01±3.82)，miR-101-3p表达量分别为(8.24±4.22)、(10.15±3.97)。观察组XIST表达量高于对照组(P<0.05)，miR-101-3p表达量低于对照组(P<0.05)。

2.2 观察组miR-101-3p、XIST表达量的相关性 Pearson积矩相关分析结果显示宫颈癌组织miR-101-3p、XIST表达量呈负相关性(r=-0.716，P<0.05)。

2.3 宫颈癌组织miR-101-3p、XIST表达与宫颈癌临床病理参数的关系 见表1。肿瘤最大径≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-101-3p表达量分别低于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的宫颈癌组织(P均<0.05)，XIST表达量分别高于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移宫颈癌组织(P均<0.05)；不同年龄、病理类型宫颈癌组织中miR-101-3p、XIST表达量相比P均>0.05。

表1 宫颈癌组织XIST、miR-101-3p表达与宫颈癌临床病理参数的关系

3 讨论

miRNA是内源性的非编码小RNA，广泛存在于真核生物中，它与恶性肿瘤的发生、发展密切相关，肿瘤细胞中的miRNA异常改变可以介导某些基因的表达，进而调控恶性肿瘤细胞的功能[12]。miR-101作为抑癌因子在乳腺癌[13]、肝癌[14]等恶性肿瘤细胞呈低表达，并调控其增殖、侵袭、转移等。MiR-101包括miR-101-3P和miR-101-5p两种成熟的形式，有研究发现miR-101-3p的下调可以促进肝癌细胞的增殖、迁移，并抑制细胞的凋亡[15]。在正常雌性哺乳动物细胞中，XIST是维持两条X染色体中一条沉默的关键因素，其表达异常会导致细胞基因转录过程异常而向恶性转变。文献报道，XIST表达异常与肺癌、乳腺癌等密切相关[17]。本研究首先观察了宫颈癌组织miR-101-3p、XIST表达变化，结果显示，与癌旁组织比较，宫颈癌组织中miR-101-3p表达下调，XIST表达上调，提示miR-101-3p、XIST参与了宫颈癌的发病过程。Sheng等[4]的研究结果显示，miR-101-3p表达下调参与了肝癌的增殖、迁移。魏伟等[6]的研究发现，XIST在胰腺癌组织中呈高表达，可能参与了胰腺癌的发生、发展过程。亦与本研究结果相呼应。Pearson积矩相关分析结果显示宫颈癌组织中miR-101-3p与XIST的表达呈负相关。笔者在前期研究中利用ELM数据库分析发现，miR-101和XIST存在4个结合位点。结合本研究结果，笔者认为XIST、miR-101-3p共同参与了宫颈癌发生过程，但是其中究竟是XIST调控miR-101-3p还是miR-101-3p调控XIST目前尚不清楚。

本研究结果显示，相对于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的宫颈癌组织肿瘤最大径≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-101-3p低表达、XIST高表达更为显著，说明miR-101-3p、 XIST与宫颈癌患者临床病理参数密切相关，肿瘤越大、临床分期越晚、肿瘤分化程度越差以及有区域淋巴结转移时，两种蛋白的表达异常更为明显，提示临床检测宫颈组织miR-101-3p、XIST有助于宫颈癌的病情判断。

综上所述，宫颈癌组织miR-101-3p表达下降、 XIST表达升高。检测宫颈癌组织miR-101-3p、 XIST表达有助于判断患者病情。

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