类风湿性关节炎合并血小板增多患者血清IL-11、sIL-11R水平变化

李琳，苏娟，柴克霞，杨洁，秦雅婧，鄂维建，李玉玲

(1青海大学研究生院，西宁810000；2淄博第一医院；3青海大学附属医院)

类风湿性关节炎合并血小板增多患者血清IL-11、sIL-11R水平变化

李琳1，2，苏娟3，柴克霞3，杨洁3，秦雅婧3，鄂维建3，李玉玲3

(1青海大学研究生院，西宁810000；2淄博第一医院；3青海大学附属医院)

目的观察类风湿性关节炎(RA)合并血小板增多患者血清白细胞介素11(IL-11)、游离白细胞介素11受体(sIL-11R)水平的变化。方法将60例RA患者根据血小板计数(PLT)是否>300×109/ L，分为血小板升高组24例和血小板正常组36例，另选健康体检者30例为对照组，采用ELISA法检测三组患者血清IL-11、sIL-11R。分析RA患者血清IL-11、sIL-11R与PLT、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、降钙素原(PCT)、RA患者病情评分(DAS28评分)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环氨酸肽抗体(ACCP)的相关性。结果血小板增多组血清IL-11、sIL-11R水平均高于血小板正常组和正常组(P均<0.05)。RA组患者血清IL-11水平与sIL-11R、PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP呈正相关(P均<0.05)，与MPV、PDW、RF、ACCP无相关性(P均>0.05)；RA组血清sIL-11R水平与PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP、RF、ACCP均呈正相关(P均<0.05)。结论RA合并血小板增多患者血清IL-11、sIL-11R水平明显升高。

白细胞介素11；游离白细胞介素11受体;类风湿关节炎；血小板增多症

类风湿关节炎(RA)患者疾病活动期多合并反应性血小板增多。血小板在RA患者的关节滑液及血浆中发生聚集、增强活化，血小板活化导致大量炎性介质释放，与RA患者滑膜炎和血管翳密切相关[1,2]。所以关于RA合并反应性血小板增多的调控因素是一直研究的热点。IL-11是IL-6家族细胞因子的新进成员，在促进血小板的增殖分化、调节免疫应答、调节骨代谢、诱导急性期反应蛋白合成等方面[3～6]具有重要作用，与多种组织的炎症状态相关。目前有研究表明 IL-11较高表达于 RA患者的滑膜组织、关节液及血清中，而IL-11是否与RA合并反应性血小板增多有关，国内尚未有相关报道。本研究观察了RA合并血小板增多患者血清IL-11及游离白细胞介素11受体(sIL-11R)水平变化，探讨其在 RA合并血小板增多发生的可能机制中的作用。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2014年11月～2015年9月青海大学附属医院风湿科住院的RA患者60例，均符合2010 EULAR/ACR修订并颁布的RA分类标准[7]，按照PLT是否>300×109/L分为血小板增多组24例和血小板正常组36例。血小板增多组男9例，女15例，年龄(48.79±7.87)岁。血小板正常组男14例，女22例，年龄(52.19±13.91)岁。所有患者均排除糖尿病、高血压、高血脂、心脑血管疾病、感染、肝肾疾病、血栓性疾病、血小板疾病等其他疾病。另选30例年龄、性别与RA患者匹配的健康体检人员为对照组。

1.2 血清IL-11、sIL-11R的检测方法 受试者清晨空腹抽取肘静脉血2 mL，2 h内室温下3 000 r/min离心15 min，分离血清并于-80℃冰箱中保存待检。血清IL-11、sIL-11R 检测采用ELISA法，操作按试剂盒(购自武汉优尔生商贸有限公司)说明书进行。

2 结果

2.1 各组血清IL-11、sIL-11R比较 三组受检者血清IL-11、sIL-11R 见表1。血小板增多组血清IL-11、sIL-11R水平明显高于血小板正常组及健康对照组(P均<0.05)。

表1 三组血清IL-11、sIL-11R水平比较

注：与血小板正常组比较，▲P<0.05；与对照组比较，*P<0.05。

2.2 RA患者血清IL-11、sIL-11R与PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP、RF、ACCP的相关性 Pearson相关分析结果显示RA患者血清IL-11水平与sIL-11R、PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP均呈正相关(r=0.480，0.642，0.408，0.447，0.352，0.355，P均<0.05)，与MPV、PDW、RF、ACCP无相关性(P均>0.05)。血清sIL-11R水平与PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP、Rf、ACCP均呈正相关(r=0.426、0.307、0.457、0.421、0.413、0.442、0.370，P均<0.05)。

以IL-11为因变量，PLT、PCT、CRP、ESR、sIL-11R为自变量，进行多元逐步回归分析，结果显示影响血清IL-11最显著的因素是PLT(Beta=0.932，P<0.05)、PCT(Beta=-0.443，P<0.05)；以sIL-11R作为因变量，IL-11、PLT、RF、CRP、ESR、RF、ACCP为自变量，进行多元逐步回归分析，结果影响血清sIL-11R最显著的因素是IL-11(Beta=0.349，P<0.05)。

3 讨论

本研究结果显示RA合并血小板增多患者血清IL-11水平显著升高，进一步分析发现RA组患者血清IL-11与PLT、PCT呈正相关，表明在RA中IL-11可能促进了血小板的增多。RA患者血清中IL-11水平增高，可能通过单独作用或与血小板生成素(TPO)、干细胞因子(SCF)、IL-3等细胞因子协同作用的方式，参与促进血小板增多：在骨髓细胞的分化中IL-11可与SCF、IL-3协同作用，刺激造血干细胞和原始多能祖细胞的增殖，并促进其向巨核系分化[8]；IL-11可以作用于巨核系生长的各阶段，促进幼稚巨核细胞的成熟，还可诱导成熟巨核细胞释放血小板，增加血小板的生成[9]。因此，RA中IL-11水平升高可能为RA合并反应性血小板增多发生的机制之一。本研究未发现RA组血清IL-11与MPV、PDW存在相关性，提示RA中血清IL-11主要促进血小板数目的增多，可能并未直接参与血小板的活化。有关RA中血小板变化的机制复杂仍需要进行深入研究。

本研究结果显示，RA患者血清IL-11水平与DAS28、CRP、ESR等反映RA活动的指标均呈正相关。RA活动期患者滑膜组织的巨噬细胞释放TNF-α、IL-1、IL-6等炎性因子增多，加重滑膜组织的炎症改变，诱导更多的IL-11生成。同时，产生的IL-11能诱导非RANKL依赖的循环单核细胞分化成破骨细胞[10]，进而产生更多的炎症因子、基质金属蛋白酶类，参与RA疾病活动。

IL-11通过与IL-11R特异性结合介导信号转导，发挥生物学功能。IL-11R有膜型IL-11R和体液中sIL-11R两种形式。sIL-11R与膜型IL-11R具有类似活性结构，也能与IL-11发生特异性结合。因此，我们假设sIL-11R与膜型IL-11R竞争性拮抗阻断IL-11的作用，在RA患者合并反应性血小板增多时sIL-11R降低，促进了IL-11与膜型IL-11R结合，进而促进血小板生成增多。但本研究结果意外的发现，RA血小板增多组血清sIL-11R水平高于血小板正常组，RA患者血清sIL-11R与PLT、PCT呈正相关，表明sIL-11R可能在RA中同样促进了血小板增多。既往关于sIL-11R对IL-11促血小板生成的调控作用的研究报道非常少。最近有研究发现IL-11与sIL-11R特异性结合形成IL-11/sIL-11R复合物，后者可能被膜型gp130捕捉，介导下游STAT信号转导，还可对某些不含膜型受体的细胞发挥作用[11～13]，因此sIL-11R对IL-11的生物效应可能发挥激动作用。结合本研究结果，RA中血清sIL-11R水平与IL-11水平呈正相关，血清IL-11水平是影响血清sIL-11R的显著因素。我们推测在RA活动时IL-11水平显著升高，激活膜型IL-11R水解、释放sIL-11R水平增高，这些可溶性受体可与IL-11形成免疫复合物，激动IL-11的促进巨核细胞及血小板的生成作用，可能是RA患者血小板增多的另一机制。本研究未能检测膜型IL-11R，有关膜型IL-11R在RA中的变化及对于IL-11的调控作用，有待进一步研究。

本研究结果显示RA患者血清sIL-11R水平与DAS28、ESR、CRP均呈正相关，说明在持续RA疾病状态下，sIL-11R仍然有活化。ADAM10是sIL-11R形成过程中重要的金属蛋白酶解离素[13]，随着RA疾病活动，滑膜成纤维细胞在炎症介质的刺激下表达ADAM10增多[14]，促进膜型IL-11R的水解及脱落，使血清sIL-11R增高。RA疾病活动机制复杂，sIL-11R可能仅为影响因素之一，相关机制仍需深入研究。

本研究结果显示，RA患者血清sIL-11水平与RF、ACCP呈正相关，提示sIL-11R可能与RA患者自身抗体的产生有关。有学者[15]研究了ACCP阳性或阴性状态的RA患者血浆sIL-6R与DAS28的相关性，认为自身抗体的表达或缺失是决定sIL-6R与疾病活动度相关性的必要因素。sIL-11R与sIL-6R在结构、功能上最为相近，因此我们推测本研究中RF、ACCP等自身抗体是决定sIL-11R与疾病活动度呈正相关的重要因素，可能是sIL-11R水平与自身抗体相关的原因。RA中自身抗体的产生机制复杂，sIL-11与自身抗体的作用仍需做进一步研究。

总之，本研究发现RA合并血小板增多患者血清IL-11、sIL-11R水平升高，血清IL-11、sIL-11R在RA合并血小板增多中发挥促进作用。RA炎症反应中细胞因子网络作用机制复杂，IL-11/sIL-11R可能在RA免疫调节中发挥作用，加强IL-11/sIL-11R在RA发生发展中的研究，有望进一步阐明RA的免疫机制，为探索RA治疗的新靶点提供方向。

[1] Boilard E, Nigrovic P A, Larabee K, et al. Platelets amplify inflammation in arthritis via collagen-dependent microparticle production[J]. Science, 2010,327(5965):580-583.

[2] 杨秀丽,黄传兵,贾建云,等.血小板微粒的释放与类风湿关节炎的相关性研究现状[J].风湿病与关节炎,2015,4(6):61-64.

[3] Dams-Kozlowska H, Kwiatkowska-Borowczyk E, Gryska K, et al. Designer cytokine hyper interleukin 11 (H11) is a megakaryopoietic factor [J]. International journal of medical sciences, 2013,10(9):1157-1165.

[4] Putoczki T, Ernst M. More than a sidekick: the IL-6 family cytokine IL-11 links inflammation to cancer[J]. J Leuk Biol, 2010,88(6):1109-1117.

[5] McCoy EM, Hong H, Pruitt HC, et al. IL-11 produced by breast cancer cells augments osteoclastogenesis by sustaining the pool of osteoclast progenitor cells [J]. BMC Cancer, 2013,13(1):16.

[6] Kheifetz Y, Elishmereni M, Agur Z. Complex pattern of interleukin-11-induced inflammation revealed by mathematically modeling the dynamics of C-reactive protein[J]. J Pharmacok pharmacod, 2014,41(5):479-491.

[7] Cader M Z, Filer A, Hazlehurst J, et al. Performance of the 2010 ACR/EULAR criteria for rheumatoid arthritis: comparison with 1987 ACR criteria in a very early synovitis cohort[J]. An Rheum Dis, 2011,70(6):949-955.

[8] 陈淑萍,陈慧菁,叶韵斌,等.TPO,PDGF,IL-11在脐血巨核细胞生长和分化中的作用[J].福建医科大学学报,2006,40(4):330-333.

[9] Weich NS , Fitzgerald M , Wang A , et al . Recom binant human interleukin- 11 synergiz es w it h st eel factor and int erleukin-3 to promote directly the early stages of murine megakaryocy te development in vitro[ J] . Blood, 2000,95(2):503- 509.

[10] Sabokbar A, Mahoney D J, Hemingway F, et al. Non-canonical (RANKL-Independent) pathways of osteoclast differentiation and their role in musculoskeletal diseases[J]. Clin Rev Allerg Immunol, 2016,51(1):16-26.

[11] 段聚宝,王嘉玺.白细胞介素及其受体研究概况[J]. 国外医学: 分子生物学分册,1999,21(1):35-39.

[12] Dams-Kozlowska H, Gryska K, Kwiatkowska-Borowczyk E, et al. A designer hyper interleukin 11 (H11) is a biologically active cytokine[J]. BMC Biotechnol, 2012,12(1):8.

[13] Lokau J, Nitz R, Agthe M, et al. Proteolytic cleavage governs interleukin-11 trans-signaling[J]. Cell Rep, 2016,14(7):1761-1773.

[14] Isozaki T, Rabquer BJ, Ruth JH, et al. ADAM-10 is overexpressed in rheumatoid arthritis synovial tissue and mediates angiogenesis[J]. Arth Rheumatol, 2013,65(1):98-108.

[15] Rodriguez-Rodriguez L, Lamas JR, Varade J, et al. Plasma soluble IL-6 receptor concentration in rheumatoid arthritis: associations with the rs8192284 IL6R polymorphism and with disease activity[J]. Rheumatol Inter 2011,31(3):409-413.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.35.031

R593.22

B

1002-266X(2017)35-0093-03

2017-03-21)

中西部高校综合实力提升工程建设项目(4056051001)；青海省科技创新能力促进计划项目(2015-HZ-810)

苏娟(E-mail：sujuanqh@163.com)