山泉水与普通水对利口清含漱液煎煮效果影响的研究

何美菁，薛非非，王明芳，张朔生

（山西中医学院中药学院，山西太原030024）

山泉水与普通水对利口清含漱液煎煮效果影响的研究

何美菁，薛非非，王明芳，张朔生

（山西中医学院中药学院，山西太原030024）

目的：探讨山泉水与普通水对利口清含漱液煎出成分的影响。方法：将金银花和北豆根用山泉水与自来水分别煎煮得到的单煎及单煎合并液，通过醇沉法得到供试品溶液，采用高效液相色谱法测定绿原酸含量，色谱条件为：C18色谱柱（C18烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测波长 327 nm；柱温 25 ℃；体积流量 1.0 mL/min；流动相乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）。紫外分光光度法测定北豆根总生物碱含量。结果：山泉水单煎及单煎合并液的绿原酸煎出率均高于自来水，生物碱煎出率则相反。结论：山泉水制备利口清含漱液有利于酸性成分的溶出，不利于碱性成分的溶出。

利口清含漱液；山泉水；绿原酸；总生物碱

利口清含漱液，山西华元医药生物技术有限公司生产，由金银花、北豆根两药配伍制成，有清热解毒、消肿祛瘀、祛风止痛之功，对胃火炽盛引起的牙龈炎、牙周炎患者的牙龈出血、口臭等症状有较好的疗效［1-2］。金银花具有清热解毒、疏散风热的功效，用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等病症。其抑菌的主要成分为绿原酸类化合物，含量测定指标成分为绿原酸［3-5］。北豆根具有清热解毒、祛风止痛的功效，用于治疗咽喉肿痛、热毒泻痢、风湿痹痛，主要成分为生物碱［6-7］。明代缪希雍在《炮炙大法》的煎药则例中提到：“凡汤液，一切宜用山泉之甘冽者，次则长流河水，井水不用。”［8］张仲景的《伤寒杂病论》中也有山泉水煎煮中药的记载［9］，但山泉水相关现代研究文献报道很少。因该制剂以其中的酸碱成分发挥作用，考虑到不同提取溶剂对成分溶出率的差异，故选择不同的水作为提取溶剂，探究溶液对其主要成分的影响。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器

Thermo Fisher Scientific U3000高效液相色谱仪（美国赛默飞公司）；DV215CD型1/100000分析天平（美国奥豪斯仪器公司）；Ultra-3660紫外分光光度计（北京普源精电科技有限公司）；Heal Force超纯水仪（NW Ultra-pure Water System）。

1.2 试药

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花，北豆根为防己科植物蝙蝠葛Menispermum dauricum DC.的干燥根茎，以上药材均购自北京同仁堂药店，经山西中医学院中药学院张朔生教授鉴定为正品。

绿原酸对照品（批号140601，成都普菲德生物技术有限公司）；蝙蝠葛碱对照品（批号160905，上海融禾医药科技有限公司）；乙腈、磷酸均为色谱纯；无水乙醇、甲醇、氯仿均为分析纯；水为超纯水；山泉水（孝义市丽锦山泉饮料有限责任公司提供）。

2 方法与结果

2.1 样品制备

2.1.1 单煎液I的制备 称取金银花26.25 g，加入自来水210 mL，浸泡1 h。称取北豆根26.25 g，加入自来水210 mL，浸泡4 h。两种药材分别煎煮3次，第1次40 min，第2次30 min，第3次20 min，合并3次煎液，滤过。将二者水煎液分别减压浓缩至相对密度为1.15～1.20（50℃）的清膏，加入乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置过夜。滤过，回收乙醇，分别加水至375 mL，0～4℃放置 48 h，滤过，收集滤液，即得金银花单煎液I、北豆根单煎液I。

2.1.2 单煎液Ⅱ的制备 称取金银花26.25 g，加入山泉水210 mL，浸泡1 h。称取北豆根26.25 g，加山泉水210 mL，浸泡4 h。两种药材分别进行煎煮。按照“2.1.1”项下制备方法制得金银花单煎液Ⅱ、北豆根单煎液Ⅱ。

2.1.3 单煎合并液I的制备 称取金银花26.25 g，加自来水210 mL，浸泡1 h。称取北豆根26.25 g，加自来水210 mL，浸泡4 h。分别煎煮3次，第1次 40 min，第 2次 30 min，第 3次 20 min，合并 3次煎液，滤过。将二者水煎液分别减压浓缩至相对密度为1.15～1.20（50℃）的清膏，加入乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置过夜。滤过，回收乙醇，合并两种水煎液，加水至 375 mL，0～4 ℃放置 48 h，滤过，收集滤液，即得单煎合并液I。

2.1.4 单煎合并液Ⅱ的制备 称取金银花26.25 g，加山泉水210 mL，浸泡1 h；称取北豆根26.25 g，加山泉水210 mL，浸泡4 h，分别进行煎煮。按照“2.1.3”项下制备方法制得单煎合并液Ⅱ。

2.2 绿原酸含量测定

2.2.1 色谱条件 C18色谱柱（C18烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测波长327 nm；柱温25℃；体积流量1.0 mL/min；流动相乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；理论塔板数按绿原酸计算，应不低于1 000。色谱图见图1、图2。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷真空干燥24 h的绿原酸对照品4.20 mg，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成含绿原酸0.084 mg/mL的溶液，即得对照品溶液（10℃以下密封保存）。

图1 绿原酸对照品HPLC图谱

图2 绿原酸供试品HPLC图谱

2.2.3 供试品溶液的制备 依次精密量取“2.1”项下制备的金银花单煎液Ⅰ、Ⅱ以及单煎合并液Ⅰ、Ⅱ各10 mL，滤过。精密量取续滤液1 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。

2.2.4 供试品含量测定 精密吸取“2.2.2”项下所制得的对照品溶液以及“2.2.3”项下所制得的4份供试品溶液各 10 μL，在“2.2.1”项色谱条件下，分别平行测定2次，计算绿原酸含量的平均值。测定结果见表1。组间采用LSD法进行统计学分析，结果显示供试Ⅰ与Ⅱ之间、Ⅲ与Ⅳ之间绿原酸的含量差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 绿原酸含量测定结果

由表1可知，山泉水单煎金银花绿原酸含量高于自来水单煎液，并且单煎合并液亦是山泉水煎煮绿原酸含量较高，由此可见山泉水有利于酸性成分的溶出。

2.3 北豆根总生物碱含量测定

2.3.1 对照品溶液的制备 称取干燥至恒重的蝙蝠葛碱对照品12.5 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，即得浓度为0.5 mg/mL的对照品溶液。

2.3.2 溴甲酚绿缓冲液的制备 精密称取溴甲酚绿0.125 g，加入0.05 mol/L的NaOH溶液50 mL使溶解；精密称取邻苯二甲酸氢钾2.55 g，置100 mL烧杯中，加入50 mL蒸馏水搅拌使其充分溶解。将上述两种溶液混合，移入250 mL容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，pH4.05，备用。

2.3.3 测定波长的选择 精密量取对照品溶液和北豆根单煎液I、Ⅱ各2 mL，分别置于内有15 mL氯仿的分液漏斗中，加入溴甲酚绿缓冲液4 mL，振摇，静置30 min，取氯仿层测定吸光度，以溴甲酚绿缓冲液饱和的氯仿液为空白对照。在200～500 nm波长范围内进行波长扫描，结果显示在415 nm处均有最大吸收峰，故以415 nm作为测定波长。

2.3.4 线性关系的考察 精密量取“2.3.1”项下制备的蝙蝠葛碱对照品溶液 1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL，分别置于 10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，制成一系列浓度的对照品溶液。各精密量取2 mL分别按照“2.3.3”项下制备并测定吸光度，以溶液浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为：A=5.794C+1.142 9，R2=0.999 1（n=6，包括原浓度）。结果表明，在0.05～0.5 mg/mL浓度范围内，蝙蝠葛碱浓度与吸光度呈良好的线性关系，结果见图3。

图3 蝙蝠葛碱标准曲线

2.3.5 精密度试验 取“2.3.1”项下制备的对照品溶液，按“2.3.3”项下方法进行5次平行实验，测定含量，吸光度RSD为1.05%，表明精密度良好。

2.3.6 稳定性考察 精密吸取同一批北豆根单煎液Ⅱ2 mL，按“2.3.3”项下方法于 0 、1 h、2 h、8 h、24 h分别进行测定。结果测得吸光度RSD为1.76%，表明样品溶液在24 h内稳定。

2.3.7 重复性试验 取同一批北豆根药材饮片，按“2.1.2”项下方法平行制备5份北豆根样品溶液，按“2.3.3”项下方法进行测定，结果吸光度RSD为0.57%（n=5），表明该方法重复性良好。

2.3.8 加样回收率试验 精密量取已知含量的北豆根单煎液Ⅱ9份，每份1.0 mL，分别精密加入2.3.1项制备的对照品溶液1.0 mL（三个浓度各3份，分别为 0.1 mg/mL、0.3 mg/mL、0.5 mg/mL），精密称定。按“2.3.3”项下方法测定吸光度，计算回收率。结果蝙蝠葛碱平均回收率为99.54%，RSD为0.93%（n=9），表明方法准确。

2.3.9 生物碱含量测定 精密量取按照“2.1”项下方法制备的北豆根单煎液I、Ⅱ，以及单煎合并液I、Ⅱ各2 mL，按照“2.3.3”项下方法分别测定吸光度，计算含量。含量测定结果见表2。

表2 北豆根总生物碱含量测定结果 （μg/g，±s）

表2 北豆根总生物碱含量测定结果 （μg/g，±s）

注：与单煎液Ⅰ比较，1）P＜0.05；与单煎合并液Ⅰ比较，2）P＜0.05

样品 生物碱含量单煎液Ⅰ 6.28±0.21单煎液Ⅱ 6.03±0.181）单煎液Ⅲ 4.60±0.19单煎液Ⅳ 4.08±0.202）

由表2可知，北豆根山泉水单煎液总生物碱含量低于自来水单煎，单煎合并液结果同上，可见山泉水对生物碱的提取率较低。

3 讨论

3.1 实验结果分析

孝义丽锦山泉水为天然碳酸氢钠（小苏打）泉水，就是我们常说的碱性水，经检测PH值约为7.82，属真正的碱性水，用该山泉水煎煮中药有利于酸性活性成分的煎出。另外，该山泉水HCO3-含量高达233 mg/L。重碳酸盐（小苏打）具有促进消化、加快肠胃蠕动、中和胃酸等作用。另外，还能够中和肌肉代谢产生的乳酸，有利尿作用，对慢性胃炎、胃酸过多、胃液分泌过少、便秘等有显著功效。

3.2 含量测定指标成分的选择

大量研究表明，金银花具有抑菌抗炎的作用。

金银花中主要含有有机酸、挥发油和黄酮类物质，其中有机酸类约占6%，以绿原酸和异绿原酸为主［10］，是金银花的主要有效成分［11-12］，而且药典上金银花的含量测定也是以绿原酸为标准，因此该实验以绿原酸为金银花的含量测定指标成分。而北豆根的主要抑菌抗炎成分为生物碱类，其中蝙蝠葛碱含量较多［4］，因此本实验以蝙蝠葛碱为对照测定总生物碱含量。

3.3 含量测定方法的确立

本文参照前期做过的相关实验，利用HPLC法对该制剂指标成分绿原酸进行含量测定［13］。并且通过查阅文献，制定了上述通过紫外分光光度法［4，14-15］测定总生物碱含量的方法。经过方法学验证，该方法精密度高、稳定性好、准确可靠、简便易行，可以作为北豆根总生物碱成分含量的测定方法。

［1］秦立芳，李林可.局部应用牙周抑菌剂治疗急性牙龈炎、牙周炎疗效观察［J］.中国实用口腔科杂志，2009，2（10）：606-608.

［2］姜秋，冯延民，赵玉春，等.利口清含漱液治疗牙周病的临床研究［J］.白求恩医科大学学报，2000，26（3）：275.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：99，221.

［4］杨倩茹，赵媛媛，郝江波，等.金银花与山银花化学成分及其差异的研究进展［J］.中国中药杂志，2016，41（7）：1 204-1 211.

［5］赵国玲，刘佳佳，林丹，等.金银花化学成分及药理研究进展［J］.中成药，2002，24（12）：973-976.

［6］吴美仙，金立群.北豆根的研究进展［J］.中国现代中药，2007，9（9）：35-38.

［7］郑艳春，秦婷，崔雅慧，等.北豆根化学成分及其药理作用的研究进展［J］.中国医药导报，2011，8（13）：9-10，33.

［8］缪希雍撰述；胡晓峰校注.炮炙大法［M］.北京：中国书店，1992：63.

［9］卞华.伤寒杂病论［M］.北京：中医古籍出版社，2012：308.

［10］贺伟.金银花的化学成分及药理作用研究［J］.中国医药导报，2007，4（24）：8-9.

［11］赵国玲，刘佳佳，林丹，等.金银花化学成分及药理研究进展［J］.中成药，2002，24（12）：973-976.

［12］于生兰，张龙，孙玲等.金银花的研究进展［J］.时珍国医国药，2002，13（8）：498-499，500.

［13］薛非非，李坤，王明芳，等.合煎对利口清含漱液稳定性的影响［J］.中成药，2016（6）：1 402-1 404.

［14］杨静伟，杨晶凡，李二林.紫外分光光度法测定北豆根总生物碱的含量［J］.中国民族民间医药，2013，13（7）：7-8.

［15］陈志歆，张怡，王爱华，等.北豆根气雾剂质量标准研究［J］.中草药，2002，33（11）：999-1 000.

（编辑：张世霞）

Effect of spring water and normal water on components in decoction of Likouqing mouthwash containing

He Meijing，Xue Feifei，Wang Mingfang，Zhang Shuosheng
（Shanxi University of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To explore effect of spring water and normal water on components in decoction of Likouqing mouthwash containing.Method：Single and mixed decoction of lonicera japonica，rhizome menispermi were prepared by spring water and normal water respectively.The contents of Chlorogenic acid and Alkaloids in rhizome menispermi were detected by HPLC，ultraviolet spectroscopy respectively.Result：The outcome of Chlorogenic acid in single decoction and mixed decoction prepared by spring water was higher than that decoction prepared by normal water.The result of Alkaloids was opposite to that of Chlorogenic acid.Conclusion：Spring water is helpful for dissolution of acid ingredient，but it is against to dissolution of alkaline composition.

Likouqing mouthwash containing；spring water；Chlorogenic acid；Alkaloids

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0017-04

何美菁，硕士，E-mail：928988088@qq.com

张朔生，教授，硕士生导师，E-mail：zhangshuosheng@aliyun.com